Inhibicin enzimtica

Inhibidor:

Efector que hace disminuir la actividad enzimtica, a travs de
interacciones con el centro activo u otros centros especficos
(alostricos).

Esta definicin excluye todos aquellos agentes que inactivan a
la enzima a travs de desnaturalizacin de la molcula enzimtica

De esta forma, habr dos tipos de inhibidores:

I. Isostricos: ejercen su accin sobre el centro activo
II. Alostricos: ejercen su accin sobre otra parte de la
molcula, causando un cambio conformacional con
repercusin negativa en la actividad enzimtica.
Los inhibidores isostricos pueden ser de dos tipos:
1. Inhibidor reversible: establece un equilibrio con la enzima libre,
con el complejo enzima-substrato o con ambos:
E + I EI
2. Inhibidor irreversible: modifica qumicamente a la enzima:
E + I
E
ES + I
ESI
Inhibicin reversible
(a) El inhibidor se fija al centro activo de la enzima libre,
impidiendo la fijacin del substrato: Inhibicin Competitiva

(b) El inhibidor se fija a la enzima independientemente de que lo
haga o no el substrato; el inhibidor, por tanto, no impide la
fijacin del substrato a la enzima, pero s impide la accin
cataltica: Inhibicin No Competitiva

(c) El inhibidor se fija nicamente al complejo enzima-substrato
una vez formado, impidiendo la accin cataltica; este tipo
se conoce como Inhibicin Anticompetitiva
E ES
EI
I
S
E + P
Inhibicin
Competitiva
Las fijaciones de substrato e inhibidor son
mutuamente exclusivas; el complejo EI no es productivo
E ES
EI
I
S
E + P
I
ESI
S
Inhibicin
No Competitiva
El inhibidor se fija indistintamente a la enzima libre E
y al complejo enzima-substrato ES; ni el complejo EI
ni el complejo ESI son productivos
E ES
S
E + P
I
ESI
Inhibicin
Anticompetitiva
El inhibidor slo puede fijarse al complejo ES;
el complejo ESI no es productivo
E ES
EI
I
S
E + P
Caractersticas:
- Las fijaciones de substrato e inhibidor son mutuamente exclusivas
- A muy altas concentraciones de substrato desaparece la inhibicin
- Por lo general, el inhibidor competitivo es un anlogo qumico del
substrato.
- El inhibidor es tan especfico como el substrato
Se define una constante de
equilibrio de disociacin del
inhibidor:
K
i
=
[E] [I]
[EI]
Inhibicin Competitiva
En condiciones de equilibrio rpido, llamando y a la concentracin
del complejo EI, para la inhibicin competitiva obtenemos el siste-
ma de ecuaciones
v
V s
K
i
K
s
mx
m
i
=
+
|
\

|
.
| + 1
K
e x y s
x
K
e x y i
y
m
i
=

=

( )
( )
0
0
Que resuelto para x nos da
x
e s
K
i
K
s
m
i
=
+
|
\

|
.
| +
0
1
De donde
Por tanto, en la inhibicin competitiva,
1. El efecto cintico del inhibidor es el aumento aparente de la
K
m
, que aparece multiplicada por el factor (1 + i/K
i
)

2. La V
max
no aparece modificada; para concentraciones muy
altas del substrato, v = V
max
, igual que en ausencia de inhibidor

3. Cuanto ms pequeo sea el valor de K
i
mayor ser la potencia
del inhibidor competitivo.
Representacin directa
Inhibicin competitiva
s
0 20 40 60 80 100 120
v
0
20
40
60
80
100
120
1/s
-0.3 -0.2 -0.1 0.0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6
1/v
0.00
0.01
0.02
0.03
0.04
0.05
0.06
0.07
-1/K
m

