Unidad 4.

Nutricin

Conceptos generales

Nutricin: captacin del medio de las sustancias para crecer Nutriente: cualquier elemento o compuesto qumico procedente del exterior, necesario para el metabolismo de un ser vivo Los nutrientes se necesitan para fines energticos o para fines biosintticos (reposicin de materiales celulares) Prottrofo: Organismo que no requiere de elementos nutritivos distintos a los que utilizaron sus antecesores del tipo silvestre. Pueden crecer en medio mnimo Auxtrofo: Microorganismo que ha desarrollado un requerimiento nutricional como resultado de una mutacin.

Productos de desecho Nutrientes

Energa para Energa

el movimiento, transporte de nutrientes,etc

Anabolismo

para el desarrollo

Componentes celulares

Catabolismo

Nutrientes

Tipos Nutricionales
Fuente de Carbono
Auttrofos Hetertrofos CO2 Molculas orgnicas

Fuente de energa
Fottrofos Quimitrofos Luz Oxidacin de compuestos orgnicos o inorgnicos Molculas inorgnicas Molculas orgnicas

Fuente de electrones
Littrofos reducidas Organtrofos

Tipos nutricionales

Energa de radiaciones fototrofa

Fotolitotrofa: captacin de energa lumnica con nutricin exclusiva a partir de sustancias inorgnicas y CO2 como fuente de carbono Fotoorganotrofa: captacin de energa lumnica con requerimiento de sustancias orgnicas como fuente de carbono. Quimiolitotrofa: energa qumica y electrones a partir de sustancias inorgnicas y CO2 como fuente de carbono Quimioorganotrofa: energa qumica , carbono y electrones a partir de sustancias orgnicas

Energa de sustancias qumicas quimiotrofa

Tipos nutricionales en microorganismos

FOTOLITOTROFO AUTOTROFO Bacterias prpuras y verdes del azufre, cianobacterias FOTOORGANOTROFO HETEROTROFO Bacterias prpuras y verdes no sulfreas QUIMIOLITOTROFO AUTOTROFO Bacterias del Hidrgeno, del Azufre, del Hierro, del Nitrgeno y muchas archaeas QUIMIORGANOTROFO HETEROTROFO Hongos , la mayora de bacterias no fotosintetizadoras, y algunas archaeas

Tipos de nutrientes
Macronutrientes: C, H, O, N, P, S, K, Mg
Micronutrientes : Nutrientes que se utilizan en

concentraciones traza. Ejm. Co, Cu, Zn, Mn, Mo, Va, etc
El mundo microbiano es de una sorprendente

diversidad metablica. Algunos metabolismos solo han evolucionado en procariotas. Ejemplos: entre los hetertrofos: Los metiltrofos que usan compuestos C1; Pseudomonas, que usan ms de 100 tipos de C orgnico, incluyendo hidrocarburos alifticos y cclicos; los fijadores de nitrgeno que desarrollan el proceso en vida libre o en simbiosis entre los quimiolittrofos : bacterias de hierro y del azufre que crecen en oscuridad en medios a base de sales minerales solamente.

Tipos de nutrientes

Universales: (los requeridos por todos los organismos): H2O, CO2, fosfatos y sales minerales Particulares: elementos que se pueden captar de diferentes maneras, segn el tipo de microorganismo: N: como N inorgnico (oxidado o reducido), como N orgnico; fijacin de N2 (en ausencia de N combinado) S: como S inorgnico o como S orgnico
requiere y que no puede sintetizar por mecanismos propios, por lo tanto deben ser aportados al medio de cultivo.

Factores de crecimiento . Materiales que la clula

Quimiolittrofos: la fuente de electrones es inorgnica. La fuente de carbono es el CO2 (autotrofa)

Compuesto inorgnico
Fuerza proton motora Flujo de electrones

CO2
Flujo de carbono

ATP

O2

Biosntesis

Quimiorgantrofos : la fuente de carbono y de electrones es la materia orgnica (heterotrofa)

Compuesto orgnico

Transporte de nutrientes
Tipos de transporte:
Pasivo inespecfico (difusin simple) Pasivo especfico (difusin facilitada) Activo Sistema sensible al choque osmtico Translocacin de grupos

Los dos ltimos slo se presentan en procariotas

Transporte pasivo: Difusin

Difusin pasiva : Es un transporte mediado por diferencia de concentraciones entre el medio externo y el medio interno celular . Como fenmeno de difusin, solo permite el ingreso a la clula de aquel material que se encuentre ms concentrado fuera que dentro de la clula. (movimiento a favor de la gradiente de concentraciones)
Por este mecanismo slo ingresan agua y gases, ya que la mayor parte de nutrientes en el medio externo, estn menos concentrados que en la clula : Oxgeno Dixido de carbono Amoniaco agua

Transporte pasivo: Difusin facilitada

Difusin facilitada : Es un transporte pasivo facilitado por una protena transmembrana que funciona como un canal para el paso de molculas cargadas o molculas pequeas que no pueden atravesar la membrana. Como proceso de difusin opera a favor de la gradiente de concentraciones para el movimiento de las molculas.

