USAL

CAPACIDAD ANTIOXIDANTE DE PLANTAS MEDICINALES

Dra. Lucy A. Ibez,Mg,Dr Lima-Per 2008

INVESTIGACION EN PLANTAS MEDICINALES

La Investigacin etnobotnica y etnofarmacolgica de las especies vegetales para su posible utilizacin fitoteraputica, exige un delicado protocolo de trabajo que incluye toda la escala de pruebas y ensayos que van desde la seleccin de una determinada planta de acuerdo a ciertos criterios hasta una exhaustiva gama de ensayos farmacolgicos, qumicos fitoqumicos, toxicolgicos y clnicos.
Manual de Tcnicas Experimentales . Proyecto X.10 . CYTED

Ensayos Clnicos en Plantas Medicinales?

ESTUDIOS PRE-CLNICOS ESTUDIOS CLINICOS

ESTUDIOS TOXICOLGICOS

ESTUDIOS FARMACLOGICOS

A U T O R I D A D R E G U L A D O R

ESTUDIOS FASE I ESTUDIOS FASE II ESTUDIOS FASE III AUTORIDAD REGULADORA ESTUDIOS FASE IV

ESTUDIOS QUIMICO-FARMACUTICOS

ESTUDIOS ETNOBTANICOS, AGRONMICOS

FASES DE ESTUDIO DE UN NUEVO MEDICAMENTO

Seleccin y estandarizacin del material activo Estudos pre-clnicos Estudos pre-clnicos FASE I
Eficacia Efectos colaterales Toxicologia aguda Doses repetidas

FASE II
Farmacocintica

Toxicologia especial

Test clnicos FASE I

Test clnicos FASE II

PACIENTES eficacia

Test clnicos

Test clnicos
FASE IV
USO GENERAL vigilancia mdica

FASE III
MULTICNTRICO efectos colaterales interacciones ventajas limitaciones

VOLUNTRIOS limites de dosis farmacocintica efectos inesperados

INVESTIGACION EN PLANTAS MEDICINALES (EQUIPO MULTIDISCIPLINARIO)

CULTIVO
(ING. FORESTAL, ING.
AGRONOMO, ETC)

SNTESIS
QUMICA COMBINATORIA L

PATENTES
FARMACOLOGA MOLECULAR

QUMICA ORGNICA
(QUIMICOS; INGENIEROS QUMICOS, FARMACUTICOS, ETC)

PLANTA

FARMACOLOGIA TOXICOLOGIA ENSAYOS CLNICOS(FARMACOLOGOS;,QUIMICOS FARMACEUTICOS; MEDICOS; ETC) PROCESO DE VALIDACIN BOTNICA

CONTROL DE CALIDAD

(BOTANICOS, TAXONOMOS FARMACEUTICOS; BIOLOGOS, ETC)

FITOMEDICAMENTOS
ETNOFARMACOLOGIA
(FARMACLOGOS; ANTROPLOGOS;FARMACUTICOS; BIOLOGOS;MEDICOS, ETC).

COMERCIALIZACION, EXPORTACION
(EMPRESARIOS, EXPORTADORES,

VALIDACIN DE PLANTAS MEDICINALES

PLANTA Perfil farmacolgico Anlisis toxicolgico

Test in vitro,
preclnicos Y clnicos

EFICACIA

SEGURIDAD

PLANTA MEDICINAL

NUEVOS MEDICAMENTOS
Fracciones purificadas

Sntesis qumica de derivados activos

Extracto total de la planta

Principios activos aislados e identificados

INCIDENCIA DE ENFERMEDADES DE CRONICO DEGENERATIVAS

Numerosos estudios en nutricin humana demuestran una estrecha correlacin entre el consumo de frutas y verduras y la menor incidencia de enfermedades crnico degenerativas debido a su bajo contenido en caloras, colesterol y a la presencia de vitaminas, fibras, antioxidantes naturales y minerales. As mismo el estrs oxidativo ha sido asociado a la patognesis de muchas enfermedades humanas, como arterioesclerosis, artritis, demencia, cncer, etc; es por ello que el uso de antioxidantes en farmacologa es estudiado de forma intensiva, particularmente en el tratamiento de accidentes cerebrovasculares y enfermedades neurodegenerativas.

