Inmunidad Innata

Facultad de Qumica/Facultad de Ciencias Junio 2009

Ana M. Ferreira

Defensas innatas existen en invertebrados y vertebrados

Reptiles

Mamferos Aves
F C Y
F C LY

F C L R Y

Anfibios
F L F L R F R

F C Y
F C R Y

Crustceos Insectos Arcnidos Ciclstomos

Telesteros

Elasmobranquios
F C (Y)

F Y

420 millons

Artrpodos

Equinonodermos
F R

Tunicados
F L R

Cordados

600 millons

Nematodos Flagelados Hongos Procariota Bacteria

F F F

Gusanos planos Amebas Esponjas

F Clulas fagocticas C Complemento L Lectinas (C-type lectins) R Protena C-reactiva

Eucariota primitivo

y Anticuerpos

La inmunidad innata controla y/o limita el progreso de la infeccin e instruye a la inmunidad adaptativa
Infeccin

Reinfeccin

Mecanismos efectores
I N F L A M A C I O N

Mecanismos efectores

MEMORIA

PROTECCION

RESPUESTA INNATA
HORAS

RESPUESTA ADAPTATIVA ADQUIRIDA

DIAS - SEMANAS

Diferentes componentes de la inmunidad participan en el reconocimiento y eliminacin del agente a lo largo del tiempo
Componentes generados en semanas

Componentes inducidos en pocas horas/das

Componentes constitutivos RESPUESTA INNATA RESPUESTA ADQUIRIDA o ADAPTATIVA

Clulas que participan en la respuesta innata

SANGRE neutrfilos
macrfagos

TEJIDOS

basfilos c. dendrticas eosinfilos mastocitos

monocitos

OTRAS CELULAS Epiteliales

natural killer

Endoteliales

Barreras fsicas y bioqumicas controlan el ingreso de patgenos

Lisozima en lgrimas y otras secreciones comensales

Mucosas (400m2)
Epitelios de revestimiento: respiratorio digestivo gnito-urinario

Piel

(1,5-2m2)

(barrera fsica) Cilias

Bajo pH y comensales en la vagina defensinas + -------------

Mucus

Pptidos antimicrobianos
defensinas

Glicoclix

Membrana procariota

Defensas innatas: una mirada global

Reconocimiento
Selectivo Limitado a patgenos (PAMPs) y componentes asociados a dao tisular (DAMPs)

bacterias

piel

Activacin Mecanismos efectores

Muerte del patgeno
lisis fagocitosis (bacterias) apoptosis (clulas infectadas
por virus)

Clula dendrtica inmadura

Mastocito

Macrfago

Complemento
Vaso sanguneo
Neutrfilo

Monocito

Inflamacin

mediada por molculas vasoactivas y quimiotcticas

Qu componentes son reconocidos por el SISTEMA INMUNE INNATO?

PATOGENOS SEALES DE PELIGRO
Virus Bacterias Hongos Parsitos

Bacilos en vas urinarias

DAO TISULAR

Charles Janeway

Cocos en vas respiratorias

Dao tisular Parsitos intestinales

El sistema inmune evolucion en respuesta a seales de peligro

Receptores del Sistema Inmune

Receptores solubles Receptores de membrana
Neutrfilos Macrfagos Dendrticas

Ligandos
Tienen especificidad restringida a un conjunto finito de seales de peligro
PAMPs: motivos en patgenos DAMPs: motivos endgenos

Colectinas (MBL) y Ficolinas

Receptores TLRs, NLRs, RIG-I, Receptores tipo lectina Receptores barrenderos

I N N A T O

BCR

Linfocitos B

Son altamente diversos:

10

TCR

Linfocitos T

motivos diferentes
12

Inmunoglobulinas

A D Q U I R I D O

Reconocimiento de seales de peligro en patgenos:

PATRONES MOLECULARES ASOCIADOS A PATOGENOS (PAMPs)
PARED BACTERIANA Lipopolisacrido (LPS)

Acido Pptidoglicanos teicoico

ARN Y ADN VIRALES

DNA no metilado

Flagelina (protena)

Gram -

Gram + RNA doble hebra

PARED DE LEVADURAS

Reconocimiento de seales de peligro endgenas :

PATRONES MOLECULARES ASOCIADOS A DAO (DAMPs)

