Universidad de Carabobo Escuela de Bioanlisis Asignatura: Bioqumica Clnica Endocrinologa

Evaluacin Funcional del Pncreas Endocrino

Lic. Hember Vicci

Ubicacin Anatmica del Pncreas

1869: Paul Langerhans describe dos sistemas de clulas a nivel del pncreas.
El primero se encargaba de producir el jugo pancretico El segundo de funcin desconocida, aos mas tarde serian identificadas como los Islotes de Langerhans

Evaluacin funcional del pncreas endocrino

La funcin endocrina del pncreas depende de la secrecin de las hormonas: Insulina, Glucagon y Somatostatina Clulas Alfa glucagon

Clulas Beta
Clulas delta

Insulina
Somastotatina

Clulas PP

Polipptido Pancretico

Tomado de Harvey.(2005) Bioqumica. 3 era edicin

Human Pancreas
Islet of Langerhans

Beta cell Muscle Fiber

Blood vessel

Insulin

Glucose

Insulina
Es una hormona polipeptdica, que coordina el uso de los combustibles en los tejidos, sus efectos metablicos son anablicos: sntesis de glucgeno, triglicridos y protenas.

Sntesis de la Insulina

Acciones Fisiolgicas de la Insulina

Metabolismo de los Carbohidratos

Metabolismo de los Lpidos Metabolismo de las Protenas

Acciones Fisiolgicas de la Insulina

Metabolismo de las Protenas

Incrementa el transporte de aminocidos hacia las clulas Incrementa la sntesis Proteica

Acciones Fisiolgicas de la Insulina

Metabolismo de los Lpidos

Incrementa la formacin de VLDL a nivel Heptico. Favorece el deposito de grasa en el tejido adiposo

Acciones Fisiolgicas de la Insulina Metabolismo de los Carbohidratos Incrementa el transporte de Glucosa hacia el msculo y tejido adiposo Incrementa la sntesis de Glucgeno Heptico y Muscular

Determinacin Bioqumica:

Insulina

Mtodos de determinacin:
ELISA Interferencias: reacciones cruzadas con pro-insulina (30%) Inmunoensayo Enzimtico de Microparticulas (MEIA)

Muestra: Suero Radioinmulgicos (RIA)

Valores de referencia:
Insulina Basal: 5 - 25 U /ml 2 horas corte de 60 mU/ml *50% de los valores de la insulina basal

Pptido C
Pptido C
Secuencia seal

Pptido C

til para el diagnostico de Insulinomas Control de pacientes diabticos que reciben tratamiento con insulina y mide el funcionamiento residual secretorio de las clulas beta de estos pacientes. Se analiza por Radioinmunoanlisis, VR: 1-2 ng/ml

Prueba de tolerancia a la insulina

Consiste en: Determinar los niveles de

glucosa en ayunas -Suministro por va IV de insulina y medicin de los niveles de glucosa a los 30, 60, 90,120 min. Interpretacin: Respuesta normal: reduccin del 50% de la glucosa a los 30 min y retorno a los niveles basales a los 90-120min.

Utilidad: Valoracin de pacientes con RI

HOMA: Indce de insulinoresistencia : Insulina basal x glicemia basal 22.5 = < 2.5

Proporcin normal de insulina/ glucosa: menor de 0.3 Secrecin inadecuada insulina mayor de 0.3 Hipoglicemia.

Glucagon..
Hormona polipeptdica, Junto con adrenalina, cortisol, hormona del crecimiento (hormonas contrarreguladoras) se oponen a la accin de la Insulina.

Estimulacin de la secrecin de Glucagon: glucosa sangunea baja aminocidos Adrenalina

Inhibicin de la secrecin: Glucosa elevada en sangre Insulina

Somatostatina: acta localmente regulando la liberacin de

insulina y glucagon por el pncreas.

