Mtodo analtico basado en la reaccin antgeno- anticuerpo

Inmunoensayoes una prueba que usa complejos de anticuerpo y antgeno como medio para generar un resultado perceptible. Entonces, uninmunoensayoes una prueba que utiliza inmunocomplejoscuando seunen los anticuerpos y los antgenos. Los Inmunoensayos se diferencian de otros tipos de pruebas delaboratorio, como las pruebas colorimtricas, ya que usan complejosanticuerpo:antgeno para generar una seal que pueda medirse. Enoposicin, la mayora de las pruebas de rutina de qumica clnica utilizanreacciones qumicas entre el reactivo (solucin de sustancias qumicas uotros agentes) y la muestra del paciente para generar un resultado de laprueba.

Inmunoensayo: Anticuerpos, Antgenos y Analitos Los anticuerpos se producen como partede la respuesta inmunolgica del cuerpo para protegerse. Es tambin elcaso, por ejemplo, de algunos test de inmunoensayos para determinar lapresencia de anticuerpos contra las molculas de cncer. As, si losanticuerpos estn presentes, significa que las clulas invasoras decncer tambin lo estn.Antgeno es la sustancia que el cuerpo esttratando de combatir(eliminar o reducir) preparando una respuesta inmunolgica. Algunos testde inmunoensayos determinan la presencia de antgenos directamente,en vez de buscar anticuerpos. En un anlisis para medir la concentracinde una droga teraputica, por ejemplo, la droga es el antgeno que se uneal anticuerpo. Una excepcin es el caso de las enfermedades autoinmunes, donde el cuerpo produceanticuerpos para protenas que existen naturalmente en vez de sustancias extraas. Analito es todo lo que se mide en una prueba de laboratorio.En el inmunoensayo, el analito puede ser tanto un anticuerpo comoun antgeno

Sustancias que pueden ser reconocida por reaccin con ella de anticuerpos. Estructuras qumicas muy diferentes: protenas, lpidos, polisacridos, cidos nucleicos, etc. Cada antgeno suele presentar varios determinantes antignicos o epitopos.

Nativos. Se obtienen directamente a partir del patgeno. Ej. Una protena purificada Recombinantes Pptidos sintticos

La inmunizacin de animales inyectando antgeno por la va adecuada, en dosis adecuadas y en el adyuvante adecuado, (inmungeno)

produccin de anticuerpos con diferentes afinidades y con especificidad por diferentes determinantes antignicos (anticuerpos policlonales).

Todos los inmunoensayos requieren el uso de material marcadopara medir la concentracin de antgeno o anticuerpo presente.Una marca es una molcula que reacciona como parte del ensayo,por lo tanto un cambio en la seal puede medirse en la sangre-reactivo.Los ejemplos de marcas incluyen un compuesto radioactivo, unaenzima que hace que cambie el color de una solucin, o unasustancia que produzca luz. La marca puede aplicarse durante lafabricacin del reactivo tanto al anticuerpo (Ab*, ver Figura 1-5)como al antgeno (Ag*, ver Figura 1-6). Las tecnologas deinmunoensayoutilizan diferentes formatos para distinguir elcomplejo antgenoanticuerpo de la marca libre no unida.

La quimioluminiscencia es la propiedad de algunas sustancias qumicas para emitir luz. Estas sustancias son, por ejemplo, las que se emplean para los nmeros de los relojes que brillan en la oscuridad, o las que de forma natural tienen algunos animales, como las lucirnagas. Tambin tienen su aplicacin en la medicina, por ejemplo hace poco se utiliz para saber si se tiene cncer. Generalmente la quimioluminiscencia se emplea para detectar la existencia de sustancias qumicas por ejemplo, queremos saber si un fragmento de hgado tiene una protena que caracteriza al cncer, se baa la muestra con un anticuerpo que se pega a esa protena. El anticuerpo va combinado con una sustancia quimioluminiscente. Se examina el espcimen al microscopio y, si se aprecia que brilla con luz propia, es que contiene la protena. Como ve, la quimioluminiscencia es algo propio de los laboratorios. No hay ninguna prueba que se aplique a los enfermos que se base en la quimioluminiscencia

Es el fenmeno que ocurre en las lucirnagas y consiste en:

una reaccin qumica con un muy alto rendimiento energtico produce una molcula potencialmente fluorescente. (No hay excitacin luminosa como en la fluorescencia) Usualmente son reacciones redox catalizadas por enzimas que involucran O2 o H2O2 y un sustrato orgnico oxidable. La energa se libera como luz visible.

Se utiliza para detectar concentraciones muy bajas de molculas, menor lmite de deteccin que en los mtodos isotpicos y en otros enzimticos.

Para inmunoensayos se marcan Ag o Ac con sustancias que participan en la reaccin quimioluminiscente (luminol, peroxidasa), y la quimioluminiscencia es el paso final en la deteccin. Se hacen en homogneas fase slida, o en tcnicas