INCIDENCIA DE ENFERMEDADES DE CRONICO DEGENERATIVAS

El oxgeno es esencial para la mayora de los organismos que viven bajo condiciones aerobicas. Este es utilizado por la clula , la cual posee diversos sistemas que producen radicales libres de oxgeno(RLO). Frente al poder agresivo de estos RLO, la clula posee un arsenal defensivo de mecanismos neutralizantes formado por enzimas y compuestos que evitan la formacin incontrolada y excesiva de RLO y producen la neutralizacin, eliminacin y bloqueo de su actividad en cadena

INCIDENCIA DE ENFERMEDADES DE CRONICO DEGENERATIVAS

La enzima superxido dismutasa remueve el anin superxido (O2) convirtindolo en H2O2, el cual es transformado por la enzimas catalasa y Glutatin peroxidasa en agua (H2O) As mismo tambin posee molculas que remueven los radicales libres por reaccin directa (no cataltica) tales como: el glutation reducido, los tocoferoles (vitamina E) y el cido ascrbico (Vitamina C).

As mientras que niveles moderados de RLO constituyen y modulan vas fisiolgicas de funciones celulares, incluyendo sealizacin en cascadas y el control de la expresin gnica transcripcional y posttranscripcional, el estrs oxidativo severo induce dao celular que puede conducir a apoptosis o a la necrosis. Por tanto el estrs oxidativo se deriva de la falta de equilibrio entre los mecanismos de defensa antioxidante y los fenmenos favorecederos de la oxidacin.

PROCESOS OXIDATIVOS

Dos fenmenos muy importantes en nuestra vida son procesos oxidativos: la combustin y la respiracin. Ambos se asemejan, ya que son procesos a travs de los cuales sustratos combustibles se transforman en energa consumindose oxgeno y liberndose agua y dixido de carbono. As, la combustin, es un proceso oxidativo en el cual un combustible se transforma en energa en forma de luz y calor, producindose adems dixido de carbono (CO2) y agua. Pero si el proceso no es perfecto, la oxidacin no es total y produce contaminantes, como el monxido de carbono.

En la respiracin ocurre lo mismo: La glucosa y cidos grasos - se transforman en energa. Esta transformacin se realiza al interior de la clula, en la mitocondria y exactamente, se produce ATP, la molcula clave para la sntesis de los componentes celulares y para la mayora de los procesos celulares, y que se conoce tambin como la "moneda" energtica de la clula. En la respiracin se consume oxgeno, se genera ATP, y quedan como residuos dixido de carbono y agua. Pero, este proceso no es perfecto ya que se producen tambin otras molculas contaminantes, las Especies Reactivas del Oxgeno (EROs). Entre el 1 y 3 % del oxgeno que respiran nuestras clulas al oxidar sus sustratos se transforma en EROs, que, o bien son radicales libres, o llevan a su formacin.

ESPECIES OXIGENO REACTIVAS (ROS)

Por causas ambientales (radiacin), as como por la ingesta de algn contaminante o incluso como consecuencia de nuestro propio metabolismo, surgen algunas molculas que nos pueden provocar dao. A estas se les conoce como especies oxigeno reactivas (ROS), que se asocian a enfermedades como cncer, problemas cardiacos o al natural envejecimiento humano. Entre los problemas que originan figuran: destruccin de paredes celulares, inactivacin de enzimas, debilitamiento de la capacidad defensiva, alteracin del sistema inmunolgico e incluso dao del material gentico .

