ACTIVACION DE LT

CLASE 9

 Una vez que los linfocitos reconocen mediante sus TCR las estructuras especficas a travs de las interacciones moleculares adecuadas, se inicia el proceso de activacin. Este proceso implica una serie de eventos en cadena que se inician en la membran celular, prosiguen en el citoplasma y terminan en el ncleo.

Activacion de LT
La activacin de los LT se inicia cuando el TCR reconoce a un pptido transportado por la molcula HLA. La unin entre el TCR y el pptido, junto a la molcula HLA, tanto de clase I como II, es especfica. El proceso de reconocimiento vara si el TCR est formado por el heterodmero alfa/beta o si es del tipo gamma/delta. Para que la activacin se inicie adecuadamente, se requiere adems de la participacin de TCR, de otras molculas presentes en la membrana de los LT. Una vez activados los LT, stos producirn prioritariamente citocinas o factores citotxicos, segn se trate de linfocitos Th o Tc. De esta manera estos linfocitos intervienen en la respuesta inmune en la que estn implicados.

Interaccin Intercelular

Interaccin Intercelular
La unin del Ag con el TCR, no es suficiente para la activacin eficaz de los LT. Para que esta respuesta se lleve a cabo se requiere la participacin de una serie de molculas conocidas globalmente como accesorias, y cuya funcin es la de contribuir al desarrollo de una respuesta inmune efectiva, facilitando la interaccin entre las distintas clulas. Se forma as lo que se denomina sinapsis entre LT y CPA

Interaccin Intercelular
De estas molculas destacan: Las molculas CD4 y CD8. Las molculas CD28 y CTLA-4 y sus ligandos. Otras molculas como CD2, CD45 entre otras.

Interaccin Intercelular

Molculas CD4 y CD8. Estas molculas facilitan la unin intercelular y adems potencian la transmisin de seales al interior celular. Son glicoprotenas cuyos ligandos naturales son las molculas MHC clase I y I I. Ambas molculas pertenecen a la superfamilia de las inmunoglobulinas el CD4 est formado por una sola cadena: El CD4 se expresa en la mayora de los LTH el CD8 lo est por dos cadenas, alfa y beta. el CD8 se expresa en LT con funcin citotxica.

Molculas CD28 y CTLA-4

La molcula CD28 es de especial importancia, incrementa la estabilidad de las interacciones intercelulares de linfocitos. El CD28 se expresa en todos los LTCD4+ y aproximadamente en el 50% de los LTCD8+ y sus ligandos naturales pertenecen a la familia B7 (B7-1, CD80; B7-2, CD86). El CD28, adems de su papel en el proceso de adhesin, tambin participa transmitiendo seales de activacin del LT. Una variante de esta molcula es el CTL-4 que, a diferencia del CD28, se expresa slo de modo transitorio despus de la activacin de las L confiere una seal inhibidora al linfocito, a diferencia del CD28. Esta posibilidad de la presencia diferencial de CD28 o CTL-4 define que el LT se active o se inhiba, lo que tiene gran trascendencia regulando el proceso de la activacin de los LT.

Interaccin Intercelular

Molcula CD2 La molcula CD2 es una glicoprotena de adhesin que contribuye a la unin del LT a la CPA. Su ligando natural es el CD58 ( LFA3) y se expresan en la superficie de todas las clulas con funcin presentadora de antgenos.

CD45
El CD45, es una de las glicoprotenas ms abundantemente expresadas en la superficie de linfocitos y en general en las clulas hematopoyticas, pudindose detectar hasta un milln de molculas por clula y cuyo ligando no se conoce con precisin. Pertenece a la familia de protenas con varios miembros y con mltiples alelos,con actividad fosfatasa (PTP), como son el CD45Ra y el CD45RB. La parte citoplasmtica de esta molcula es muy extensa y en accin fosfatasa puede eliminar grupos fosfato a las tirosin kinasas LcT y Fyn,

