AMOSTRAGEM, PADRONIZAO E CALIBRAO

A amostragem uma das operaes mais importantes em uma anlise qumica. As anlises qumicas empregam apenas uma pequena frao da amostra disponvel. As fraes de solos arenosos e argilosos, que so coletadas para anlises, devem ser representativas de todo o material. Conhecer quanto da amostra deve ser coletado e como subdividi-la, posteriormente, para se obter a amostra de laboratrio, so vitais no processo analtico.

 Como discutido no anteriormente, um procedimento analtico consiste em vrias etapas importantes. Aps a seleo do mtodo especfico a ser empregado, uma amostra representativa precisa ser coletada. O processo de amostragem envolve a obteno de uma pequena quantidade de material que represente de maneira exata todo o material que est sendo analisado. A coleta de uma amostra representativa um processo estatstico.

TIPOS DE AMOSTRAS E MTODOS

 Os mtodos analticos podem ser classificados de muitas formas diferentes. s vezes distinguimos um mtodo de identificao de espcies, um mtodo qualitativo, de um que determina a quantidade de um consituinte, uma anlise quantitativa. Os mtodos quantitativos, como discutidos anteriormente, so classificados tradicionalmente como: gravimtricos, volumtricos, instrumentais

DIMENSO DA AMOSTRA

 A dimenso da amostra muitas vezes utilizada para classificar o tipo de anlise realizada.

Classificao dos analitos pela dimenso da amostra

A partir da classificao contida na Figura anterior, vemos que a anlise de uma amostra de 1 g de solo utilizada para a determinao de um possvel poluente poderia ser chamada macroanlise, ao passo que a anlise de 5 mg de um p suspeito de ser uma droga ilegal poderia ser uma microanlise.

TIPOS DE CONSTITUINTES

 Os constituintes determinados em um procedimento analtico podem abranger uma enorme faixa de concentrao.

Classificao dos tipos de constituintes pelo nvel do analito

As determinaes de Hg na faixa de ppb a ppm em amostras de 1 L ( 1 mg) de gua de rio podem ser consideradas uma microanlise de um constituinte trao. As determinaes de constituintes trao e ultratrao so particularmente complexas devido presena de interferentes e contaminaes potenciais.

 Em casos extremos, as determinaes devem ser conduzidas em salas especiais, que so mantidas meticulosamente limpas e livres de poeira e outros contaminantes. Um problema geral em procedimentos envolvendo constituintes trao que a confiabilidade dos resultados geralmente decresce drasticamente com a diminuio do nvel do analito. A Figura a seguir mostra como o desvio padro entre laboratrios aumenta medida que o nvel do analito diminui.

Erros interlaboratoriais em funo da concentrao do analito. Observe que o desvio padro relativo aumenta drasticamente medida que a concentrao do analito diminui. Na faixa de ultratrao, o desvio padro relativo se aproxima de 100%.

AMOSTRAGEM E MENUSEIO DA AMOSTRA

 Uma anlise qumica freqentemente realizada em apenas uma pequena frao do material cuja composio seja de interesse. claro, a composio dessa frao precisa refletir to proximamente quanto possvel a composio total do material, se for esperado que os resultados tenham algum valor. O processo pelo qual uma frao representativa coletada denominado amostragem.

 Muitas vezes, a amostragem a etapa mais difcil de todo o processo analtico e a que limita a exatido do procedimento. Essa afirmao particularmente verdadeira quando o material a ser analisado for constitudo por: um grande volume de um lquido no homogneo, assim como um lago, ou um slido no homogneo, como um minrio, um solo ou um pedao de um tecido animal.

A amostragem para uma anlise qumica envolve, necessariamente, a estatstica, uma vez que sero tiradas concluses acerca de uma quantidade muito maior do material a partir de uma anlise que envolve uma pequena amostra de laboratrio.

OBTENO DE UMA AMOSTRA REPRESENTATIVA

 O processo de amostragem precisa assegurar que os itens escolhidos sejam representativos de todo o material ou populao. Por exemplo, nossa populao pode ser de 100 moedas e podemos desejar conhecer a concentrao mdia de chumbo na coleo de moedas. Nossa amostra deve ser composta por cinco moedas. Cada moeda uma unidade de amostragem ou um incremento.