RADICALES LIBRES

Adems la radiacin csmica y la radiacin electromagntica de baja longitud de onda (por ejemplo los rayos gama) pueden dividir el agua en el cuerpo para generar el radical hidroxilo, OH. Este radical dbilmente reactivo una vez producido ataca a cualquier cosa que este cerca, siendo su vida media extremadamente pequea y reaccionando en su punto de formacin dejando tras de si una secuela de reacciones en cadena de radicales libres en propagacin.

SUPLEMENTACION NUTRICIONAL
Es as que un estudio realizado en China demostr la eficacia de una suplementacin nutricional" con caroteno, vitamina E y Selenio sobre la mortalidad total y por cncer (especialmente carcinoma de esfago en una poblacin deficitaria). Sin embargo un estudio Finlands realizado sobre una poblacin de alto riesgo (fumadores importantes) mostr que la suplementacin con dosis elevadas de -caroteno aumentaba el riesgo de padecer un carcinoma de pulmn. Es muy importante que una dieta diaria debe proveer cantidades adecuadas de nutrientes esenciales naturales para el mantenimiento de una salud ptima. Estos antioxidantes naturales se encuentran presentes en prcticamente todas las plantas, microorganismos, hongos e incluso en los tejidos animales.

TENDENCIAS MUNDIALES DE LA ALIMENTACION

Las tendencias mundiales de la alimentacin en los ltimos aos indican un inters acentuado de los consumidores hacia ciertos alimentos que adems de contener nutrientes contengan sustancias fisiolgicamente activas que cumplan, al igual que los nutrientes esenciales, una funcin de beneficio en la reduccin de ciertas enfermedades.

TENDENCIAS MUNDIALES DE LA ALIMENTACION

A estos alimentos se les ha denominado alimentos funcionales y se vienen realizando la identificacin de ciertos principios activos, a fin de evaluar su seguridad y las dosis respectivas a utilizar, establecindose en la mayora de casos marcadores analticos, marcadores farmacolgicos, realizndose adems ensayos clnicos controlados a doble ciego y la demostracin de sus efectos bioqumicos, fisiolgicos, farmacolgicos y toxicolgicos.

ALIMENTOS FUNCIONALES
El trmino Alimento Funcional fue propuesto por primera vez en Japn en la dcada de los 80s con la publicacin de la reglamentacin para los "Alimentos para uso especfico de salud" ("Foods for specified health use" o FOSHU).

Aunque el trmino alimentos funcionales no es una categora de alimento legalmente reconocida por la Administracin de alimentos y Drogas (FDA) de los Estados Unidos, sin embargo se han dado recientemente algunos cambios legislativos acerca de la informacin que deben contener las etiquetas de los productos relacionados con beneficios funcionales de los alimentos.

REGULACIONES

Las regulaciones de la NLEA (Ley de Etiquetado y Regulacin Nutricional) y de la DSHEA (Ley de Suplementos Dietticos Salud y Educacin) se encaminan a preparar el camino legal en que se debe fundamentar el uso de estos productos. La posicin oficial de la U.S. Food & Drugs Administration (FDA) es: "Las sustancias especficas de los alimentos pueden favorecer la salud como parte de una dieta variada".

Antioxidantes

Se define como cualquier sustancia que, a bajas concentraciones en comparacin con el sustrato oxidable, retrasa o inhibe significativamente la oxidacin de dicho sustrato. Para lograrlo los antioxidantees entregan un electron a los radicales libres, con lo cual los desactivan, apagando el proceso de oxidacin y transformandose ellos en radicales libres inactivos o poco reactivos.

La importancia de un antioxidante depende de su concentracin, del medio donde acta y de su habilidad para interaccionar con sistemas regeneradores.
Ciertas enfermedades como la arterioesclerosis, degeneraciones ligadas al envejecimiento y el cncer, podran estar unidas al fenmeno de la oxidacin celular mediada por radicales libres.