Transmisin de seales en LT
Los LT, al igual que los LB y NK, poseen mecanismos a travs de los cuales los estmulos externos son procesados y enviados al ncleo a travs de una serie de mediadores bioqumicos intracelulares conocidos como segundos mensajeros. stos son capaces de regular la transcripcin especfica de un amplio nmero de genes, que participan en los procesos de crecimiento, divisin y diferenciacin celular. En la activacin de esta cadena de segundos mensajeros intervienen seales procedentes tanto del TCR/CD3 como de las molculas accesorias, de molculas que participan en la interaccin celular y receptores de citocinas presentes en la membrana de los linfocitos

Transmisin de seales en LT

Transmisin de seales en LT
Un mecanismo fundamental en la regulacin de la actividad y la funcin de estos mensajeros son los ciclos de fosforilacin y defosforilacin a los que estn sometidos mediante cinasas y fosfatasas. Existen dos tipos de cinasas, dependiendo de su actividad fosfotransferasa, que se manifiesta fosforilando protenas en aminocidos serina y treonina (serina/treonina cinasas) o bien en aminocidos tirosina (tirosina cinasas). Igualmente hay dos tipos de fosfatasas que defosforilan especficamente protenas fosforiladas bien en serina/treonina o en tirosina. Una propiedad general de los linfocitos es la de necesitar dos tipos de seales distintas para inducir su activacin y proliferacin.

Transmisin de seales en LT
La 1a seal la proporciona la unin del complejo pptido-MHC al TCR (y a los correceptores CD4 y CD8), esta seal est potenciada por la participacin de molculas de adhesin, tales como CD2, LFA-1, CD26 y otras. La 2a seal es suministrada por molculas coestimuladoras del tipo CD28, que complementan las seales de activacin inducidas por el TCR permitiendo una activacin celular completa. Estas seales coestimuladoras son necesarias para la activacin del linfocito, ya que en su ausencia la seal mediada por el TCR puede conducir al linfocito a la muerte celular o a un estado de anergia (en la que el linfocito no responde a nuevas estimulaciones).

Mediadores intracitoplasmticos de la activacin celular

El primer evento bioqumico que ocurre en los LT despus de la interaccin HLApptido-TCR, es la fosforilacin en tirosina, principalmente de las cadenas zeta no polimrficas del CD3. Estas poseen en sus dominios intracitoplasmticos unas regiones denominadas ITAM (Immunoreceptor Tyrosine based Activation Motifs) que se fosforilan por la accin de las tirosina cinasas c-lck y c-fyn. Ello se debe a que existe una estrecha asociacin fsica del CD4 y del CD8 con el TCR/CD3, de tal manera que cuando se produce la unin TCR-pptido-HLA, hace que la c-lck asociada a estas molculas se aproxime a la porcin citoplsmica de las protenas del complejo CD3, donde puede fosforilar en tirosina a sus regiones ITAM. As mismo, todo ello es posible porque la tirosina cinasa c-lck se encuentra localizada precisamente en la parte intracelular de la membrana plasmtica unida a la bicapa lipdica, por un proceso de miristilacin de su regin aminoterminal.

Mediadores intracitoplasmticos de la activacin celular

Una vez que los ITAM son fosforilados en sus residuos tirosina, se convierten en sitios especficos de acoplamiento donde se une a la protena citoplsmica ZAP-70, que pertenecen a la familia de enzimas proteincinasas. Asi el ZAP-70, que se encuentra tanto en LT como NK, ejerce un papel crtico en la cascada de sealizacin intracelular fosforizando nuevos substratos. El ZAP-70 acta fosforilizando sobre ciertos adaptadores, con lo cual prosigue la cascada de transmisin de seal de activacin. Entre estos adaptadores se encuentran el estabilizador de clulas T activadas (LAT) y la protena especfica de leucocito que contiene SH2 (SLP-76). Despus de la activacin de estos adaptadores se producir la fosforilacin en tirosina de la enzima fosfolipasa C gamma (PLC-gamma) que es crucial en todo el proceso de la cascada de transmisin de seales.