Transporte pasivo especfico : Difusin facilitada

Fuera de la clula

Membrana plasmtica

Dentro de la clula

Comparacin entre difusin simple y facilitada

Transportador saturado con sustrato Transporte facilitado por transportador proteico

Tasa de entrada del soluto

Difusin simple

Concentracin externa del soluto

Transporte activo
Transporte de sustancias en contra de un gradiente de concentracin requiere gasto energtico: A expensas de un potencial electroqumico de protones previamente existente (fuerza protn motora)
Requiere transportadores proteicos especficos e inducibles por el nutriente

Transportadores para Uniporte, Antiporte y Simporte

Membrana

Sodio-protn antiporte
Fosfato simporte Potasio uniporte Lactosa permeasa Sulfato simporte
Lactosa

dentro

fuera

Transporte sensible al choque osmtico

Ocurre en bacterias Gram negativas Requiere:
Porina de Membrana Externa Protena periplasmtica especfica Protena de membrana plasmtica Hidrlisis de ATP

Para la toma de una amplia variedad de azcares, amino cidos, vitamina B12, toma de siderforos, sulfato, fosfato, molibdato, poliaminas, etc

Transporte sensible al choque osmtico

Ejm: Transporte de Hierro

El hierro es altamente insoluble, por lo tanto su disponibilidad es baja en el medio Los microorganismos (bacterias y hongos) producen siderforos que son expulsados al medio Los siderforos complejan el in Fe y reingresan a la clula Es un transporte sensible al choque osmtico

Transporte de Hierro: Siderforos

Son molculas de bajo peso molecular producidas por bacterias y hongos para obtener hierro del medio Su naturaleza qumica es de hidroxamatos y catecolatos principalmente Se han identificado numerosos siderforos en bacterias : Ferricromo, Enterobactin, Enteroquelin, y otros

Ferricromo: siderforo tipo

hidroxamato

Enterobactin: siderforo tipo catecol

Translocacin de grupos
Sistema de transporte que acopla la entrada de un sustrato a su modificacin qumica a travs de una unin covalente El mas conocido es el Sistema Fosfotransferasa (PTS) Ha sido identificado en bacterias Gram positivas y Gram negativas. No es clara su existencia en eucariotas

Traslocacin de grupos: sistema

fosfotransferasa (PTS)
Funciona como una cadena que transporta fosfato de alta energa desde el PEP hasta el azcar a transportar. Componentes:

Dos protenas inespecficas, citoplsmicas y constitutivas: E-I y HPr Enzima-II (EII), especfica, de membrana e inducible por sustrato. Puede tener 3 dominios:

EIIA: citoplsmico EIIB: perifrico, ligado al lado citoplsmico, unido a... EIIC: transmembrana

Funcionamiento del sistema PTS de

azcares
El azcar se une a la parte externa de EII
Mientras tanto, en el citoplasma la EI cataliza transferencia de P desde PEP hasta HPr La HPr-P transfiere P a EII La EII-P fosforila al azcar El azcar ingresa a la clula

Sistema Fosfotransferasa
PTS

El oxgeno

Organismos aerobios: necesitan O2 para crecer

Aerobios estrictas Microaerfilos

Estrictos Condicionales

Organismos anaerobios

Estrictas Aerotolerantes facultativos

Los procariotas y el oxgeno: oxgeno y flavoprotenas

Las flavoprotenas se pueden autooxidar en presencia de O2, produciendo H2O2 (perxido de hidrgeno) y O2- (radical superxido), ambos txicos Proteccin frente al perxido:

Catalasa (H2O2 H2O + O2) Peroxidasa (H2O2 + NADH+H+ 2H2O + NAD+) SOD (2 O2- + 2 H+ O2 + H2O2)

Proteccin frente al superxido:

Superxido Perxido de hidrgeno Radical hidroxilo

Agua
Reaccin Global:

Catalasa:

Peroxidasa:

Superxido dismutasa:

(SOD)

Superxido dismutasa/catalasa en combinacin:

Superxido reductasa:

Reaccin de la catalasa

Jarra para cultivo en condiciones anaerobias

El Nitrgeno
Formas asimilables en bacterias: NH4, NO3, NO2 compuestos orgnicos, N2 Es el principal constituyente de aminocidos, cidos nucleicos, nucletidos y coenzimas

Asimilacin del Nitrgeno

Aunque existen 20 o ms aminocidos que forman las protenas, slo unos cuantos pueden ser producidos directamente mediante la asimilacin de amonio. El aminocido mas comnmente producido mediante asimilacin de amonio es el glutamato. Dos sistemas enzimticos estn involucrados en la conversin de -cetoglutarato a glutamato. El de la glutamato deshidrogenasa y el de la glutamina sintetasa-glutamato sintasa (GOGAT)

Asimilacin del Nitrgeno

A) En alta concentracin de Amonio: -cetoglutarato + NH4+ + NADPH glutamato + NADP
glutamato deshidrogenasa

B) En baja concentracin de Amonio*: Glutamato + NH4+ + ATP

glutamina sintetasa

Glutamina + ADP + Pi

-cetoglutarato + Glutamina + NADPH *Requiere ATP y dos enzimas

2 glutamato + NADP

glutamato sintasa

Algunos microorganismos contienen ambos sistemas, en otros casos, slo cuentan con uno de ellos siendo ms comn el sistema GOGAT

El azufre
Formas asimilables en bacterias: SO4, H2S, So, compuestos orgnicos sulfurados. Constituyente de la cistena,metionina, glutation y varias coenzimas.

Asimilacin del Azufre

2Pi ATP + SO4=
ATP sulfurilasa

APS (adenosina fosfosulfato)

APS + ATP
APS fosfocinasa

PAPS (fosfoadenosina fosfosulfato)

PAPS + NADPH + H+

SO3= + NADP S2+ NADP

PAPS reductasa

SO3= + 3 NADPH + 3 H+
Sulfito reductasa

S2- + acetil serina

L-cistena + acetato

Acetilserina sulfhidrilasa

El agua

Fuentes de agua: endgena (procedente de oxido-reducciones) exgena (procedente del medio, es la mas abundante)
El agua es el solvente en donde ocurren las reacciones qumicas y enzimticas de la clula y es indispensable para el desarrollo de los microorganismos. La disponibilidad de agua se mide como actividad de agua (potencial de agua; aw) La actividad de agua (aW) del medio representa la fraccin molar de las molculas de agua totales que estn disponibles, y es igual a relacin que existe entre la presin de vapor de la solucin respecto a la del agua pura (p/po). Variaciones en la actividad de agua pueden afectar la tasa de crecimiento, la composicin celular y la actividad metablica de la bacteria, debido a que si no disponen de suficiente cantidad de agua libre en el medio, necesitaran realizar ms trabajo para obtenerla y disminuir el rendimiento del crecimiento

Actividad de agua es la relacin entre la presin de vapor de agua del sustrato de cultivo (P) y la presin de vapor de agua del agua pura (P0):

El valor de la actividad de agua nos da una idea de la cantidad de agua disponible metablicamente. El valor de la actividad de agua est relacionado con el de la humedad relativa (HR) de la siguiente forma:

Cuando un microorganismo se encuentra en un substrato con una actividad de agua menor que la que necesita, su crecimiento se detiene.

Ejemplos de actividad de agua en microorganismos

El valor mnimo de aW en el cual las bacterias pueden crecer vara ampliamente, pero el valor ptimo para muchas especies es mayor a 0.99. Algunas bacterias halfilas crecen mejor con aW = 0.80, mientras que muchas levaduras pueden crecer en aW = 0.75 o menos en bacterias oligotrficas, aw est cercano a 1 en bacterias que viven en sangre y fluidos, aw = 0.995 en bacterias marinas, aw = 0.980 ciertos bacilos Gram-positivos en sequedad (aw = 0.950) microorganismos xerfilos (aw en torno a 0.75) arqueas halfilas extremas (Halobacterium) levaduras sacarfilas, que viven en zumos y jugos

Tasa de crecimien to

Actividad de agua aW

El CO2

El CO2 es requerido por todos los procariotas

los auttrofos lo requieren como fuente nica de carbono las arqueas metanognicas lo pueden usar como aceptor de electrones en la produccin de metano. Algunas lo usan tambin como fuente de carbono los hetertrofos necesitan pequeas cantidades de CO2 para sus carboxilaciones en rutas metablicas

Fosfatos

El P suele requerirse en forma de fosfatos

bacterias que usan fosfatos orgnicos (poseen fosfatasas extracelulares (secretadas) en Grampositivas periplsmicas en Gram-negativas fosfatos inorgnicos (las bacterias que usan fosfatos orgnicos no dependen de ellos, ya que tambin usan fosfatos inorgnicos)