EL ENVEJECIMIENTO

ENFERMEDADES CRONICODEGENERATIVAS

.
Envejecimiento celular Peroxidacin de los cidos grasos de la membrana celular y dao del ADN.

Ateroesclerosis

Peroxidacin de lpidos en las partculas de LDL con dao de otros de sus componentes.

Cncer

Dao del ADN.

Cataratas

Modificaciones irreversibles en las protenas.

Cuadros Inflamatorios Crnicos

Activacin de genes relacionados con la respuesta inflamatoria.

OXIDACION DE MOLECULAS BIOLOGICAS

La oxidacin de las molculas biolgicas, membranas y tejidos es inducida por el oxigeno activo y mediada por radicales libres, lo cual esta relacionado con un aumento en la incidencia de enfermedades digestivas en los seres humanos. El metabolismo oxidativo, proceso biolgico normal, es capaz de generar radicales libres oxigenados, altamente reactivos. Estas especies con oxgenos activos incluyen el radical superxido (O2), el perxido de hidrgeno (H2O2), el radical xido ntrico (NO) y el oxgeno singulete ( O2).
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Sustancias propias del organismo, enzimas antioxidantes

Tambin cierta parte de los superxidos son producidos por accidentes qumicos en los que muchas molculas del cuerpo reaccionan directamente con el Oxigeno para producir sperxido. Ejemplos de ello incluyen las catecolaminas, tetrahidrofolatos y algunos componentes de la cadena mitocondrial y otras cadenas de transporte de electrones.

Esta produccin de superxido es inevitable. Adems cierta cantidad de sper xido se produce deliberadamente por ejemplo los fagocitos activados (neutrfilos, monocitos, macrfagos, eosinfilos) dan lugar a grandes cantidades superxido como parte del mecanismo a travs del cual exterminan a los organismos extraos durante las inflamaciones crnicas este mecanismo protector normal puede afectarse.

Sistemas antioxidantes del organismo

. ANTIOXIDANTES ENZIMATICOS. INTRACELULAR. ENDOGENOS Catalasa Glutation peroxidasa Gutation reductasa Superoxido dismutasa Complejo reparador de ADN ANTIOXIDANTES NO ENZIMATICOS.
EXTRACELULAR. ENDOGENOS DIETARIOS EXOGEBNOS

Glutation Urato Ubiquinol Potenas plasmticas

B Caroteno Vit C y E Polifenoles Flavonoides Qumicos sintticos

Sustancias propias del organismo, enzimas antioxidantes

Adems de las enzimas glutatin peroxidasa, catalasa y superxido dismutasa, hay otras sustancias antioxidantes como la coenzima Q-10, que ayuda a las enzimas a realizar su funcin, y participa en numerosos procesos corporales. Se ha comprobado una gran similitud entre las propiedades antioxidantes de la vitamina E y las de la coenzima Q-10, que juega un muy importante papel en la generacin de energa celular, y a su vez es un estimulante inmune, mejora la circulacin y ayuda a proteger el sistema cardiovascular.

Sustancias propias del organismo, enzimas antioxidantes

Entre los principales antioxidantes dietarios esta la vitamina E que se ha demostrado posee actividad antioxidante in vivo. La vitamina C in vitro regenera a la vitamina E, lo que probablemente ocurra tambien in vivo. Los carotenoides estn presentes en zanahorias , berros, espinacas, tomates , mangos y damascos.

Los polifenoles son un grupo de compuestos presentes en la naturaleza, en su mayora potentes antioxidantes necesarios para el funcionamiento de las clulas vegetales, que se encuentran en frutas y verduras, principalmente manzanas y cebollas y en bebidas como el t y el vino.

Los principales polifenoles identificados en la dieta son cidos fenlicos, derivados de tirosina, estilbenos, flavonoides y compuestos polimricos como los taninos. En estudios in vitro, muchos polifenoles naturales son mejores antioxidantes que la vit C y E, siendo la quercetina la sustancia ms abundante. Los citroflavonoides presentes en algunos ctricos, como el hesperidsido y el rutsido, son eficaces antioxidantes.

