Colegio San Ignacio

Biotecnologa

Profesor Luis Lara

Qu es la Biotecnologa? Es todo uso comercial o alteracin de 0rganismos, clulas o molculas biolgicas para alcanzar metas prcticas especficas.

La biotecnologa es tan antigua como la civilizacin misma.

-La Biotecnologa usa la Ingeniera gentica, es decir, la modificacin del material gentico para alcanzar metas especficas.
- A los organismos creados por ingeniera gentica se les han suprimido, agregado o modificado GENES.

Objetivos de la Biotecnologa.
1.- Aprender ms acerca de los procesos celulares, entre ellos la herencia y la expresin de los genes.

2.- Ofrecer una mejor comprensin y tratamiento de las enfermedades, en particular de los trastornos genticos.

3.- Generar ventajas econmicas y sociales, como la produccin eficiente de molculas biolgicas valiosas y mejores plantas y animales para la agricultura y ganadera respectivamente.

La Ingeniera gentica usa como herramienta la Tecnologa del ADN recombinante.

Contiene genes o partes de genes de distintos organismos y en algunos casos de especies distintas.

El ADN recombinante
Se puede cultivar en grandes cantidades en bacterias, virus, levaduras y luego transferirlas a otras especies, por ejemplo, plantas y animales.

El animal o planta que expresa el ADN que ha sido modificado u obtenido de otras especies se conoce como TRANSGNICO.

Cmo se recombina el ADN en la naturaleza?

Reproduccin sexual

Transformacin bacteriana

Virus transfieren ADN entre bacterias y especies eucariticas

1.- Reproduccin sexual - Recombinacin en Meiosis I - El cromosoma homlogo materno intercambia genes con el cromosoma homlogo paterno. -Se generan nuevas combinaciones de alelos distintos a las de los dos progenitores - Cada ovocito y espermatozoide producido es RECOMBINANTE

2.- Transformacin bacteriana. - Incorporacin de ADN libre del ambiente. - El ADN libre puede ser parte del cromosoma de otra bacteria de la misma especie o de otra distinta. - Otra forma de transformacin ocurre cuando bacterias capturan diminutas molculas circulares de ADN llamadas PLSMIDOS

- Muchos tipos de bacterias tiene plsmidos, igual que hongos, algas y protistas - Tienen entre 1.000 y 100.000 nucletidos de longitud.

-Las bacterias pueden contener docenas o cientos de copias de un plsmido. - Al morir liberan los plsmidos al ambiente, donde son capturados por bacterias de la misma especie o de una diferente. - Las bacterias vivas pueden transmitir una copia de un plsmido directamente a otras bacterias vivas o a otras especies, como levaduras.Observacin: El cromosoma bacteriano contiene todos los genes que la clula necesita normalmente para la supervivencia bsica. Los genes en plsmidos permiten a bacterias que los poseen crecer en ambientes nuevos

Recombinacin en bacterias.Bacteria Cromosoma bacteriano

Plsmido

1 micrmetro

Adems de su cromosoma circular grande, por lo comn, las bacterias tienen pequeos anillos de ADN llamados PLSMIDOS, que suelen contener otros genes tiles.

a) Transformacin con fragmento de ADN

Cromosoma bacteriano

b) Transformacin con plsmido

Bacteria
Cromosoma bacteriano

Fragmentos de ADN

Plsmido

El plsmido se replica en el citoplasma

El fragmento de ADN se incorpora al cromosoma

3.- Virus transfieren ADN entre bacterias y especies eucariticas. -Virus transfiere su material gentico a las clulas durante su infeccin. - Durante la infeccin, la secuencia de ADN viral se incorpora a uno de los cromosomas de la clula husped. Puede permanecer ah meses o aos. - Dentro de la clula infectada, los genes virales se replican y dirigen la sntesis de protenas virales cada vez que esta se divide. - Genes replicados y nuevas protenas se ensamblan dentro de la clula y forman nuevos virus que son liberados para infectar otras clulas. Estos nuevos virus pueden incorporar errneamente genes humanos al genoma viral. Se crea un VIRUS RECOMBINANTE. - Los virus pueden infectar clulas bacterianas, animales o vegetales transfiriendo parte del ADN de la clula anterior, traspasando las barreras de la especie para infectar clulas.-

Genes virales (rojos)

Protena viral (azul)

2. El virus entra en la clula husped

1. El virus se fija a una clula husped susceptible 5. Se ensamblan nuevos virus; algunos pueden tener genes de la clula husped.