Mediadores intracitoplasmticos de la activacin celular

Como consecuencia, la PLC-gamma se activa e induce la hidrlisis de su substrato especfico, el fosfatidilinositol bifosfato (PIP2), generndose los metabolitos inositol trifosfato (IP3) y diacilglicerol (DAG) . Asi es como se inician las dos vas de transduccin de suma importancia que es la iniciada por el IP3 y la otra la iniciada por el DAG, y que son conocidas como va mediada por calcio y va mediada por la proteincinasa C (PKC) respectivamente. Va mediada por calcio. Cuando el IP3 se une a un receptor especfico (IP3R) localizado en el retculo endoplsmico, facilita la liberacin del calcio intracelular de sus compartimentos, este aumento de la concentracin de estos iones en el espacio libre intracelular acta estimulando la enzima calmodulina, que es una serina/treonina cinasa. Luego se induce la formacin de calcineurina que despus activar el factor de transcripcin activador de clulas T (NF-AT).

Mediadores intracitoplasmticos de la activacin celular

Va mediada por la protena cinasa C. El DAG formado activa la PKC que terminar activando el factor de transcripcin de clulas B (NF-kB). Las PKCs, en condiciones de reposo celular, se encuentra localizada en el citosol donde es inactiva, pero una vez que recibe el estmulo del DAG conjuntamente con iones Ca++ (dependiendo del isotipo enzimtico) se transloca a la membrana celular, donde en presencia de fosfolpidos (fundamentalmente fosfatidilserina) ejerce su funcin de cinasa de protenas en aminocidos serina y treonina. Va mediada por AP-RAS. Otra va importante de activacin es en la que interviene el Ras, que hace que Raf se active y acte como una cinasa de MAPc que interviene en la regulacin por fosforilacin del factor de transcripcin activador de protena (AP1).

FACTORES DE TRANSCRIPCIN EN LT
Como consecuencia del desarrollo de la cascada de los mensajeros citoplasmticos analizados ms arriba, se activan ciertos factores que tienen como funcin la de activar la transcripcin, conocidos como factores de transcripcin, de un gran nmero de genes implicados en la respuesta inmune. Entre estos factores de transcripcin destacan: El factor nuclear de la cadena K de clulas B El factor activador de protena 1 El factor nuclear de clulas T

FACTOR NUCLEAR DE LA CADENA K DE CLULAS B

El factor nuclear de la cadena Kappa de clulas B (NF-B), fue caracterizado por 1a vez como un factor especfico de LB, (pero ahora sabemos que se encuentra en muchos otros tipos celulares), incluyendo los LT. Este factor est formado por 5 componentes que presentan una alta homologa entre s y que son las protenas p50, p52, p65, RelB y c-rel. Estas protenas pueden estar formando distintos complejos entre ellos siendo los ms comunes: p50/p50 y p50/p65. El complejo p50/p65, se encuentra retenido en el citoplasma por molculas llamadas inhibidores de NF-B o IB, bloquendose as su llegada al ncleo. Ser slo despus de la activacin de la PKC cuando el IkB terminar degradndose y como consecuencia se liberan los componentes del NF-kB, que pueden ahora pasar del citoplasma al ncleo en donde ejerce su funcin

Mediadores intracitoplasmticos de la activacin celular

Este factor puede participar en la transcripcin de la IL-2 y de su receptor y tambin en un amplio nmero de genes de LT tales como los de MHC, ciertas molculas de adhesin, protooncogenes c-myc y otros.

Factor activador de protena 1

El factor activador protein 1 (AP-1), a diferencia del NF-KB, es un factor de transcripcin exclusivamente nuclear que se activa por fosforilacin mediada por cinasas que se translocan al ncleo e inducen en este factor una modificacin postranslacional que le hace activo. Este factor est formado por protenas ubicuas pertenecientes a las familias de genes de expresin temprana Jun (c -Jun, v-Jun, JunB y JunD) y Fos (c Fos, FosB, Fra1 y Fra2) capaces de regular la transcripcin de un alto nmero de genes, incluyendo el de IL-2.

Factor nuclear de LT activadas

La familia de factores nucleares de clulas T activadas (NF-AT), se encuentran en su estado fosforilado en el citoplasma y pasa al ncleo cuando se desfosforila. En este proceso interviene directamente la calcineurina que, a su vez, aparece cuando sobre la calmodulina se une el ion Ca++ como consecuencia de su movilizacin tras la activacin del TCR. En gran parte el NF-AT necesita de la cooperacin de AP-1 para activar los genes donde acta.