Molculas con actividad antioxidante Flavonoides

Investigacin de plantas con actividad antioxidante

OBTENCION DEL MATERIAL VEGETAL(MV)

El MV que ser utilizado para la investigacin se debe recolectar de acuerdo con cada especie, la poca de recoleccin, la parte que es utilizada, la naturaleza, cantidad y tipo de principio activo, los mismos que varan considerablemente de acuerdo a la familia, gnero y especie de cada planta medicinal y se debe proceder de forma rigurosa a su correcta identificacin, posterior preservacin, conservacin y preparacin.

Plantas peruanas nativas e introducidas evaluadas

EXTRACCION DEL MATERIAL VEGETAL

Una vez seleccionada y recolectada la especie que se quiere estudiar se dispondra de una cantidad apropiada de material vegetal seco que puede triturarse en mayor o menor grado,segn el caso y posteriormente someterse a la accin del disolvente oportuno en las condiciones y con la duracin adecuadas para conseguir la extraccin ms completa posible de las sustancias activas en el MV.

SCREENING FITOQUIMICO

El objetivo de la primera extraccin se centra en la obtencin de una pequea porcin de extracto, en cantidad suficiente que permita por un lado, la realizacin de los bioensayos preliminares programados , encaminados a demostrar la presencia de sustancias bioactivas en l y por otro disponer de materia para obtener cromatogramas (CF) en diversas condiciones de elucin, espectros de infrarojo(IR) y de Resonancia Magnetica Nuclear de protn (RMN), que sirvan para caracterizar suficientemente el extracto y proporcionar informacin sobre su probable composicin.

Manual de Tcnicas Experimentales . Proyecto X.10 . CYTED

CARACTERIZACION PRELIMINAR DE LOS EXTRACTOS

Para conseguir el aislamiento y purificacin de los principios activos , se recomienda utilizar algunas tcnicas fisicoqumicas e instrumentales que puedan informar sobre la naturaleza y composicin de los extractos y fracciones que se estn analizando y puedan permitir detectar la presencia de algunos tipos de metabolitos, alcaloides, flavonoide, esteroides, saponinas.

Como herramienta fitoqumica se utiliza un conjunto de tcnicas muy bien establecidas, que estn basadas en reacciones coloreadas, selectivas o especficas y que mediante reactivos de diverso tipo, aplicados generalmente de forma directa sobre el extracto o sus fracciones o sobre placas cromatogrficas desarrolladas, proporcionan informacin sobre la presencia de distintos grupos de metabolitos.
Manual de Tcnicas Experimentales .

OXIDACION DE MOLECULAS BIOLOGICAS Otro grupo de herramientas muy tiles se basan en la aplicacin de tcnicas espectrscopicas generalmente disponible. Es conveniente obtener espectros IR (neto) y RMN1H (Preferentemente en CDCl3 o DMSO-d6) del extracto o la fraccin, para tratar de detectar y estimar particularmente la presencia y la proporcin de componentes lineales y otros tipos de metabolitos secundarios definidos.

CARACTERIZACION PRELIMINAR DE LOS EXTRACTOS

La estimacin de la presencia de componentes lineales se consigue directamente mediante observacin simple de la intensidad y proporcin de las absorciones hacia 720 cm-1(IR) y 1,25 ppm (RMN 1H). La estimacin de componentes funcionalizados se puede llevar a cabo tambien mediante la observacin del espectro de IR, a travs de las absorvaciones que aparezcan en las regiones de 3,500-3000 cm-1(funciones NH y OH, olefinas y sistemas aromticos), 1800-1500 cm-1 (carbonilos, carboxilos e insaturaciones ) y 1100-800 cm-1 (teres e insaturaciones); complementandola con la observacin del espectro de RMN1H , en las zonas 13-8 ppm (H puente, aldehidos, amidas), 8-6 ppm (aromticos y olefnicos conjugados)), 6-3 ppm (olefnicos, alcoholes, steres, grupos metoxilo, azcares) y 3-0,5 (metilos) ppm.
Manual de Tcnicas Experimentales . Proyecto X.10 . CYTED (pag 37)

