PCR

(polymerase chain reaction) Reaccin en cadena de la polimerasa.

Thompson & Thompson; Gentica en Medicina 7 Edicin, Capitulo 4 (Herramientas utilizadas por la gentica molecular humana, pagina 50 52).

PCR
(polymerase chain reaction) Reaccin en cadena de la polimerasa.

Funcin:
- Generar cantidades ilimitadas de una secuencia de inters en pocas horas. - Anlisis molecular de enfermedades genticas. - Amplificar partes de un gen (exones) utilizando <cebadores> del gen normal. Puede efectuarse desde: Clulas en un enjuague bucal. De una nica clula de un embrin de 4 a 8 cels. Del esperma obtenido de una vagina de una victima de una violacin. De una sola gota seca de sangre.

Thompson & Thompson; Gentica en Medicina 7 Edicin, Capitulo 4 (Herramientas utilizadas por la gentica molecular humana, pagina 50 52).

PCR
(polymerase chain reaction) Reaccin en cadena de la polimerasa.

Consiste en:
- Amplificacin de un segmento <diana> localizado entre dos oligonucletidos <cebadores>.

- Despus se usa la DNA polimerasa para sintetizar dos nuevas cadenas de DNA usando como plantilla la <diana>.

Thompson & Thompson; Gentica en Medicina 7 Edicin, Capitulo 4 (Herramientas utilizadas por la gentica molecular humana, pagina 50 52).

PCR
(polymerase chain reaction) Reaccin en cadena de la polimerasa.

Consiste en:
Repeticin de ciclos de: - Desnaturalizacin con calor. - Hibridacin de los cebadores. - Sntesis enzimtica de DNA.

Amplificacin exponencial de la secuencia <diana> (2>4>8>16>32 etc).

Thompson & Thompson; Gentica en Medicina 7 Edicin, Capitulo 4 (Herramientas utilizadas por la gentica molecular humana, pagina 50 52).

PCR
(polymerase chain reaction) Reaccin en cadena de la polimerasa.

PCR con transcriptasa inversa: (RT-PCR; reverse transcriptase PCR)

Funcin:

- Anlisis de muestras pequeas de RNA.

Thompson & Thompson; Gentica en Medicina 7 Edicin, Capitulo 4 (Herramientas utilizadas por la gentica molecular humana, pagina 50 52).

PCR
(polymerase chain reaction) Reaccin en cadena de la polimerasa.

PCR con transcriptasa inversa: (RT-PCR; reverse transcriptase PCR)

Consiste en:

- Sintetizar un cDNA de cadena nica a partir del mRNA de inters con una transcriptasa inversa. - Se aaden <cebadores> de PCR y DNA polimerasa. - Uno de los <cebadores> -ceba- la sntesis de la segunda cadena de DNA que en su forma de doble cadena sirve de <diana>.

Thompson & Thompson; Gentica en Medicina 7 Edicin, Capitulo 4 (Herramientas utilizadas por la gentica molecular humana, pagina 50 52).

PCR
(polymerase chain reaction) Reaccin en cadena de la polimerasa.

PCR cuantitativa o PCR en tiempo real (qPCR):

Funcin: - Determinar la cantidad de una secuencia de DNA en una muestra.

Thompson & Thompson; Gentica en Medicina 7 Edicin, Capitulo 4 (Herramientas utilizadas por la gentica molecular humana, pagina 50 52).

PCR
(polymerase chain reaction) Reaccin en cadena de la polimerasa.

PCR cuantitativa o PCR en tiempo real (qPCR):

Aplicaciones: Discriminacin allica. Expresin gnica. Deteccin de SNPs (single nucleotide polymorphism). Deteccin de patgenos / microorganismos (presencia/ausencia). Cuantificacin de OGMs (organismos genticamente modificados). Control de eficacia de farmacos.

Thompson & Thompson; Gentica en Medicina 7 Edicin, Capitulo 4 (Herramientas utilizadas por la gentica molecular humana, pagina 50 52).

Donador de fluorescencia. Consiste en: - La fluorocromo marcadas con de Utilizar sondas aceptorquepuede Al llegarpolimerasa extremola de El ADN al punto ense medida Un detector realiza la desplaza del el no 5 sobre la cadena deDNAlaliberado. fluorocromosde fluorescencia, sonda se (el donador) es entonces absorber la esta emisin (sondas la sonda ha hibridado,de sintetizando estas son hibridacin), la cadenala cantidad hidroliza. fluorescencia del donador por que es proporcional a complementaria l partir de un oligonucletidos.ay la representa estar alejado de de ADN presente, fragmento de ADN que sirve de espacialmente. grficamente. molde. *Estas sondas tienen una secuencia complementaria aparte de la *Termociclador. secuencia que se quiere amplificar

Aceptor de fluorescencia.

Gracias.