Inmunopatologa
Se han observado alteraciones de muchas de la cinasas que intervienen en la activacin de los LT. Entre ellas ZAP-70 que se asocia a valores muy bajos o ausentes de LT CD8+ en sangre perifrica y sus linfocitos no proliferan en respuesta a lectinas, a anticuerpos monoclonales anti-CD3, y a antgenos y a clulas alognicas.

Activacin de L B
Los LB utilizan como receptor las Ig de membrana (mIgs), de tal manera que cuando se produce la unin mIg-Ag se inicia el proceso de activacin de los mismos. Posteriormente proliferan y diferencian a clulas plasmticas, productoras de Acs y clulas memoria, listas para una pronta activacin en caso de la entrada de nuevo del mismo Ag. Para que los LB respondan tienen que haber sufrido un proceso madurativo que en el adulto ocurre en la mdula sea de tal manera, que a continuacin estudiaremos en primer lugar el proceso de maduracin de estos linfocitos y despus la serie de eventos conducentes a la activacin, proliferacin y diferenciacin de los mismos.

Proceso madurativo de LB
El proceso madurativo de los LB, se produce a partir de progenitores linfoides derivados de las clulas hematopoyticas primordiales (HSC), que se convertirn en LB maduros capaces de producir Igs. Este proceso madurativo es independiente del estmulo antignico, durante el cual se reordenan los genes de las cadenas pesadas y ligeras de las Igs. Tambin durante este proceso se produce la seleccin del repertorio de LB no autorreactivos y la eliminacin de aquellos clones que reconocen antgenos propios, que pueden ser lesivos para el organismo en el futuro.

Proceso madurativo de LB

Proceso madurativo de LB El proceso madurativo de los LB, se produce a partir de progenitores linfoides derivados de las clulas hematopoyticas primordiales (HSC), que se convertirn en LB maduros capaces de producir Igs. Este proceso madurativo es independiente del estmulo antignico, durante el cual se reordenan los genes de las cadenas pesadas y ligeras de las Igs. Tambin durante este proceso se produce la seleccin del repertorio de LB no autorreactivos y la eliminacin de aquellos clones que reconcoen antgenos propios, que pueden ser lesivos para el organimo en el futuro.

Etapas del proceso madurativo B

El siguiente estado madurativo corresponde a los LB inmaduros, que se caracterizan por reordenar completamente los genes, bien de las cadenas ligeras Kappa o lambda, y producir cadenas ligeras, que asocindose a la cadena pesada mu se forma la IgM de manera completa. Despus se formarn los LB maduros que se caracterizan por expresar las cadenas pesadas mu y delta que, asocindose con sus cadenas ligeras, hacen que estas clulas coexpresan en su membrana IgM e IgD, que poseen la misma regin V y consecuentemente la misma especificidad por el Ag.

Etapas del proceso madurativo B

Etapas del Proceso madurativo de LB

Estos procesos madurativos de los LB inmaduros en la mdula requieren de la presencia de clulas estromales que interactan con los linfocitos inmaduros y a los que ayudan a travs de la IL7 que producen y que facilita el proceso madurativo de los linfocitos. La interaccin entre clula estromal y LB se lleva a cabo con la participacin de las molculas VLA4 y su ligando VCAM-1, presentes en LB y estromales, respectivamente y la molcula c-Kit, presente en los linfocitos y que interacta con otra molcula presente en las clulas estromales, el factor de clulas madre o SCF

Generacin del repertorio de Acs

los genes V de las Ig se distribuyen clonalmente, es decir, que cada LB exprese una nica regin VH y VL. Basado en ello, cada grupo de linfocitos ( clon) posee una nica especificidad antignica distinta de la expresada por los otros LB, constituyendo el punto esencial de la teora de la seleccin clonal, segn la cual el Ag exgeno se une (selecciona) a los LB, cuyas Igm sean especficas (complementarias) para l. El conjunto de especificidades de Ac distribuidas entre los LB recientemente formados y que no han tenido contacto todava con el Ag, se denomina repertorio primario. Despus, y como consecuncia de los estimulos antignicos y diferenciacin de los linfocitos, aparecen hipermutaciones somticas que son responsables de las mltiples posibilidades de generacin de un repertorio casi infinito de Acs, calculndose que, pueda ser de aprox. 109. Ello garantiza que cualquier Ag exgeno de los mltiples (potencialmente millones) presentes de forma natural o artificialmente creados por el hombre, que entre en el organismo pueda tener oportunidad de encontrar LB que lo reconozcan.