-1/(K
m
(1 + i/K
i
))
1/V
max

Inhibicin competitiva - Representacin recproca doble
COO
-
CH
2
CH
2
COO
-
FAD FADH
2
COO
-
CH
CH
COO
-
Succinato
Fumarato
SDH
Succinato deshidrogenasa
COO
-
CH
2
COO
-
Malonato
COO
-
C O
CH
2
COO
-
Oxalacetato
Inhibidores
competitivos
COO
-
CH
2
CH
2
COO
-
Succinato
COO
-
C O
CH
2
COO
-
Oxalacetato
Inhibidores competitivos
como nalogos estructurales
del substrato
H
2
N S
O
O
NH
2
H
2
N C
O
O
-
4-aminobenceno
sulfonamida
4-aminobenzoato
N
N
N
N
H
2
N
N
C NH
O
C H
COO
-
CH
2
CH
2
CO OH
CH
3
n
c. Flico
Methotrexate
N
N
N
N
OH
H
2
N
N
C NH
O
C H
COO
-
CH
2
CH
2
CO OH
H
n
NH
HN
O
O
CH
3
NH
HN
O
O
Br
Timina
5-Bromouracilo
Anlogos de base
O
HOCH
2
OH
N
O
NH
2
OH
O
HOCH
2
OH
N
O
NH
2
OH
Citidina
Citosina
arabinsido
Anlogos de
nuclesido
Un paso ms all en el desarrollo de inhibidores potentes
es el concepto de Anlogo de Estado de Transicin (AET)
- El inhibidor no es estrictamente anlogo del substrato,
sino del Estado de Transicin de la reaccin.

- La afinidad de las enzimas por los AET es enorme, del
orden nM o pM, con lo que la fijacin es tan fuerte que
puede considerarse irreversible
O
2
N O
C
O
O
N
+
H
3
C
CH
3
CH
3
O
2
N O
P
O
N
+
H
3
C
CH
3
CH
3
-
O O
-
Susbtrato
O
2
N O
C
O
N
+
H
3
C
CH
3
CH
3
-
O O
-
Estado de transicin
O
2
N OH
+
O
N
+
H
3
C
CH
3
CH
3
C
O
HO
Productos
Anlogo de
estado de transicin
Substrato
Estado de
transicin
Anlogo de
estado de transicin
COO
-
H
2
C
NH
-
OOC
O
NH
2
O
-
P O O
-
O
-
P O O
-
O
-
CH
2
COO
-
H
2
C
NH
-
OOC
O
Aspartato
transcarbamilasa
Estado de
transicin
Anlogo de
estado de transicin:
N-fosfonoacetil L-aspartato
(PALA)
Angiotensingeno
Angiotensina I
DRVYIHPFHL
Angiotensina II
DRVYIHPF
HL
Renina
Enzima convertidora
de Angiotensina, ECA
Hipotensin,
hipovolemia,
ortostatismo
Aumento de la presin arterial
C O
HN
CH COO
-
R
C H R'
NH
C
-
O
C
HO
+
Zn
2+

+
Zn
2+

C O
N
CH COO
-
C H
3
C H
C
H
-
S
H
Anlogos de Estado de Transicin: Captopril
Estado de transicin
de la ECA
Captopril
Inhibicin Irreversible
- Los inhibidores irreversibles reaccionan con un grupo
qumico de la enzima, modificndola covalentemente

- Su accin no se describe por una constante de equilibrio K
i
,
sino por una constante de velocidad k
i
:
E + I E
- A diferencia de la inhibicin reversible, el efecto de los
inhibidores irreversibles depende del tiempo de actuacin
del inhibidor.

- Los inhibidores irreversibles son, por lo general, altamente
txicos.
Algunos tipos de inhibidores irreversibles
1. Reactivos de grupos -SH

2. Organofosfricos

3. Ligandos de metales

4. Metales pesados
Reactivos de grupos -SH, 1
(a) Agentes alquilantes
E
SH
E
S CH
2
COO
-
ICH
2
COO
-
IH
Yodoacetato
(b) Compuestos insaturados
N CH
2
CH
3
O
O
E
SH
E
S
N CH
2
CH
3
O
O
N-Etil maleimida (NEM)
Reactivos de grupos -SH, 2
(c) Formadores de mercptidos
HOHg COO
-
E
SH
E
S Hg COO
-
p-Hidroximercuribenzoato
(d) Oxidantes

Promueven la oxidacin de dos tioles a un disulfuro
Organofosfricos
CH CH
2
OH
Ser
P F O
CH
CH
H
3
C CH
3
CH
3
H
3
C
CH CH
2
O P O
CH
CH
H
3
C CH
3
CH
3
H
3
C
Ser
DFP:
diisopropil
fluorofosfato
- Actan sobre enzimas sernicas
- nicamente sobre la Ser activa
- Insecticidas: Parathion, Malathion
- Inhibidores de la Acetilcolinesterasa
- Neurogases
Ligandos de coordinacin de metales
Es el caso del ion cianuro, CN
-

Se fija con gran afinidad a la sexta posicin de coordinacin
del Fe hemnico, impidiendo toda modificacin posterior.