Insulina

Glucagon

Pruebas de laboratorio empleadas para evaluar el funcionamiento del Pncreas Endocrino

Glucosa plasmtica en ayunas

Glucosa en orina Glucosa plasmtica posprandial de 2 horas

Glucosa plasmtica tras ingestin de una dosis fija de glucosa

Prueba de tolerancia a la glucosa Niveles de Insulina Prueba de tolerancia a la Insulina Determinacin de cuerpos cetnicos Prueba de Hemoglobina Glicosilada

Determinacin de Anticuerpos y receptores de insulina

Pptido C

Determinacin de glucosa
La glucosa es una aldohexosa, en la que la forma aldehdica est en equilibrio con la forma enodilica ,lo que permite que esta pueda ser reducida y/o oxidada.

CARACTERSTICA FUNDAMENTAL PARA LOS MTODOS DE DETERMINACIN.

Mtodos qumicos:
Mtodos enzimticos

O-toluidina
Hexoquinasa Glucosa oxidasa

Mtodo de hexoquinasa
HK
Glucosa +ATP Glucosa-6-P+ ADP

G6pD Glucosa -6-P +NADP 6-fosfogluconolactona+NADPH

Mtodo glucosa oxidasa

Glucosa +O2 GOD cido Glucnico + H2 O2 Peroxidasa Compuesto coloreado+H2 O2

H2 O2 + cromgeno (fenilalamina fenazona)

Interferencias:
Sustancias reductoras inhiben la oxidacin de los cromgenos La creatinina y cido rico pueden producir un aumento mnimo.

cido ascrbico produce una falsa disminucin de los valores de glucosa.

Usar sueros hemolizados Ciertos medicamentos actan sobre el metabolismo de la glucosa como: AO, diurticos ticidicos, esteroides, anticonvulsionantes.

Consideraciones acerca de las muestras

Suero, plasma, lquidos orgnicos, orina. Ayuna de 8-16 horas La glucosa de sangre capilar es 2 a 3 mg/dl ms elevada que la sangre venosa En perodo posprandial y en nios es ms elevada de 20-30 mg/dl.

Conservacin de la muestra:
Centrifugar la muestra en un plazo no mayor de 30min En caso de no poder ser procesada la muestra de sangre debe utilizarse un conservador :fluoruro de sodio (2 mg por cada ml de sangre) La glucosa es estable en suero o plasma una vez refrigerada por 48 horas.

Variaciones plasmticas de la glucosa.

En individuos sanos los niveles de glucosa varan ligeramente durante el da, intervalo de 45-130 mg/dl ( 2,5-7,2 mmol/l)

Despus de una comida rara vez aumenta por encima de 15 mg/dl

Los individuos sanos mayores de 65 aos presentan niveles elevados de glucosa hasta 180 mg/dl.

Los RN pueden tener glucosa de 20-80 mg/dl Antes de los 5 aos los niveles de glucosa pueden ser 10-15% menores que los adultos.

Valores de referencia : 50-110 mg/dl

Interpretacin clnica :
Hiperglicemias: >110 mg/dl Fisiolgica :ejercicio intenso, perodo menstrual Estrs, Shock traumtico , asfixia, anestesia Diabetes Mellitus Acromegalia, S. Cushing, tiroides Fiebre e infecciones agudas Encefalopatas, Traumatismo cerebral, hemorragias cerebrales Insuficiencia heptica Pancreatitis aguda (Destruccin masiva del pncreas) Diabetes gestacional. Hipoglicemias: < 50mg/dl Posprandial (reactiva) Espontnea (Ayuna)

Neonatal

Glucosa posprandial de 2 horas.

Fundamento fisiolgico : se basa en la capacidad que tiene el organismo de responder frente una carga de CHO en un perodo de tiempo determinado. Consiste en la determinacin de glucosa plasmtica dos horas despus de que el paciente consume alimentos que contengan aproximadamente 100g de CHO. Carga de carbohidratos 2 rebanadas de pan normal y/o integral con mermelada 1 vaso de leche 1 vaso de jugo de naranja

Interpretacin: 2 horas= los valores deben ser similares a los valores obtenidos en ayunas. valores >120 mg/ml: pacientes con DM mal controlada Utilidad clnica: Control metablico de los pacientes con DM Evaluacin del metabolismo de carbohidratos. Desventaja de la prueba: El significado del valor obtenido queda limitado por la ausencia De condiciones controladas como: Cantidad de hidratos de carbono Edad del paciente Infecciones

Prueba Oral de Tolerancia a la Glucosa (PTOG) Fundamento:

Esta basada en conocer la respuesta del organismo frente a una sobrecarga de carbohidratos en un periodo de tiempo determinado. La sobrecarga de glucosa va ser absorbida a nivel intestinal, pasando luego a ser metabolizada por accin de la Insulina y posteriormente sufrira su excrecin si llegase a sobrepasar el umbral renal.