Sales minerales: cationes

K+ (en activacin de enzimas) Mg2+ (estabiliza ribosomas, membranas y cidos nucleoicos; cofactor en reacciones con ATP; en clorofilas y bacterioclorofilas) Ca2+ (cofactor de enzimas como proteinasas) Fe2+ (en citocromos, FeS-protenas; cofactor en enzimas) Como micronutrientes Mn2+ (cofactor de ciertas enzimas) Co2+ (vitamina B12) Zn2+ (estabiliza ADN-polimerasas y ARN-polimerasas) Mo (en molibdoflavoprotenas, en la nitrogenasa) Ni (en hidrogenasas)

Factores de crecimiento

Son molculas orgnicas especficas requeridas en muy pequeas cantidades por algunas bacterias No tienen funcin plstica (no sillares de macromolculas) ni sirven de fuente de energa suelen ser coenzimas o sus precursores, vitaminas, que determinadas bacterias no pueden sintetizar por s mismas las deben tomar del medio ambiente Ejemplos: Brucella requieren biotina, niacina, tiamina y pantotnico Haemophilus necesita hemo y piridn-nucletidos

Efecto de la temperatura sobre el crecimiento

Las reacciones enzimticas ocurren a la mxima tasa posible.

Las reacciones enzimticas ocurren a tasas incrementadas

Optimo

Mnimo
Mximo

Los procesos de transporte se vuelven tan lentos que el crecimiento no es posible

Desnaturalizacin de protenas, colapso de la membrana citoplasmtica. Muerte trmica

Temperaturas cardinales

Clases de microorganismos segn la temperatura

Psicrfilos

Obligados (temperatura ptima a 15-18C, pueden vivir en temperaturas ms bajas) Facultativos, psicrotolerantes o psicrotrofos (temperatura ptima a 20-30C pero resisten el fro)

Mesfilos (Tptima en 25-40C) Termfilos (Tptima en valores >50C)

Hipertermfilos (ptimos >80C) Termfilos facultativos: pueden crecer a <37C

Microorganismos psicrfilos

Hbitats fros:

Aguas ocenicas, especialmente los fondos (1-2C) Bolsas de agua en rtico, Antrtico, glaciares, etc. Enzimas crio-resistentes Sistemas de transporte adaptados a fro Fosfolpidos de membrana poliinsaturados (4-9 dobles enlaces)

Adaptaciones bioqumicas al fro:

Microorganismos termfilos

Hbitats permanentemente calientes:

Fuentes termales volcnicas terrestres Fuentes termales submarinas Acmulos de compost y ensilados

Adaptaciones bioqumicas

Enzimas y ribosomas termorresistentes Membranas ricas en A.G. saturados En Archaea: teres de hidrocarburos con glicerol, e incluso monocapas bioqumicas bifitaniltetrateres

Efecto de las radiaciones sobre los

microorganismos

Radiaciones y biomolculas Radiaciones ionizantes: efectos y aplicaciones Radiaciones ultravioleta: efectos y aplicaciones Efectos de la luz visible

Radiaciones
Se llama radiacin a toda energa que se propaga en forma de onda a travs del espacio En el concepto de radiacin se incluye, desde la luz visible hasta las ondas de radio y televisin (radiaciones no ionizantes), y desde la luz ultravioleta a los rayos X o la energa fotnica (radiaciones ionizantes).

Radiaciones electromagnticas

Si la energa del fotn es >10 keV radiaciones ionizantes (1 kiloelectron voltio = 1.60217646 10-16 joules ) Originan cadenas de ionizaciones, en las que se forman pares de iones (uno con carga + y otro con carga -) Esto lleva a cambios qumicos en el sistema Si la energa es <10 keV radiaciones no ionizantes. El electrn se excita, y al volver al estado basal puede dar fenmenos de: Fluorescencia Fotosensibilizacin Reacciones fotoqumicas Emisin de calor

Efectos de las radiaciones ionizantes (I)

Radiaciones ionizantes: Rayos X Rayos gamma Las bacterias son ms resistentes que organismos superiores (valores D10):

Endosporas: 2000-3000 Gy (1 Gy = 1 J/kg) Deionococcus radiodurans: 2200 Gy Bacterias normales: 200-600 Gy Homo sapiens: su dosis letal es solo 10 Gy

Efectos de las radiaciones ionizantes (II)