3. El virus libera sus genes en el citoplasma; los genes virales se incorporan al genoma de la clula husped

6. La clula husped revienta y deja salir virus recin ensamblados

4. Los genes virales contienen el cdigo de la sntesis de protenas virales y de copias adicionales de los genes virales

Cmo se recombina el ADN en laboratorios de ingeniera gentica?

- A travs de enzimas de restriccin que cortan el ADN en secuencias especficas de nucletidos. -Se usan para buscar genes especficos. - Cortan el ADN en fragmentos pequeos y fciles de manejar. - Son producidas por bacterias. - Se unen a ciertas zonas del ADN.

Ejemplo: -E. coli EcoRI corta fragmentos de ADN.

AATGCTTAGAATTCGATTTG TTACGAATCTTAAGCTAAAC
EcoRI se une a secuencia GAATTC y forma dos fragmentos de ADN

AATGCTTAG TTACGAATCTTAA

AATTCGATTTG GCTAAAC

-Eco RI realiza un corte escalonado a travs de la doble hlice de ADN -Deja una pequea regin de ADN en extremos cortados. - En la naturaleza las enzimas de restriccin defienden a bacterias contra infecciones virales cortando el ADN viral invasor

- Si se incuba ADN con enzimas de restriccin se obtienen fragmentos de ADN ms pequeos con secuencias conocidas en sus extremos. -Estos fragmentos sirven para generar una coleccin de ADN recombinante conocida como BIBLIOTECA. - Se puede insertar un ADN extrao en una virus o plsmido para producir una biblioteca de ADN recombinante. Estos organismos o estructuras especializadas son los llamados: VECTORES.

Ejemplo: Si se introduce un plsmido recombinante en una bacteria, esta replica el plsmido recombinante cada vez que se divide.
Si se cultiva una bacteria con un plsmido deseado, se produce el ADN recombinante necesario.

Cmo se realiza la insercin?

1.- Aislar el gen de un organismo. Se corta con EcoRI para producir fragmentos de ADN ms pequeos Todos tienen la misma secuencia de nucletidos en los extremos: TTAA y AATT. 2.- El ADN del vector de corta con EcoRI. Los extremos de ADN del vector y del organismo deben ser complementarios.

3.- Los fragmentos de ADN del vector se combinan con fragmentos de ADN del organismo. 4.- Se agrega ADN ligasa a la mezcla. La ligasa une el ADN vector con el ADN del organismo y crea una molcula de ADN recombinante. 5.- El ADN recombinante se agrega a un cultivo de bacterias. Mediante transformacin, la bacteria incorpora ADN recombinante

6.- Cada bacteria contiene una molcula de ADN recombinante. Se cultivan bacterias y se obtienen millones de copias de las molculas de ADN recombinante.

Observaciones: -Cada bacteria modificada genticamente contiene solo una pequea parte del genoma del organismo original, pero las bacterias en conjunto poseen el genoma completo, el que recibe el nombre de Biblioteca de ADN

-La biblioteca de ADN es un conjunto de miles de millones de bacterias genticamente modificadas en un tubo de ensayo.
- Para identificar un gen especifico se debe encontrar bacterias con secuencia especifica de genes y aislarlo. Esto es conocido como clonar genes.-

Actividad.

Responda las siguientes preguntas en su cuaderno.

1.- Describa tres formas naturales de recombinacin gentica y comente acerca de las semejanzas y diferencias entre la tecnologa de ADN recombinante y estas formas naturales de recombinacin gentica 2.- Qu es un plsmido? Qu papel desempean los plsmidos en la transformacin bacteriana? 3.- Qu es una enzima de restriccin? Cmo se usan las enzimas de restriccin para empalmar un fragmento de ADN humano dentro de un plsmido? 4.- Qu es una biblioteca de ADN? Describa brevemente las etapas de la creacin de una biblioteca de ADN del genoma de un ratn.

Cmo investigar genes especficos?

Crear molculas de ADN recombinante es fcil, pero identificar molculas de ADN recombinantes especificas con genes de inters puede tardar aos. Los genes especficos se pueden estudiar mediante tres mecanismos:

Polimorfismo de la longitud del fragmento de restriccin (RFLP)

Analoga con genes afines de otros organismos

Producto protenico

1.- Polimorfismo de la longitud del fragmento de restriccin (RFLP) -El ADN de dos individuos es similar pero no idntico. -Las diferencias se originan en los fragmentos de ADN de diversa longitud, estos se obtienen por digestin con enzimas de restriccin. - A travs de estos e obtienen los polimorfismos de la longitud del fragmento de restriccin o refleps - Los refleps se separan mediante electroforesis en gel, tcnica en la que los fragmentos de ADN se separan segn su tamao. Estos se pueden identificar posteriormente en las bibliotecas de ADN.