VALIDACION EXPERIMENTAL
Tamizaje In vitro (cluas , rganos aislados)

/ In vivo: preclnica (animales) y clnica (humanos) antiinflamatoria, antitumoral, antiviral espasmoltica, analgsica, diurtica, hipoglicmica, sedante, antioxidante, antiinfecciosa, cicatrizante, etc. Extraccin fraccionada ( > < polaridad) Fraccionamiento dirigido. Elucidacin estructural: a) Universidad de Salamanca. (Departamento de Qumica Farmacutica Dr. Arturo San Feliciano) b) Universidad Autnoma de Mexico (Instituto de Qumica. Dr. Ricardo Reyes Chilpa).

Plantas con accin antioxidante

Aunque el rutsido es relativamente frecuente en la naturaleza, solo un pequeo nmero de plantas lo contienen en cantidad suficiente para permitir su extraccin industrial. Se obtiene fundamentalmente a partir de la sfora (Sophora japonica L., Fabaceae), el trigo sarraceno (Fagopyrum esculentum Moench., Fagopyrum tataricum [L.] Gaertn., Polygonaceae), Eucalyptus macrorrhyncha F. Muell., (Myrtaceae), y Dimorphandra spp. (Caesalpinaceae). Por su contenido en flavonoides, la hoja de ginkgo (Ginkgo biloba, Ginkgoaceae) , tambin llamado rbol de los cuarenta escudos, es un excelente captador de radicales libres, lo que explica sus propiedades antioxidantes.

Ginkgo biloba.

Otras plantas utilizadas como antioxidantes en productos cosmticos por su contenido en flavonoides son la manzanilla (Chamomilla recutita [L.] Rauschert, Asteraceae), la calndula (Calendula officinalis L., Asteraceae) y el lpulo (Humulus lupulus, Cannabaceae), si bien tambin se emplean flavonoides puros, como el hesperidsido y el rutsido.

Vitis vinifera.

En el caso de la vid roja (Vitis vinifera L., Vitaceae)su utilizacin como antioxidante en la industria de los cosmticos se debe a la presencia de proantocianidoles.

Los flavanolignanos presentes en el fruto del cardo Mara (Silybum marianum [L.] Gaertn., Asteraceae) inhiben la peroxidacin lipdica de la membrana y actan como captadores de radicales libres. El principio activo mayoritario se conoce como silimarina, y est constituido por una mezcla de silibina, silicristina y silidianina.

Silibina, silicristina, silidianina

OTROS PRODUCTOS CON ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE Las ceramidas (esfingosinas N-aciladas por un cido graso) y glicosilceramidas del trigo y del arroz, que constituyen una alternativa de las ceramidas animales; la industria cosmtica las utiliza por su posible capacidad en la prevencin o atenuacin del envejecimiento cutneo.
Los cidos grasos insaturados (aceites). Como ejemplo podemos citar el aceite de ssamo (semillas de Sesamum indicum, Pedaliaceae), el aceite de maz (estigmas de Zea mays L., Gramineae), aceite de oliva (frutos de Olea europaea, Oleaceae) y aceite de cacahuete (semillas de Arachis hypogaea, Leguminosae).