Absorcin, Metabolismo y Excrecin de la Glucosa

Prueba Oral de Tolerancia a la Glucosa (PTOG)

Diagnstico Qumico definitivo de Diabetes Mellitus Importante: Prueba DIAGNSTICA , NO se le debe realizar a pacientes Diabticos conocidos
Utilidad Estar indicada a: 1. Pacientes que presente sntomas clnicos de diabetes

2. Pacientes Con historia familiar de diabetes pero sin sintomas de la enfermedad

3. Pacientes embarazadas que presenten glucosuria y aquellas con fetos macrosmicos, cuyos nios al nacer pesan mas de 4.5 kg.

Condiciones para la realizacin del Test de Tolerancia a la glucosa

Requisitos (Asociacin Americana para la diabetes (ADA).1997) Ayuno de 8-16 horas, slo se le permitir tomar agua El paciente puede y tener actividad fsica habitual. Los dias anteriores a la prueba No debe estar recibiendo hipo o hiperglicemiantes No debe sufrir ninguna enfermedad endocrina (Acromegalia, Hipertiroidismo, S Cushing) El paciente debe ser ambulatorio Debe suspender tres das antes en lo posible la administracin de medicamentos (corticoides, salicilatos, anticonvulsionantes)

Procedimiento para la realizacin del Test de Tolerancia a la glucosa o Sobrecarga oral de la glucosa
Obtener una muestra en ayuna de sangre y orina para determinar glucosa plasmtica y glucosuria basal. Administrar por va oral una dosis de 75 g de glucosa disuelta en 375 ml de agua (adultos) en nios 1.75 gr/kg llevando a una concentracin de 20 g% con agua y en mujeres embarazada 75 g en 400ml de agua.

Una vez finalizada la ingesta de solucin glucosada,

determinar a los tiempos correspondientes la glucosa plasmtica y la glucosuria (sangre y orina).

Requisitos (Asociacin Americana para la diabetes ADA).1997)

DIAGNSTICO

AYUNAS
MENOR DE 110 mg/dl

NORMAL

GLUCEMIA EN AYUNAS ALTERADA (GAA)

110-125 mg/dl

DIABETES MELLITUS

IGUAL O MAYOR A 126 mg/dl

Interpretacin de la Curva de Tolerancia a la Glucosa

DIAGNSTICO

A las 2 horas
MENOR DE 140 mg/dl

NORMAL

Intolerancia a la glucosa

140-199 mg/dl

Diabetes

MAYOR DE 200 mg/dl

Prueba intravenosa a la glucosa (PTIVG):

Indicada: pacientes con mala absorcin de la glucosa Dosis: 0,5 g/kg de peso Glicemia basal y a los 120 min Interpretacin: el valor de glicemia a los 120 min debe ser Igual o inferior al valor basal.

Prueba de tolerancia a la glucosa en embarazadas

Estar indicada en todas aquellas embarazadas que presenten los siguientes factores de riesgo de diabetes gestacional: Obesidad o sobrepeso Antecedentes familiares de DM tipo 2 Antecedentes de diabetes gestacional Edad mayor de 25 aos Antecedentes de RN macrosmicos ( 4 kg o ms) Antecedentes de abortos repetidos Presencia de glucosuria Hipertensin arterial Antecedentes de dislipidemias Antecedentes de hiperinsulinemia Antecedentes de sndrome de ovario poliqustico

Test O `Sullivan

Consiste en la valoracin plasmtica venosa una hora Despus de la ingesta oral de 50 g de glucosa.