Por ello acta sobre sistemas de Fe hemnico con la sexta
posicin de coordinacin libre, como la citocromo oxidasa,
de lo que deriva su elevadsima toxicidad
Substratos suicidas
(Inhibidores activados enzimticamente)
- Se trata de molculas que se unen al centro activo de manera
especfica, igual que el substrato o los inhibidores competitivos

- Una vez unidos al centro activo, la enzima transforma la
molcula en una especie qumica muy reactiva que modifica
covalentemente a la enzima, inactivndola

- Tienen por tanto (a) la especificidad del inhibidor competitivo
y (b) la potencia de los inhibidores irreversibles
E + I EI EI* E + I*
Modo de accin de los inhibidores suicidas
1 2 3
1. El inhibidor se fija a la enzima igual que el substrato o un
inhibidor competitivo convencional

2. La accin cataltica de la enzima convierte al inhibidor I
en una especie altamente reactiva I*

3. I* modifica covalentemente a la enzima, inactivndola
de forma definitiva al igual que un inhibidor irreversible.
Ejemplos de inhibidores suicidas, 1
- Sistema de la |-lactamasa bacteriana
La utilizacin masiva de antibiticos |-lactmicos (penicilinas,
sus derivados semisintticos y cefalosporinas) ha conducido a
la aparicin de resistencias a los mismos.

Los microorganismos resistentes a estos antibiticos lo son por
producir una enzima, la |-lactamasa, que inactiva a los antibi-
ticos |-lactmicos.
R CO NH
S
N
O
CH
3
CH
3
COO
-
R CO NH
S
HN
CH
3
CH
3
COO
-
C O
O
-
|-Lactamasa
Penicilina (activa)
c.peniciloico (inactivo)
Muy a menudo los preparados de penicilinas o penicilinas
semisintticas se formulan aadiendo un inhibidor suicida
de la |-lactamasa, el cido clavulnico
O
N
O
COO
-
C
CH
2
OH
H
|-Lactamasa
O
HN
COO
-
C
CH
2
OH
H
C
O
O
-
O
HN
COO
-
C
CH
2
OH
H
C
O
O CH
2
CH
Ser
Esta molcula
reacciona con la
serina activa de la
|-lactamasa,
produciendo su
inactivacin
c.clavulnico
Ejemplos de inhibidores suicidas, 2
- Sistema de la monoamino oxidasa (MAO) cerebral
Los estados depresivos, en general, estn relacionados con un
descenso en la concentracin de neurotransmisores adrenrgicos
(dopamina, noradrenalina, etc.) en determinadas regiones del
cerebro.

Una de las enzimas encargadas de la degradacin de estos
neurotransmisores es la monoamino oxidasa (EC 1.4.3.4).

Por tanto, la inhibicin de la monoamino oxidasa se emplea como
teraputica de los estados depresivos. Se han desarrollado muchos
inhibidores suicidas de la MAO
HO
HO
CHOH CH
2
NH
2
O
2
+ H
2
O
NH
3
+ H
2
O
2
HO
HO
CHOH CHO
Noradrenalina
Dihidroxifenilglicol
Monoamino
oxidasa
La MAO es una flavoprotena:
tiene un grupo prosttico
flavnico (FAD) fundamental
para la catlisis. Los inhibidores
suicidas de la MAO inactivan
al cofactor FAD.
HC C CH N
+
CH
3
CH
3
N
N
NH
N
H
3
C
H
2
C
O
O S E
R
N
N
NH
NH
H
3
C
H
2
C
O
O S E
R
CH
CH CH N
+
H
3
C
H
3
C
Flavina
Flavina modificada
N,N dimetil
propargilamina
(pargilina)
Inhibicin suicida de la
MAO mediante Pargilina