Efecto antioxidante del hidroxitirosol procedente de la hoja de olivo (Olea europaea L)

El hidroxitirosol(2-(3,4-dihidroxifenil)etanol) es un compuesto fenlico presente en la hoja del olivo en forma libre y esterificada y que destaca del resto de polifenoles por sus mltiples actividades farmacolgicas como antimicrobiano con actividad in vitro frente a bacterias gram + y gram -, inhibidor de la formacin del leucotrieno B4 a nivel de la 5lipooxigenasa implicadas en el proceso antiinflamatorio e inductor de apoptosis en clulas HL-60. La actividad antioxidante del hidroxitirosol es una de las ms elevadas entre los polifenoles, siendo incluso superior a la de la Vitamina E.
P. de la Fuente, P Chamorro, M. Moreno. M.A Poza. Revista de Fitoterapia 2004;4(2):PI-PF 139,140

ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE ANTI-ESTRES DE MACA

EVALUACIN DE LA CAPACIDAD ANTIOXIDANTE DE PLANTAS MEDICINALES PERUANAS NATIVAS E INTRODUCIDAS. Dr. Castaeda C. B.1, Q.F. Ramos LL. E. 2, Dra. Ibez V. L. 3

RESUMEN Se evalu la capacidad antioxidante de veintinueve extractos de las siguientes plantas medicinales: Cinnamomum zeylanicum canela, Calophyllum brasiliense lagarto caspi, Myrciaria dubia camu camu, Minthostachys mollis mua, Alchornea castaneifolia hiporuro, Smallanthus sonchifolius yacn, Lepidium peruvianum y Lepidium meyenii maca, por el mtodo de la decoloracin del radical 2,2-difenil-1picrilhidrazilo (DPPH). Los resultados obtenidos al evaluar la capacidad antioxidante a las concentraciones de 1 ug/mL, 50 ug/mL, 100 ug/mL y 200 ug/mL fueron: canela (Extracto etanlico de la corteza) 97.59% a una concentracin de 1 ug/mL, lagarto caspi (E. Metanlico de hojas) 99.76% a 50 ug/mL, camu camu (E. Metanlico del fruto) 98.09% a 50 ug/mL, mua (E. Acuoso de hojas) 92.41% a 50 ug/mL, hiporuro (E. Metanlico de hojas) 100.57% a 100 ug/mL, Lagarto (E. Acuoso de hojas) 110.56% a 100 ug/mL, Lepidium peruvianum (E. Acuoso de hipoctilo) 95.55% a 200 ug/mL y Lepidium meyenii (E. Metanlico de hipoctilo) 88.21% a 200 ug/mL, en comparacin con el al cido ascrbico (Vitamina C) que present una actividad antioxidante en promedio de 92.82%.

DETERMINACION DE LA ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE POR EL METODO DEL DPPH

El Fundamento del mtodo desarrollado por BrandWillams et al , DPPH, consiste en que este radical tiene un electrn desapareado y es de color azulvioleta, decolorndose hacia amarillo plido por la reaccin de la presencia de una sustancia antioxidante siendo medida la absorbancia espectrofotomtricamente a 517 nm.
La diferencia de absorbancias permite obtener porcentaje de captacin de los radicales libres . el

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ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
Procedimiento: 1. Se prepar 100 ml una solucin de DPPH (2,2-difenil-1-picril hidrazilo) en metanol de 20 mg/L. 2. Luego se prepar una solucin metanlica de los extractos en una concentracin de 300 ug/ml (Solucin A) y de 600 ug/mL (Solucin D) 3. El Blanco se prepar con metanol agua 2:1 para ajustar el espectrofotmetro a cero. 4. El Blanco de muestra se prepar con 0.75 mL de muestra (solucin A) y 1.5 mL de metanol. 5. Se prepar el patrn de referencia con 1.5 mL de DPPH y 0.75 mL de agua. 6. Luego se procedi a preparar la muestra con 0.75 mL de solucin A y 1.5 mL de DPPH, obtenindose una concentracin final de 100 ug/mL, dejndose x 5 min. Y se ley a 517 nm en un espectrofotmetro. 7. Se midi la absorbancia del patrn de referencia y del blanco de la muestra. 8. Luego se diluy la solucin A con metanol en una proporcin 1:2 (solucin B) para obtener una concentracin final de 50 ug/mL, y en una proporcin de 1:10 (solucin C) para obtener una concentracin final de 1 ug/mL. 9. Con las soluciones B, C y D se procedi igual a los puntos 6 y 7.