2.- Analoga con genes afines de otros organismos. - Genes clonados se utilizan para buscar genes afines con otros organismos. Ejemplo: -genes hometicos: definen estructuras corporales en organismos animales. - Los genes hometicos que determinan la formacin de estructuras en moscas, tambin lo hacen en humanos, son los llamados interruptores de control maestro. 3.- Producto protenico. -Vectores el gen extrao se transcribe y traduce en la clula transformada. -La actividad de una protena sirve para identificar las clulas que contienen ese gen

Qu aplicaciones tiene la Biotecnologa?

a) Genes clonados suministran ADN para determinar secuencia de genes. Se puede obtener la secuencia exacta de nucletidos de un ADN clonado.

cmo? A travs de la Reaccin en cadena de la polimerasa o PCR

-No precisa un ser vivo. - Permite hacer miles de millones de copias de los genes elegidos con ms rapidez y economa que mediante un cultivo en bacterias. - Se basa en la actividad de la ADN polimerasa

- Intervienen tres componentes: 1.- El ADN con secuencia de nucletidos que desea sintetizar. 2.- Dos secuencias cortas de ADN llamadas INICIADORES 3.- ADN polimerasa

-Iniciadores forman pares de bases con la molcula de ADN original.

- Iniciador se une al comienzo de la secuencia de ADN y el otro al final de la misma secuencia (proceso ocurre a 50 C)
- La ADN polimerasa sintetiza el ADN que est entre los iniciadores

1
Secuencia de ADN

- El ADN producido es analizado para buscar refleps y usarlo para generar nuevas molculas de ADN recombinante

b) La ingeniera gentica revoluciona la agricultura. -Objetivo: producir mejores variedades de plantas de cultivo. a) Se producen mediante la insercin de ADN recombinante por medio de un plsmido presente en bacterias del suelo que infectan plantas. b) Insercin directa de genes en clulas vegetales mediante una pistola de gen que dispara partculas recubiertas de ADN directamente al interior de las clulas - La ingeniera gentica confiere a las plantas resistencia contra enfermedades, insectos y plagas. - La incorporacin de genes en el genoma de las especies permite a las plantas de cultivo resistir los efectos de herbicidas

c) La ingeniera gentica mejora los animales domsticos

-Para crear animales transgnicos el ADN clonado se inyecta en un vulo fecundado. -El vulo, en mamferos se devuelve a una madre sustituta para su desarrollo.

- La progenie se estudia para saber si expresa el gen extrao y si sus descendientes tambin lo expresan al aparearse con otros individuos. Se busca producir animales homocigotos para el gen extrao.

Observacin: El proceso de ingeniera gentica en animales es lento y menos productivo que en plantas de cultivo.

Qu usos tiene la biotecnologa en medicina?

a) Deteccin de defectos genticos.

-Los progenitores potenciales pueden averiguar si son portadores de u trastorno gentico - Se puede diagnosticar a un embrin en una etapa temprana del embarazo

b) Produccin de protenas teraputicas. -La primera protena humana elaborada mediante tecnologa de ADN recombinante fue la insulina. En 1982. - Inicialmente los diabticos usaban la insulina extrada del pncreas de reses o cerdos de matadero. - La diferencias de esta insulina con la insulina humana producan alergia al 5% de los diabticos.

- La hormona de crecimiento humana estuvo disponible a partir de 1985.

- Se utiliza la ingeniera para producir protenas humanas en bacterias y levaduras, pero se aplica tambin a vacas, cerdos conejos, ratas y ovejas para producir diversas protenas humanas teraputicas.

c) Terapia gnica. - Ofrece tratamientos potenciales contra diversas enfermedades como: -Fibrosis qustica - Anemia de las clulas falciformes -Enfermedad de Huntington Defectos en un solo gen

-Cncer -Cardiopatas -Artritis -Asma -SIDA

Defectos en varios genes

- El xito de la terapia gnica es complejo debido a que no siempre es posible incorporar un gen en buenas condiciones de funcionamiento en un gran numero de clulas del paciente.

- El gen incorporado debe expresarse eficientemente de modo que produzcan cantidad suficiente de su protena para ayudar al paciente a vencer la enfermedad

d) Proyecto Genoma Humano.

-Se inici en 1990 por iniciativa de los Institutos Nacionales de Salud y del departamento de energa de Estados Unidos. - Tiene como objetivo establecer la secuencia de nucletidos de cada uno de los aproximadamente 35000 genes humanos.

- En febrero de 2001 dos grupos de cientficos participantes del PGH publicaron independientemente borradores de trabajo de la secuencia del genoma humano.