 Para evitar confuso, geralmente os qumicos chamam a coleo de unidades de amostragem ou os incrementos de amostragem de amostra bruta. Para as anlises realizadas no laboratrio, a amostra bruta normalmente reduzida em tamanho para uma quantidade de material homogneo para tornar-se a amostra de laboratrio. A Figura a seguir ilustra as trs etapas comumente envolvidas na obteno da amostra de laboratrio

IDENTIFICAR A POPULAO

COLETAR UMA AMOSTRA BRUTA REDUZIR A AMOSTRA BRUTA PARA UMA AMOSTRA DE LABORATRIO

 A etapa nmero 1 direta, com a populao sendo to diversa quanto uma cartela de frascos contendo tabletes de vitaminas, um campo de trigo, o crebro de um rato ou a lama do leito de um rio. As etapas nmeros 2 e 3 so raramente simples e podem demandar uma boa dose de esforo e engenhosidade. Estatisticamente, os objetivos do processo de amostragem so:

1. Obter um valor mdio que seja uma estimativa sem tendncias da mdia da populao. Esse objetivo pode ser atingido apenas se todos os membros da populao tiverem uma probabilidade igual de estarem includos na amostra. 2. Obter uma varincia que seja uma estimativa sem vieses da varincia da populao, para que os limites de confiana vlidos para a mdia possam ser encontrados e vrios testes de hipteses possam ser aplicados. Esse objetivo pode ser alcanado apenas se toda amostra possvel puder ser igualmente coletada

 Ambos os objetivos requerem a obteno de uma amostra aleatria. Aqui, o termo aleatrio no sugere que as amostras sejam escolhidas de uma maneira casual. Em vez disso, um procedimento randmico aplicado na obteno dessa amostra. Por exemplo, considere que nossa amostra consista em 10 tabletes farmacuticos a serem tirados de 1.000 tabletes de uma linha de produo.

 Uma maneira de garantir uma amostra aleatria escolher os tabletes a serem testados a partir de uma tabela com nmeros aleatrios. Isso pode ser convenientemente gerado a partir de uma tabela de nmeros aleatrios ou a partir de uma planilha de clculo, como mostrado na Figura a seguir:

Gerao de 10 nmeros aleatrios de 1 a 1.000 por meio do uso de uma planilha. A funo nmero aleatrio do Excel [=ALEATRIO()] gera nmeros aleatrios entre 0 e 1. O multiplicador mostrado na documentao garante que os nmeros gerados na coluna B estejam entre 1 e 1.000.

INCERTEZAS NA AMOSTRAGEM

Tanto os erros sistemticos quanto os erros aleatrios, contidos em dados analticos, podem ser devido a causas instrumentais, do mtodo e pessoais. A maioria dos erros sistemticos pode ser eliminada de forma cuidadosa por meio da calibrao e pelo uso apropriado de padres, de controles e de materiais de referncia. Os erros aleatrios, que esto representados na preciso dos dados, geralmente podem ser mantidos em nveis aceitveis por intermdio do controle rigoroso das variveis que influenciam as medidas.

AMOSTRA BRUTA
COLABORAO: TAMIE, ANA FLVIA E SAMANTHA

 A amostra bruta uma rplica em miniatura da massa inteira do material a ser analisado. Deve corresponder ao todo do material em sua composio qumica e, se composto por partculas, na distribuio do tamanho das partculas.

Etapas envolvidas na amostragem de um slido particulado

Amostragem de Solues de Lquidos e Gases

Os gases podem ser amostrados por vrios mtodos. Em alguns casos, um saco de amostragem simplesmente aberto e preenchido com o gs; em outros, os gases podem ser absorvidos em um lquido ou adsorvidos na superfcie de um slido

Amostragem de Metais e Ligas

As amostras de metais e ligas so obtidas por meio de limalhas, moagem ou perfurao.

PREPARAO DE UMA AMOSTRA DE LABORATRIO

COLABORAO: HVILA, MARIANA E JSSICA ROBERTA

 A amostra de laboratrio deveria ter o mesmo nmero de partculas da amostra bruta.

Nmero de Amostras de Laboratrio

Uma vez que a amostra de laboratrio esteja preparada, a questo que permanece quantas amostras devem ser tomadas para a anlise.