Actividad Antioxidante

un

DPPH
(Forma radicalaria)

DPPH
(Forma reducida)

N N O 2N NO 2

Compuesto

Compuesto oxidado
HN O2 N

NO 2

O 2N

O2N

Violeta

Amarillo

Los extractos fueron evaluados por triplicado a diferentes concentraciones de 1, 25, 50, 100 y 200 ug/mL utilizando como frmaco control, vitamina C. Posteriormente con los valores de las absorbancias obtenidas se determin el % de captacin de radicales libres (DPPH) mediante la siguiente formula: = [ 1 (A2 A3) / A1 ] x 100

Capacidad Antioxidante % Captacin de Radical Libre

Donde: A1= Absorbancia del patrn de referencia A2= Absorbancia de la muestra A3= Absorbancia del blanco de muestra

Preparacin de soluciones antioxidantes

Medicin de absorbancias de las soluciones en el Espectrofotmetro

MUESTRA VITAMINA C (Control ) (Acido Ascrbico) Canela, corteza (Cinnamomum zeylanicum) 10% Lagarto, hoja (Calophyllum brasiliense) 20% Camu- camu, fruto (Myrciaria dubia) 10% Mua, hoja (Minthostachys mollis) 10% Hiporuro, hoja (Alchornea castaneifolia) 10% Lagarto, hoja (Calophyllum brasiliense) 10% Yacn, hoja (Smallanthus sonchifolius) 10% MACA KOKEN, hipoctilo (Lepidium peruvianum) 10%

Extracto

% CAPTACION DE RADICAL LIBRE (R.L.)

-----

92,82

Etanol

97.59 a

Metanol

99.76 b

Metanol

98.09 b

Acuoso

92.41 b

Metanol

75.96 b

Acuoso

110.56 c

Etanol

103.19 d

Acuoso

95.55 d

a 1 ug/mL, b 50 ug/mL c 100 ug/ mL d 200 ug/ mL

MACA AMAZON, hipoctilo (Lepidium meyenii) 10%

Metanol

88.21 d

Porcentaje de Captacin de Radical Libre x DPPH

Capacidad antioxidante % Captacin de R.L.

120 100 80 93 98 100 98 92 76

111

103

96

88

60 40 20 0
Vit C CAN - ET 1ug/ mL LAG - MET CAM - MET MU - AC 50 ug/ mL 50 ug/ mL 50 ug/ mL HIP - MET 50 ug/ mL LAG - AC YAC - ET MAC- K AC MAC- A AC 100 ug/ mL 200 ug/ mL 200 ug/ mL 200 ug/ mL

Concentracin

AISLAMIENTO E IDENTIFICACION DE PRINCIPIOS ACTIVOS DE PLANTAS CON ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE

LAGARTO CASPI , CALOPHYLLUM BRASILIENSE UNIVERSIDAD DE SALAMANCA (ESPAA)

LAGARTO CASPI , CALOPHYLLUM BRASILIENSE UNIVERSIDAD DE SALAMANCA (ESPAA)

LAGARTO CASPI , CALOPHYLLUM BRASILIENSE UNIVERSIDAD DE SALAMANCA (ESPAA)

Lepidium peruvianum Ch. MACA UNIVERSIDAD DE SALAMANCA (ESPAA)

Lepidium peruvianum Ch. MACA UNIVERSIDAD DE SALAMANCA (ESPAA)

MUCHAS GRACIAS
http://www.usal.es

(BECAS INTERNACIONALES)
Dra.

Lucy A. Ibez Vsquez lu_cy1964@yahoo.com libanezv@hotmail.com

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