Componentes derivados de degradacin de matriz extracelular: cido hialurnico y

fragmentos de fibronectina
hialuronano fibronectina

degradacin

degradacin

cido hialurnico
fragmentos

Componentes derivados de clulas necrticas: ATP, cristales de cido rico

Componentes derivados de la inflamacin generada:

Protenas de shock trmico Defensinas Componentes modificados por productos txicos: lipoprotenas oxidadas

Receptores del Sistema Inmune

Inmunidad Innata
Estn codificados a nivel de la lnea germinal, son receptores no clonales Se expresan en un variedad de clulas incluyendo:

Inmunidad Adquirida
Estn codificados por un conjunto de segmentos gnicos; el receptor funcional en cada clula surge de un proceso de recombinacin de estos segmentos: son receptores clonales Se expresan solamente en linfocitos B yT
Precursor del linfocito B
Segmentos gnicos en la lnea germinal

Monocitos

Macrfagos

Neutrfilos

Clulas dendrticas

Recombinacin

Linfocito B
Gen que codifica el BCR en la clula B madura

Las caractersticas de la respuesta inmune dependen del tipo de patgeno; su estructura y localizacin celular

Intracelular
Sitio de la infeccin

Extracelular

Citosol

Vesculas

Intersticios

sangre / linfa

Epitelios de revestimiento

Agente

Virus

Bacterias
Salmonella spp Legionella spp Micobacterium spp

Virus (fase extracelular)

Virus (fase extracelular)

Bacterias
Shigella spp Listeria spp

Bacterias
Parsitos (helmintos)

Bacterias
Helicobacter pylori Streptococcus spp Pseudomonas

Protozoarios

Protozoarios

Trypanosoma spp Leishmania spp

Parsitos (helmintos)

Tipos de receptores y efectos inducidos por el reconocimiento de seales de peligro 1. La infeccin por bacterias
PRR solubles

ACTIVACION DEL COMPLEMENTO

bacteria

citoquinas, pptidos antimicrobianos,

ncleo

opsonizacin

FAGOCITOSIS

enzimas que sintetizan oxidantes y mediadores lipdicos

Receptores de membrana

PRRs que disparan vas de sealizacin Receptores fagocticos (PRRs o receptores de opsoninas)

INFLAMACIN

Receptores que inducen activacin celular e inflamacin Receptores de la familia Toll (TLRs)
Dominio extracelular de UNION al ligando
dominio LRR (leucine-rich repeats) diverge entre diferentes TLRs y entre homlogos de diferentes especies ligandos incluyen PAMPs y DAMPs

Los receptores TLR forman homo o heterodmeros

Dominio transmembrana
CITOSOL

Membrana (plasmtica o de una vescula intracelular)

Dominio citoplasmtico ACTIVADOR

dominio globular TIR (Toll /IL-1R) une protenas citoslicas activa vas de sealizacin

Distribucin y ligandos de diferentes miembros de la familia TLR

lysing bacteria

Vas de sealizacin desencadenadas por TLRs

IRF-3

NFB /IRF-5

NFB
NFB
Expresin de IL-1, TNF, IL-8, IL-12 Defensinas, NOS2

IRF-5

Receptores que inducen activacin celular e inflamacin

Receptores de la familia NOD (NLRs)
Son receptores citoslicos El dominio LRR interviene en la unin del ligando
Peptidoglicano de la pared bacteriana

Importantes en el reconocimiento de bacterias intracelulares y extracelulares

Expresados en DC, macrfagos y algunos NLRs tambin en epitelios Poseen un dominio central NOD
NOD2 NOD1
Nt

(nucleotide-binding oligomerization domain)

CARD CARD
Nt

NOD NOD

LRR LRR

Ct Ct

CARD

NOD2, NLRP3

Nodosoma

NLRC4 NALPs

Nt Nt

CARD

NOD NOD

LRR LRR

Ct Ct

PYD

Inflamasoma

Flagelina

Efectos inducidos a travs de la sealizacin por NLRs:

formacin del nodosoma e induccin de ILs
Bacterias Gram negativas
GM-triDAP MDP

Porinas bacterianas

Bacterias Gram negativas y Gram positivas

Citosol

Ncleo

Nodosoma
Citoquinas proinflamatorias

Shigella flexneri Helicobacter pylori Enteroinvasive Escherichia coli Chaamydia species Salmonella typhimurium Streptococcus pneumoniae Listeria monocytongenes