Efecto letal directo (a altas dosis): Roturas y entrecruzamientos en el cromosoma que no se pueden reparar Efecto mutagnico: Daos menores que se reparan por mecanismos propensos a error Efecto letal indirecto: por radilisis del agua, que genera radicales OH letales Si adems, hay oxgeno formacin de perxidos y epxidos que son letales

Aplicaciones de las radiaciones ionizantes

Para la esterilizacin de: Material farmacutico (antibiticos, hormonas, etc) Material mdico-quirrgico (guantes cirujano, suturas, jeringas, agujas, bistures, catteres, prtesis, etc) Algunos alimentos envasados (en algunos pases). Reconocida su seguridad por la OMS y otras agencias sanitarias

Efectos de las radiaciones ultravioleta

El espectro de accin de los rayos UV coincide con el espectro de absorcin del ADN: 260 nm No tienen actividad ionizante, pero originan fotoproductos en el ADN: Dmeros de pirimidina (ej.: T-T) Fotoproducto de la endospora Hidratos de pirimidina

Aplicaciones prcticas de la luz UV

Producida por lmparas de vapor de mercurio (emiten a 254 nm) La luz UV no penetra en slidos, poco en lquidos y se apantalla por vidrio Aplicaciones: Lmparas de desinfeccin de aire en hospitales y laboratorios En investigacin: mutagnesis

Efectos de la luz visible

Efecto negativo indirecto: sensibilizacin fotodinmica Las riboflavinas, citocromos, etc se excitan con luz solar directa, y originan: Fotooxidaciones en protenas y ADN 1 Se generan singletes de oxgeno (O 2 ) radical muy reactivo, oxidante, destructivo Se recomienda no dejar los cultivos expuestos a la luz solar (se cultivan en oscuridad, salvo las bacterias fotosintticas, que se protegen por carotenoides y otros pigmentos)

Efecto de la presin hidrosttica

Las bacterias de hbitats continentales no soportan grandes presiones Bacterias marinas: Barotolerantes: crecen a presin atmosfrica, pero aguantan hasta 500 atm Barfilas Moderadas: ptimo a 400 atm, pero soportan hasta 1000 atm.(viven entre 5000 y 7000 metros) Extremas: ptimo a > 600 atm, y no crecen a presin atmosfrica (viven en fosas marinas a 10.000 m)

Efecto de la presin osmtica

En medios hipotnicos, la pared celular se opone a la entrada de agua En medios hipertnicos, las bacterias tienen mecanismos para aumentar la osmolaridad interior: solutos compatibles

Solutos compatibles

Bombeo de iones K+ al interior Sntesis de solutos orgnicos compatibles: En bacterias: glutamato, glutamina trehalosa En levaduras: polioles (sorbitol, ribitol) A grandes osmolaridades externas, la bacteria puede bombear un osmoprotector: Prolina Betana (glicn-betana)

Microorganismos osmfilos

Sacarfilos (sobre todo levaduras) Solutos compatibles: polioles Halotolerantes (ej. Staphylococcus aureus) Halfilos Moderados (ej: bacterias marinas): 3,5% de NaCl Hiperhalfilos (arqueas Halobacterium): requieren saturacin de NaCl + + Soluto compatible: K : acumulan hasta 7 M de K + Requieren gran [Na ] para mantener la integridad de sus envolturas

Efecto del pH

Neutrfilos (pH entre 5.5-8) Acidfilos: Thiobacillus: crecen a pH 2 Arqueas Sulfolobus, Thermoplasma, Ferroplasma: crecen a pH 2 Arquea Picrophilus: ptimo a pH 0.7 (!) Alcalfilos obligados: pH>10 Viven en lagos alcalinos o suelos carbonatados Algunos son tambin halfilos

pH mnimo, mximo y ptimo para el crecimiento de ciertos procariotas

Organismo Thiobacillus thiooxidans Mnimo pH 0.5 Optimo pH 2.0-2.8 Mximo pH 4.0-6.0

Sulfolobus acidocaldarius
Bacillus acidocaldarius Zymomonas lindneri Lactobacillus acidophilus

1.0
2.0 3.5 4.0-4.6

2.0-3.0
4.0 5.5-6.0 5.8-6.6

5.0
6.0 7.5 6.8

Staphylococcus aureus
Escherichia coli Clostridium sporogenes Erwinia caratovora

4.2
4.4 5.0-5.8 5.6

7.0-7.5
6.0-7.0 6.0-7.6 7.1

9.3
9.0 8.5-9.0 9.3

Pseudomonas aeruginosa
Streptococcus pneumoniae Nitrobacter sp

5.6
6.5 6.6

6.6-7.0
7.8 7.6-8.6

8.0
8.3 10.0