Eliminacin de LB autorreactivos en la mdula

El desarrollo del SI necesita compaginar 2 fenmenos casi contradictorios; a) generar una enorme diversidad de receptores que reconozcan diferentes antgenos y b) seleccionar de todas estas especificidades generadas al azar las no dainas para el propio organismo. De no ser as, los autoanticuerpos generados produciran, inflamaciones destructivas en los tejidos propios. Por ello las LB inmaduras que interaccionen con Ags son eliminados por un proceso denominado apoptosis, proceos por el cual mueren los linfocitos debido a una fragmentacin de su DNA.

Proceso madurativo de LB

Reconocimiento del Ag y activacin de LB

Los LB maduros, pueden reconocer al Ag por su receptor BCR y transmitirse las seales en la ayuda de otras molculas, Ig-alfa e Ig-beta que poseen residuos tirosina, presentes tambin en la membra celular . Los residuos de tirosina de las colas citoplasmticas de los componentes del BCR pueden fosforilarse por enzimas proten-tirosncinasas (PTK), que son de importancia capital en la transduccin de seales activadoras al interior de la clula tras la unin del Ag a las mIg. Entre esas PTK se encuentran las molculas lyn, fyn y blk entre otras (Figura, Activacin BCR).

Reconocimiento del Ag y activacin de LB Adems existe tambin lo que se conoce como correceptor de clulas B, que acta asociado con las molculas anteriores formando un gran complejo de activacin. Estas molculas son el CD21 (CR2), el CD19 y el CD81. De ellas, el CD19 posee gran nmero de tirosinas en el tallo citoplasmtico y la CD21 tiene la posibilidad de unirse a C3d que es un producto del catabolismo del complemento e importante en el proceso de identificacin de clulas y bacterias que se requieren destruir del receptor del Ag de las clulas B (BCR)

BCR completo

Seleccin Clonal

Activacin B, dependiente de LT
Para la activacin de la mayoria de los LB se requiere adems del reconocimiento de un determinado Ag por el complejo BCR (primera seal), la presencia de LT, que facilitaran una 2 seal necesaria para una ptima activacin de los mismos. A este proceso se conoce como activacin B, dependiente de LT. En ciertas cinrcunstancias tambien los LB pueden activarse en ausencia de LT. Esto ocurre ante Ags con epitopos muy repetitivos y en este caso sa habla activacin B, independiente de linfocitos T. Hoy se sabe que los LB, al igual que los LT, precisan de al menos dos seales para su activacin.

Activacin B, dependiente de LT

Activacin B, dependiente de LT
La primera seal es dada por el complejo BCR de los LB tras su unin al Ag con lo que se pone en marcha la cascada de segundos mensajeros en estos linfocitos. Sin embargo, esta seal por s sola no es suficiente para una activacin completa de los LB. Para ello es necesaria al menos una 2a seal proveniente de los LT y que es mediada por ciertas citocinas que propiciaran la proliferacin y diferenciacin de las LB. Para ello tambin se requiere la adecuada interaccin entre ambos tipos de linfocitos, T y B, mediante molculas conocidas como accesorias. As, los LB expresan las molculas de activacin CD80 y CD86 que interactan con la molcula CD28 de LT, para una buena activacin de los primeros. Tambien es de gran importancia que las molculas CD40L se unan a CD40 presentes en linfocitos T y B respectivamente para que estos ltimos puedan activarse y diferenciarse de manera adecuada

Activacin independiente de LT
Se sabe que hay Ags que en ausencia de LT pueden producir una respuesta de LB, conocida como activacin B, independiente de LT. Este tipo de Ags se denominan antgenos T independientes y pueden ser de dos tipos: a) Ciertos antgenos de paredes bacterianas, como es el LPS, que inducen activacin y diferenciacin de linfocitos B sin interaccionar con el BCR y b) ciertos Ags formados por estructuras repetitivas, normalmente hidratos de carbono, que son reconocidos simultneamente por muchos complejos BCR, dando lugar a la activacin de LB sin necesidad de la interaccin con los LT.de manera adecuada