PRR unen e internalizan patgenos o clulas daadas

Receptores Barrenderos (SR)

Receptores asociados a la fagocitosis

Receptores lectina tipo C

Dectin-1, DEC205, DC-SIGN unen -glucanos y mananos

unen LPS, ac lipoteicoico motivos apoptticos

reconoce residuos manosa y fucosa en glicoconjugados expuestos en los patgenos

Receptor lectina tipo C (Receptor de Manosa, ManR)

dominio ITAM activador

Lisosomas y grnulos

Fagolisosoma: destruccin del patgeno

Mecanismo de la fagocitosis
lisosoma

Partcula

grnulos
Estallido respiratorio:

fagosoma

fagolisosoma

Especies reactivas del Oxgeno HOCl MPO O2 SOD H2O2

Especies reactivas del Nitrgeno

.O 2

2 O2 2 .O 2 Sistema

NADPH oxidasa
NADPH2+

O2 Arginina

iNOS
xido ntrico sintasa inducible

citrulina

CITOSOL

Receptores opsnicos y activadores del complemento la lectina de unin a mananos (MBL)

Motivo glucdico (por ej. manano) presente en patgenos

Kd10-3M
GlcNAc Manosa L-Fucosa

Kd10-9M

Domino de reconocimiento de carbohidratos (CRD) Dominio colgeno

ACTIVACION DEL COMPLEMENTO

Subunidad

Opsonizacin

MASP (serin-proteasa asociada a MBL)

El Sistema Complemento: Nomenclatura y sntesis

Consiste de ~30 protenas solubles y de membrana, constitutivamente expresadas y ampliamente distribuidas en los tejidos La mayora de las protenas plasmticas son definidas como componentes CX (C1, C2, C3 a C9). Otras son llamadas factores (factores H, I, P) Algunos de los componentes de membrana celular son receptores para productos del complemento (i.e. CR1, CR2).

IL6

Hgado

Sntesis extra heptica

C1r C1s C2 C4 H I C5 C6 C8 C9
C1q D C7

C3

MBL

Monocito Macrfago

Fibroblasto

Clulas Clulas epiteliales endoteliales

Mayora de los componentes

La activacin del complemento involucra la protelisis limitada del componente C3 por serina proteasas
C3
SS SC=O SS

C3 convertasa
SS C3a

C3b
SS

SC=O NH2 OH

NH2

Dos vas para la activacin del complemento

Va alternativa
C3b + B D Ba

C3 convertasa
C3bBb

C5 convertasa
C3b2Bb

Inhibidores
Factor H y Protenas de membrana

Va ltica

C3

C3b
C3a

C5

C6

C5b
C7

C8 nC9

C5b-9n

C5a

MAC

C4 + C2 MBL / MASP MBL / MASPact

C4b2a

C4b3b2a

C3 convertasa C4a
+ C2b

C5 convertasa

Carbohidratos conservados en patgenos

Va de las lectinas

La activacin de la va alternativa procede en la ausencia de inhibidores sobre la superficie de los patgenos

C3
C S

Amplificacin
60 mseg
D

C3 convertasa
C O S

C3a

C3 convertasa C3bBb
C O N

H I

B B C3b Bb
C=O N

C3
C-S

NH2

C O

C3d C3b C3b C3b C3b

C=O N C=O N C=O N C=O N

NH2

Superficie activadora Patgeno

Inhibidores sobre las membranas de las clulas detienen la activacin de la va alternativa

C3
C S

Inhibicin de la formacin de la Convertasa de C3

C O S

H
C3b
C=O N

Aceleracin del decaimiento de la convertasa

Bb

Inactivacin de C3b por factor I

C3bBb H
C O N

C3d C3b
C=O N

Clula del hospedero DAF (CD55)

NH2

CR1 (CD35)

Inhibidores de membrana

Clula del hospedero

Por qu C3b se une con mayor afinidad al factor H sobre la superficie de clulas eucariotas?
El factor H se une a GAGs sobre la membrana de clulas eucariotas
Localizacin de dominios funcionales en el Factor H/ FHL-1
Cofactor/Actividad de decaimiento

FH
FHL-1

Adhesin celular
14 13

C3b
C=O N

12
9 7 20

1 2 3 4

Unin a C3b

GAGs

Unin a polianiones (heparina y cido silico)

