AO DE LA INTEGRACIN NACIONAL Y EL RECONOCIMIENTO DE NUESTRA DIVERSIDAD UNIVERSIDAD NACIONAL FEDERICO VILLARREAL FACULTAD DE TECNOLOGA MDICA E.

.P LABORATRIO Y ANATOMA PATOLGICA

PRCTICA 6
PREPARACION DE MEDIOS DE CULTIVO

Objetivo

Lograr la preparacin de los diferentes medios de cultivo utilizados en bacteriologa. Para que estos cumplan los requerimientos adecuados, evitar la contaminacin y el dao de los componentes tanto nutritivos como selectivos del medio en preparacin.

Materiales

1 Baln de 500 mL 1 Baln de 250 mL 1 Probeta graduada de 500 mL 1 Esptula 1 Trpode Guantes para objetos calientes 1 Rejilla para mechero 10 tubos 15 x 125 estriles Agar tripticasa soya 10 ml de sangre de carnero Caldo tripticasa soya 10 Placas Petri 100 x 15

Procedimiento general:

Pesado de los ingredientes Disolucin Esterilizacin Vertido en placas o Preparacin de medios en tubos

Recomendaciones Antes de:

El material de vidrio debe estar completamente limpio y libre de sustancias detergentes. Usar un baln que tenga el doble de volumen de la cantidad a prepararse.

Pesado de los ingredientes

Pesar, siguiendo las indicaciones del fabricante. Cerrar hermticamente la tapa para evitar as la hidratacin del medio de cultivo.

Agregar el volumen de agua destilada necesaria . Agitar lo suficiente para conseguir una suspensin homognea.

Disolucin

En caso de un medio que contenga agar:

Se disuelven con ayuda del calor. Se reconoce la disolucin completa cuando las partculas ya no se adhieren a las paredes del matraz
Los medios son sensibles al calor, CALENTARLOS SOLO LO NECESARIO.

Si los medios no contienen agar.

Se disuelven sin ayuda del calor. Solo con agua fra.

Preparacin de medios en tubos

Si se utilizan medios lquidos (caldos), semislidos o slidos, debemos de distribuirlos antes de esterilizarlos. Los medios lquidos y semislidos se almacenan en forma vertical, y los slidos se dejan enfriar en un posicin semi inclinada o inclinada.

Esterilizacin
Se siguen las instrucciones del fabricante. Generalmente las esterilizaciones se realizan en el autoclave.

Vertido en placas
Se debe esperar a que el medio se encuentre entre unos 45 -55 C, esto para evitar la condensacin del agua en las tapas. Agitar el recipiente en forma circular, para asegurarnos de tener una mezcla uniforme Flamear la boca del recipiente , agregar de 16 a 18 ml en c/placa Si se hubiesen formado burbujas, flamearlas inmediatamente con el mechero de Bunsen. Una vez fras, almacenar invertidas en la refrigeradora para su posterior uso. Colocar una para realizar el control de calidad en estufa 37x 24h

MEDIOS PREPARADOS EN LA PRACTICA

Agar TSA, Agar Sangre, Agar Chocolate, Caldo TSB

Caldo TSB

Preparar 50 ml. Pesar 1,5 gr de TSB Disolverlo en 50 ml de agua destilada

Agregar los 1,5 gr de TSB en el baln

Agregar los 50 ml de agua y disolver

Una vez disuelto, dispensar 3 ml en cada tubo y acondicionarlos para su posterior esterilizacin.

Pesamos 12 g de TSA y lo colocamos en un matraz.

Diluimos en 300 mL de agua destilada y mezclamos. Vertimos el agua destilada por las paredes; para as retirar y diluir lo que este pegado a las paredes del matraz.

Calentar hasta ebullicin, agitando constantemente

Utilizamos un pauelo que nos proteja del calor; adems previamente hemos tapado la boca del matraz con algodn para evitar la contaminacin de la solucin.

Autoclavar a 121C (15 lb de presin) por 15 minutos

Sacar de la autoclave y dejar enfriar a 50C.

Cerramos inmediatamente las placas para evitar la contaminacion del medio.

Agar Sangre

Usaremos como base el TSA preparado (nos quedaron 200 ml) Lo haremos al 10% con sangre humana (extrada con una jeringa)
Obtener los 10 ml de sangre.

Teniendo el TSA a 45C, aadiremos los 10 ml de sangre. Homogenizar, evitando la formacin de burbujas Verter en placas estriles y dejar enfriar

Agar chocolate

Calentar el agar sangre a la llama del mechero, agitarlo suave y constantemente hasta q tome un color chocolate, enfriar a 50C y plaquear.

Todos los medios preparados los incubamos 37C X 24 horas para realizar un control de calidad y determinar si existe o no contaminacin bacteriana.
Descartada la presencia d m microorganismos, procedemos a almacenar la placas en refrigeracin.