Manuseio Automtico de Amostras

O manuseio automtico de amostras pode permitir maior velocidade analtica, maior confiabilidade e menores custos que o manuseio manual de amostras. So dois tipos de mtodos automticos: discretos e fluxo contnuo

Mtodos Discretos

Esse mtodo imita operaes que seriam realizadas manualmente. Utiliza-se robs de laboratrio para processar amostras quando pode ser perigoso para o homem.

Mtodo em Fluxo Contnuo

Nesse mtodo, a amostra inserida em um fludo transportador, no qual inmeras operaes podem ser desenvolvidas antes que ela seja detectada pelo detector em fluxo. Existem dois tipos: fluxo segmentado e por injeo em fluxo

Analisador em Fluxo Contnuo Segmentado

Analisador por injeo em fluxo

PADRONIZAO E CALIBRAO
COLABORAO: SIMONE, SOLANGE E MARIA

 Nos procedimentos analticos so muito importantes os processos de calibrao e padronizao. Calibrao: determina a relao entre a resposta analtica e a concentrao do analito que realizado pelo uso de padres qumicos. Comparao com padres: 1. Comparao direta 2. Procedimentos de Titulao

Comparao Direta Comparam uma propriedade do analito com um padro, de maneira que a propriedade que esta sendo analisada se iguale com aquela do padro. EX: fita de pH Esse procedimento chamado de comparao de nulo ou mtodo de igualizao.

Titulaes
O analito reage com um reagente padronizado (o Titulante) em uma reao de estequiometria conhecida. A quantidade do reagente padronizado necessria para atingir a equivalncia qumica pode ser relacionada com a quantidade do analito presente. A titulao um tipo de comparao qumica.
HCl (aq) + NaOH (aq) NaCl (s) + H2O (aq)
* O ponto final o nmero de mols de NaOH adicionado aproximadamente igual ao nmero de mols de HCl inicialmente presente.

Calibrao com Padro Externo Padro Externo preparado separadamente da amostra, so utilizados para calibrar instrumentos e procedimentos quando no h efeitos de interferncia de componentes da matriz na soluo do analito. A calibrao realizada e obtm o sinal de resposta (Absorbncia, altura de pico, rea do pico) como uma funo da concentrao conhecida do analito. Uma curva de calibrao preparada colocando-se os dados em forma de um grfico ou ajustando-os por meio de uma equao matemtica adequada, relao linear utilizada no mtodo dos mnimos quadrados.

Previso: O sinal de resposta obtido para a amostra usado para prever a concentrao desconhecida do analito, a partir da curva de calibrao ou pela equao.

Consideraes sobre o Mtodo dos Mnimos Quadrados

1- Existe uma relao verdadeiramente linear entre a resposta medida y e a concentrao analtica do padro x. Essa relao matemtica (Modelo de Regresso). Y=mx+b b o intercepto (o valor de y quando x for zero) e m, a inclinao da reta.

2- Desvios de pontos individuais da linha reta decorrente de erros na medida. Anlise de Regresso: nem todos os dados caem exatamente na linha reta. O analista tenta traar a melhor reta entre os pontos. Fornece um meio para obteno objetiva dessa linha e especifica as incertezas associadas ao seu uso subsequente.

 Anlise de Correlao: necessria se existe uma incerteza significativa nos dados contidos em x, e a anlise linear dos mnimos quadrados pode no fornecer a melhor linha reta. Anlise dos Mnimos Quadrados Ponderada: realiza-se quando as incertezas nos valores de y variam significativamente em relao a x, necessrio aplicar diferentes pesos aos fatores.

 Resduos: os desvios verticais de cada ponto da linha reta. A linha gerada pelo mtodo dos mnimos quadrados aquela que minimiza a soma dos quadrados dos resduos para todos os pontos. O mtodo fornece o melhor ajuste entre os pontos experimentais e a linha reta, e fornece os desvios padro para m e para b.

Erros na Calibrao com Padro Externo A relao funcional da calibrao entre a resposta e a concentrao do analito tambm deve-se aplicar amostra. Em uma determinao a resposta analtica corrigida por meio da medida de um controle (branco) o branco ideal idntico amostra, mas sem o analito. Um branco real tanto um branco do solvente, contendo o mesmo solvente na qual a amostra foi dissolvida como um branco do reagente contendo o solvente mais os reagentes usados no preparo da amostra.