La activacin del complemento y la va ltica

Va Alternativa
C3b + B

Inhibidores Factor H, DAF, CR1

Ba

C3bBb

C3b2Bb

Va Ltica

C3

C3b
C3a

C5

C5b

C6

C8 nC9

C5b-9n

C5a

C7

MAC

C4 + C2

C4b2a

C4b3b2a

MBL

MBL / MASPact C4a Carbohidratos conservados

/ en patgenos

MASP

C2b

Va de las Lectinas

El complejo C5b-9 (MAC) se ensambla en membranas celulares conduciendo a la lisis celular

Los complejos C5b9 tienen el aspecto de poros que perforan las membranas celulares

Membranas artificiales

Bacteria intacta

Bacterias lisadas por complemento

La susceptibilidad a la lisis por complemento depende de la estructura de la pared bacteriana

Complejos C5b7 C8
Cpsula
Peptidoglicanos Membrana celular

C9

LPS
CYTOSOL Gram + Gram -

Productos generados por activacin del complemento

Va Alternativa
C3b + B D Ba

C3bBb

C3b2Bb

C3

C3b
C3a

C5

C6

C5b
C7

C8 nC9

C5b-9n

C5a

C4 + C2 MBL / MASP MBL / MASPact

C4b2a
C4a
+ C2b

C4b3b2a

C4
O

Carbohidrates conservados en patgenos

C4b
C=O N

Va de las Lectinas

La MBL y los fragmentos C3b, iC3b y C4b son opsoninas

Opsonina del complemento

bacteria

MBL C3b C3bi C4b

CR

Clula fagoctica

Productos generados por activacin del complemento

Va Alternativa
C3b + B

D Ba

C3bBb

C3b2Bb

C3

C3b
C3a

C5

C6

C8

C5b

C5b-9n
nC9

C5a

C7

C4 + C2 MBL / MASP MBL / MASPact

C4b2a

C4b3b2a

Carbohidratos conservados en patgenos

C4a

C2b

Va de las lectinas

C3a, C4a y C5a son molculas vasoactivas y quimiotcticas

Modificaciones en el endotelio: Incremento de la permeabilidad y de la expresin de molculas de adhesin celular

Aumento de la permeabilidad permite la extravasacin de molculas

Extravasacin de leucocitos Migracin y activacin celular

Mltiples receptores intervienen en el reconocimiento de bacterias y en el disparo de la respuesta inflamatoria

Macrfago DC
C3b
C=O O

CR

SR

TLRs

Dectina
ManR TLRs
Mananos

MBL
Peptidoglicanos Motivos CpG

C3b
LPS
C=O O

Flagelina

LPS

CiTOSOL

Porinas bacterianas

TLR
NLRs Porinas bacterianas

Tipos de receptores y efectos inducidos por el reconocimiento de seales de peligro 2. La infeccin viral
Virus

ACTIVACION DEL COMPLEMENTO

ncleo

Opsonizacin
(C3b, C3bi)

citoquinas, pptidos antimicrobianos

FAGOCITOSIS

MACROPINOCITOSIS
PRR que disparan vas de sealizacin

INFLAMACIN

Receptores Receptores fagocticos PRRs de membrana

CR3 para opsoninas del complemento

Distribucin y ligandos de diferentes miembros de la familia TLR

Vas de sealizacin desencadenadas por TLR9 y TLR3

Receptores asociados a activacin celular y disparo de la inflamacin Receptores de la familia RLRs

Son receptores citoslicos
Importantes en el reconocimiento de virus

Expresados en DC, macrfagos, fibroblastos y clulas epiteliales Poseen dominios CARD, helicasa y un dominio Ct llamado represor (RD)
RIG-I Mda5
Nt Nt

En RIG-I, el dominio RD estara involucrado en el reconocimiento del ligando

CARD CARD CARD CARD

Nt

RNA helicasa RNA helicasa RNA helicasa

RD RD RD

Ct Ct

LGP2 inhibidor?