Si las cifras son superiores a 140 mg/dl se considera El test de O `Sullivan + y se debera realizar una PTOG Para confirmar el diagnostico de DG.

Criterios de anlisis Glicemia <105 mg/dl 75g de glucosa Glicemia basal y glicemia a las dos horas
Criterio diagnstico Diabetes Gestacional Ayunas Normal <105 mg/dl 2 horas < 140 mg/dl 140 mg/dl

D gestacional 105 mg/dl

La importancia del diagnstico de la DG no slo se limita al conocimiento del efecto deletreo sobre la embarazada y su producto sino que constituye un importante factor de riesgo para la aparicin de DM tipo 2 en la mujer.

CRITERIOS DIAGNOSTICOS DE DIABETES GESTACIONAL (ADA)

Glucemia en ayunas

105 mg/dl Repetir 105 mg/dl

< 105 mg/dl

24 a 28 sem PTOG

< 105 mg/dl

Anormal Normal
Factores de Riesgo

Diabetes Gestacional

Anormal

Repetir PTOG en 4 a 6 sem

Hemoglobina glicosilada
Glicacin:
Adicin monoenzimtica del grupo amino residual de las protenas al azcar.
Grupo amino N-terminal de la Valina + Glucosa Adimina

HbA + Glucosa

PreHbA1c

HbA1c

HbA1c: 3-6% Hb total Utilidad: Evala los niveles promedios de la glucosa en los ltimos 120 das.

Seguimiento y control del paciente con DM

Formation of Glycosylated Hemoglobin 2%

4%

4% 40

Hiperglycemia

1
. ..

20 Days

60 . . :. .. :: . . ... . . . : 80 . . . . . . :.. . . :. . . . . . : . ..120 .. . . . . .. 14% ..: . . .:. : .. . .:. : . . VR: 4.5 6 % . .

14%

Pacientes diabticos puede alcanzar hasta 20%

Mtodos de determinacin Cromatografa (HLPC) y de intercambio inico Inmuoqumicos ( turbidimtricos) Muestra: sangre total con anticoagulante Valores de referencia: HbA1: 4.5-7.0% HbA1c: 4-6% Paciente con DM controlados: 7-9% Meta < 6 %

Anticuerpos y receptores de insulina Anticuerpos antiinsulina Anticuerpos antirreceptores de insulina Anticuerpos contra clulas Beta.
Mtodos de Determinacin: Inmunoenzimticos Inmunofluorescencia Indirecta

Utilidad: Diagnstico diferencial de Diabetes Mellitus tipo1

La microalbuminuria (MA) se define como las elevaciones persistentes de albmina en la orina entre 30 y 300 mg/da (20 a 200 g/min). Estos valores son menores a aquellos detectados con las tiras reactivas para la deteccin de protena en orina, lo cual no resulta positivo hasta que la excrecin de protena excede los 300 a 500 mg/da.

Microalbuminuria y Proteinunia

Excrecin Urinaria de albmina

Categora Orina parcial (ug / mg de creatinina) Recoleccin de orina de 4 horas o nocturna ug/min Recoleccin de orina de 24 horas mg/24 horas.

Normal Microalbuminura Macroalbuminuria

< 30 30-299 >/-300

< 20 20-199 >/-200

< 30 30-299 >/-300

Factores de riesgo para la diabetes Clnicos

Alta ingesta de grasa, particularmente saturada Alta ingesta calrica

Sedentarismo
Grupos tnicos de alto riesgo: afroamericanos,latinos, afroasiticos Edad > de 45 aos o 30 con IMC > 25Kg/m2 Antecedentes familiares de DM tipo 2 en familiares en pimer grado Obesidad visceral

Hipertensin arterial
Sndrome de ovario poliqustico Diabetes gestacional

Metablicos
Glicemia en ayuna alterada Intolerancia a la glucosa Dislipidemia, particularmente triglicridos >250 mg/dl y HDL < 35 mg/dl Prueba de tolerancia a las grasas anormal Niveles elevados de insulina basal HOMA 2.5

Hiperuricemia
Microalbuminuria