Fatores de falhas do mtodo do Padro Externo

Os efeitos de matriz decorrentes da existncia de espcies estranhas na amostra que no esto presentes nos padres ou no branco. As diferenas em variveis experimentais no momento da medida do branco, da amostra e dos padres. Ocorrer erros devido contaminao durante a amostragem ou nas etapas de preparao da amostra. Erros Sistemticos por preparar incorretamente os padres exatido dos padres depende da exatido das tcnicas gravimtricas e volumtricas e do equipamento utilizado.

Fatores de falhas do mtodo do Padro Externo Forma qumica dos padres idntica do analito na amostra o estado de oxidao, a isomeria ou a complexao do analito. As concentraes dos padres podem variar em decorrncia da decomposio, da volatilizao, ou da adsoro s paredes do recipiente. A contaminao dos padres pode resultar em concentraes mais elevadas que o esperado para o analito.

 Se a funo de calibrao for obtida sem o uso de padres suficientes para se obter boas estimativas estatsticas dos parmetros. Erros Aleatrios podem influenciar a exatido dos resultados a partir de curvas analticas.

MINIMIZAO DE ERROS EM PROCEDIMENTOS ANALTICOS

COLABORAO: LILIAN E ANA PAULA

 Exatido e preciso: limitadas por fatores como amostragem preparo da amostra e calibrao. Calibrao multivariada: uso de uma resposta instrumental dentre varias comparando. Respostas multidimensionais: repetio da medida N vezes fornece melhora em raiz quadrada de N na preciso do valor mdio. Pode detectar interferentes que no seriam identificadas em calibrao univarivel.

MTODOS INVERSOS DE CALIBRAO

Regresso linear mltipla, regresso de mnimos quadrados parciais e a regresso de componentes principais. Quimiometria.

SEPARAES: MTODOS IMPORTANTE PARA MINIMIZAO DE ERROS

Saturao, mascaramento modificao da matriz e

Saturao: adio da espcie interferente nas amostras; degradar a sensibilidade e a detectabilidade do analito. Modificada a matriz: adicionado, o qual reage seletivamente com a espcie interferente para formar um complexo que no interfere.

 Ambos os mtodos cuidado para os reagentes adicionados no contenham quantidades significativas do analito ou de outras espcies interferentes. Diluio e equiparao da matriz Mtodo de diluio: pode ser til se a espcie interferente no produz efeito significativa abaixo de um certo nvel de concentrao. Mtodo de equiparao da matriz: tenta duplicar a matriz da amostra pela adio dos constituintes majoritrios da matriz dos padres brancos.

 Mtodos do padro interno: uma quantidade conhecida da espcie que atua como referencia adicionada a todos as amostras padres e brancos.

 Mtodo das adies de padro: possvel ou impossvel fazer uma cpia da matriz da amostra. A amostra contaminada por uma quantidade conhecida de uma soluo padro contendo analito

FIGURAS DE MRITO PARA MTODOS ANALTICOS

COLABORAO: JSSICA E ALINE

Sensibilidade de calibrao a inclinao da curva analtica, se a curva analtica for linear a sensibilidade ser constante independente da concentrao; Se a curva analtica no for linear a sensibilidade variar com a concentrao e mantm um valor nico.

Limite de deteco
a diminuio da concentrao que pode ser distinguida com o certo do nvel da confiana (equao abaixo)

onde: k: constante, podendo ser 2(92,1%) e 3(98%) de confiana m: sensibilidade da calibrao Sd : desvio padro do branco

Faixa dinmica linear

Faixa

dinmica linear de um mtodo analtico refere-se faixa da concentrao que pode determinar com uma curva de calibrao linear.

Grfico de Controle
Consiste em um grfico seqencial de alguma caracterstica que utilizada como critrio de qualidade, alem de mostrar os limites estticos da variao; Existe um limite superior de controle (LSC) e o limite inferior de controle(LIC) representados pela equao abaixo:

ni: media da populao para as medidas de massa; O: desvio padro da populao para as medidas; N: o numero de replicas que sero obtidas para cada amostra.

Validao

Determina a adequao de uma analise no sentido de fornecer a informao desejada Sendo aplicada amostra metodologias de dados Os dados so apresentados com limites de incerteza.

Apresentao dos resultados analticos

Seguem alguns parmetros de boas praticas de laboratrio:
1.

Resultados analticos devem ser representados com o valor mdio e o desvio padro;

2. os algarismos significativos so importantes na apresentao dos resultados; 3. a validao fornece a confiana nas concluses.