Ct

Efectos inducidos por la activacin a travs de RLRs:

induccin de IFN de tipo I (/) e ILs proinflamatorias

Apoptosis

ILs proinflamatorias

Efectos antivirales inducidos por los IFN de tipo I

citosol

Inhibicin de la traduccin

Degradacin del ARNm

Inhibicin de la transcripcin Inhibicin del ensamblaje del virus

linfocitos especializados en destruir clulas infectadas por virus

Las clulas Asesinas Naturales (NK)

Componentes inducidos en pocas horas/das

Linfocitos NK
linfocitos grandes y granulares que participan de la inmunidad innata

5-20% de las clulas de la sangre

reconocen las clulas infectadas y tumorales

Mdula sea
Clula madre pluripotencial
Progenitor mieloide

Progenitor linfoide

Clula NK

Activacin de linfocitos NK
NK destruyen clulas que no expresan MHC-I La activacin de la clula NK induce la muerte de la clula infectada por apoptosis
Contacto con la clula NK La clula se achica y se condensa su cromatina

Clula blanco

Fragmentacin del ncleo

NK destruyen clulas MHC-I + que expresan seales estimulatorias

Formacin de cuerpos apoptticos

Infeccin viral:
mediadores de la respuesta inflamatoria

herida

epitelio
Clula Dendrtica

Apoptosis
NK

Apoptosis
IFN/ IFN/ IL-1, TNF-

Mastocito

Macrfago

NK NK

Monocito Neutrfilos

Vaso sanguneo

Cules son los efectos de los mediadores de la inflamacin sobre los vasos sanguneos?
Contraccin de las clulas endoteliales Relajacin del msculo liso en las arterias Aumento del flujo sanguneo

Aumento de la permeabilidad
Inducen la expresin de molculas de adhesin

Vasodilatacin
arteria vnula arteriola

vena Venoconstriccin

Red Capilar
endotelio
Seccion transversal de un capilar

t. conectivo t. muscular liso endotelio

Seccion transversal de una arteria

La inflamacin media el reclutamiento de los leucocitos de la sangre al sitio de la infeccin

sangre
2-integrina receptor de quimioquina

RODAMIENTO

ACTIVACIN

ADHESIN FUERTE TRASVASACIN

ligando de selectina

endotelio

E-selectina P-selectina

ICAM-1 proteoglicano + quimioquina

activacin endotelial

IL1

TNF

quimioquinas

tejidos

DCs/macrfagos / mastocitos

bacterias

QUIMIOTAXIS

Molculas de adhesin -selectinas e integrinas- median la unin de leucocitos al endotelio vascular y su posterior extravasacin

Una vez en el tejido, las clulas migran bajo la direccin de molculas quimioatrayentes: C5a, C3a y quimioquinas
Quimioquinas IL-8 MCP-1

C5a, C3a

Macrfago

Neutrfilo

Capilar

Cul es el destino final del lquido y las clulas que se acumulan en el sitio de la infeccin?

Tejido sano

Tejido infectado
color, calor, dolor, tumor

INFLAMACION

Conexin entre la circulacin linftica y sangunea

Circulacin sangunea
vena arteria

Red Capilar

TEJIDOS

Capilares linfticos Vasos linfticos ganglio linftico

Vena subclavia izquierda

conducto torxico

Red de ganglios linfticos

La inflamacin media el drenaje a los ganglios del lquido y las clulas que se acumulan en el sitio de la infeccin
Antgeno

La activacin de los linfocitos T requiere el reconocimiento del Ag y de molculas coestimuladoras

La activacin de los linfocitos T est influenciada por citoquinas producidas en la respuesta innata

Las DCs cumplen un papel fundamental en la conexin entre la Inmunidad Innata yAdquirida
Clula Dendrtica residente en la periferia, inmadura

Clula Dendrtica que migra a los ganglios, madura

La calidad e intensidad de la respuesta innata determinarn el tipo e intensidad de la respuesta adaptativa

Antgeno

La respuesta se adapta al patgeno

traduciendo la

informacin de la respuesta innata La informacin del tipo de respuesta innata depende de los receptores involucrados en el reconocimiento

INMUNIDAD INNATA

INMUNIDAD ADAPTATIVA

La activacin de las clulas y molculas es inmediata a la entrada del patgeno y ocurre en el sitio de la infeccin.

La activacin de los linfocitos no es inmediata a la entrada del patgeno, sino que ocurre una vez que el agente es transportado al ganglio. Las fases de reconocimiento y activacin ocurren en el ganglio , y la fase efectora en el sitio de la infeccin

Las fases de reconocimiento, activacin y eliminacin tienen lugar en el sitio de la infeccin

La inflamacin acta como un nexo entre los dos sistemas: -dirige el trnsito celular -provee los estmulos necesarios para la activacin de la I. Adaptativa