Identificao de Enterobactrias.

Dra. Tnia Mara Ibelli Vaz

Pesquisador Cientfico Instituto Adolfo Lutz - So Paulo

Famlia Enterobacteriaceae Patogenia Isolamento e identificao de enterobactrias Aspecto das colnias Identificao Bioqumica ( cultura pura) Reao de VM e VP Escherichia coli Salmonella Shigella Klebsiella Enterobacter Serratia Citrobacter Proteus - Providencia - Morganella Fluxograma BGN OXIDASE Consideraes finais

ndice

Famlia Enterobacteriaceae

Introduo
Definio Bacilos Gram negativos AAF / Fermentadores da glicose Oxidase negativa e catalase + Mveis / imveis Cresce em meios comuns

Habitat Plantas, solo, gua, intestino do homem e animais

Famlia Enterobacteriaceae

Introduo Nomenclatura e Classificao

Mtodos Fenotpicos Moleculares novas espcies reclassificao

Classificao Gneros ( 42) Espcies ( centenas ) biotipos e sorotipos Complexos

Identificao de Enterobactrias

Classificao - patogenia
- Enteropatgenos - Infeces nosocomiais - espcies importantes - Outras espcies - raras em material clnico isoladas em : meio ambiente

plantas
animais

Famlia Enterobacteriaceae Patogenia

Enterobactrias - principal componente da flora intestinal normal do homem. Infeces -intestinal, feridas e trato urinrio Abcessos, pneumonia, meningites Infeces nosocomiais

Famlia Enterobacteriaceae Patogenia

Infeces intestinais Caractersticas normalmente na comunidade DTA doena transmitida por alimento surtos / casos isolados hospitalar Patgenos entricos clssicos

Salmonella spp Shigella spp E.coli - categorias diarreiognicas Yersinia enterocolitica

Famlia Enterobacteriaceae Patogenia

Infeces extra-intestinais Comunidade Hospitalar Qualquer espcie Fatores de risco: Paciente Veculos de transmisso Alimentos contaminados

Espcies mais comuns Escherichia coli Klebsiella pneumoniae Klebsiella oxytoca Proteus mirabilis Enterobacter spp Salmonella ( sorotipos) Serratia marcescens Citrobacter spp Providencia spp

Famlia Enterobacteriaceae
ISOLAMENTO E IDENTIFICAO DE ENTEROBACTRIAS

Crescem bem nos meios comuns e meios seletivos para BGN ( 18 a 24h 1 mm de dimetro). 1- Exame macroscpico da cultura: Aspecto morfolgico das colnias ( AS, MC,SS, TSA ) Tempo de crescimento e tamanho da colnia Observar pureza da cultura 2-Exame microscpico da cultura: Gram: tamanho, morfologia, reao tintorial, etc

Aspecto das colnias

Agar MacConkey

Aspecto das colnias

Salmonella.

E.coli

E.cloacae

Salmonella.

E. coli

E. cloacae

Aspecto das colnias

Famlia Enterobacteriaceae

Identificao Bioqumica ( cultura pura)

Meios presuntivos IAL (Pessoa e Silva) EPM-MILI TSI

IAL

Famlia Enterobacteriaceae

Identificao Bioqumica
Srie completa - 47 testes

Provas complementares:
Fermentao de acares LDC- ODC - ADH CiSi Pesquisa de enzimas DNase gelatinase,lipase, NAR, ONPGase

Gram

Oxidase

VM e VP

Famlia Enterobacteriaceae Reao de VM e VP

Enterobactrias VP+ Enterobacter Klebsiella Serratia

Enterobactrias VP Maioria das espcies dos outros Gneros Salmonella Shigella E.coli Proteus Morganella Providencia Citrobacter Kluyvera

Escherichia coli

Diagnstico Diferencial

lac+ CISI -

K.oxytoca ( LDC+/ motil.-CiSi+) Citrato de Simmons Citrobacter amalonaticus e C. diversus ( LDC-/motil.+CiSi+)

Prova

Marcadores Epidemiolgicos
Infec. Intestinais Sorotipagem Fatores de virulncia Infec. Extra-intestinais Sorotipagem Met. moleculares

Glicose+/Gs+/sacarose+/urease*H2STDAindol+ LDC+/Motilidade+/- Aeromonas

Salmonella

Diagnstico diferencial

Citrobacter spp ( H2S + ) Proteus

Prova de Fermentao

glicerol

Glicose+/gs v sac H2S + ureaseTDA indol LDC + Mov. +

CiSi+ Lac -

Marcadores Sorotipagem Fagotipagem Moleculares

Shigella

Diagnstico diferencial

E.coli ( LDC - / Mov.-)

Lactose Ci Christ. Acetato Trab.

Citrato Sdio

Glic.+ /gs sac urease TDA H2S indol v LDC Mov. -

CiSi Lac -

Marcadores Sorotipagem Met.moleculares

Klebsiella

Diagnstico diferencial
Lac+ CiSi +

Enterobacter ( LDC+ / Mov.-) ADH ODC Fermentao

Marcadores Sorotipagem Met. moleculares

Enterobacter

Diagnstico diferencial Enterobacter Klebsiella Serratia

LDC,ODC,ADH Motilidade DNase Fermentao Lac+ CiSi+

E.cloacae Marcadores Sorotipagem Met. moleculares

Serratia

Espcies de Serratia Glic.+ / gssac. urease H2S TDA indol LDC + Mov. + DNase + Gelatinase + Lipase + CiSi + Lac -

LDC,ODC, malonato, fermentao , pigmento

Marcadores: Sorotipagem Met.moleculares

Citrobacter

Espcies de Citrobacter

ODC, indol, H2S malonato fermentao

Glic.+ / gssac =V CiSi + urease Lac + H2S = V TDA indol = V LDC Mov. +

Proteus - Providencia - Morganella

Diagnstico diferencial
Proteus Providencia Espcies H2S + BGN NF Glic.+/ gs sac. urease + TDA + H2S = V indol = V LDC Mov. + CiSi + Lac +

Swarming TDA, H2S, ODC, gelatinase, fermentao

Fluxograma

BGN Oxidase Lac +

IAL E.coli Enterobacter Klebsiella Kluyvera Citrobacter + Cit. Simmons Cit. Simmons E.coli Shigella Morganella gar Mac Conkey

Lac IAL Shigella Salmonella Serratia Proteus Providencia Morganella

Enterobacter Klebsiella Kluyvera Citrobacter

VP +

Salmonella Serratia Proteus/Prov.(V) +

IDENTIFICAO DE ENTEROBACTRIAS

Enterobactrias em microbiologia clnica Poucas espcies Espcies incomuns , novas espcies, espcies atpicas podem ocorrer (isoladas de material clnico, ambiente, plantas e animais)

PROBABILIDADES Tratar-se de uma espcie rara Cepa contaminada Uma ou mais testes no adequados na identificao ( turvao) Manipulao errada ( concentrao do inculo) Composio e quantidade do meio ( substrato presente) Controle de Q

IDENTIFICAO DE ENTEROBACTRIAS

O que fazer?

Checar tudo: Pureza da cultura Repetir todos os testes no mesmo sistema ou utilizando meios anteriormente utilizados Repetir todos os testes em outro sistema de utilizar partidas diferentes do meio. Encaminhar para laboratrios de referncia os

identificao ou

Consideraes finais

Importncia da caracterizao das espcies Evitar falsos surtos

No identificao do surto
Ateno para cepas atpicas Ateno para espcies raras Ateno para pureza das culturas