PRUEBAS INMUNODIAGNOSTICAS

INMUNOLOGIA 2009 Dra. Virginia Bolaos de Corzo Departamento de Microbiologa FMVZ - USAC

PRUEBAS DE AGLUTINACION

Mtodo rpido y sencillo usado ampliamente para identificar: virus, bacterias, grupos sanguneos. Cuando se usan antigenos conocidos se detectan anticuerpos especficos. Los antigenos que se utilizan se encuentran en suspensin. La IgM es la mas eficiente aglutinando.

PRUEBAS DE AGLUTINACION

Los anticuerpos establecen uniones cruzadas con los antigenos, lo que se visualiza como grumos. Las partculas de antigeno poseen carga negativa. (Potencial Zeta). Los anticuerpos poseen carga positiva. Es necesario que exista una concentracin salina para favorecer la reaccin. Fenomeno de Prozona: cuando existe un exceso de anticuerpos, se inhibe la aglutinacin.

PRUEBAS DE AGLUTINACION

VENTAJAS Muy utilizadas. Sencillas. Rpidas. Cuali o cuantitativas Econmicas

DESVENTAJAS Muy sensibles. Reacciones heteroespecificas.

Prueba de aglutinacion

Pruebas de Precipitacin

Se realizan en medios lquidos y en medios semislidos. Debe existir equivalencia entre ambos reactivos: antigeno y anticuerpo. En medios lquidos se mezclan ambos componentes, dejando reposar y se formara un anillo en la interfase de los lquidos. Prueba de Ascoli para Antrax.

Pruebas de Precipitacin.

Los medios semislidos se usan para inmunodifusion o inmunoeletroforesis. Se basa en el hecho de que de que la mayora de las protenas se difunden a travs de un gel. Al contactarse antigenos y anticuerpos especficos se forma una banda de precipitacin en el punto en que ambos alcanzan equivalencia.

La prueba de Coggins (Anemia infecciosa equina) es un ejemplo de inmunodifusion doble. Enfermedades que se diagnostican por esta prueba: leucosis bovina, Influenza aviar, lengua azul, virus de artritis encefalitis caprina (cae).

PRUEBAS DE PRECIPITACION
VENTAJAS Existen varias pruebas. Se observan fcilmente. Muy tiles. No se requiere equipo costoso. Pueden ser cuali o cuantitativas DESVENTAJAS Poseen baja sensibilidad.

Prueba de Inmunodifusion

INMUNOELECTROFORESIS
Son pruebas que combinan la electroforesis con reacciones de antigeno-anticuerpo.
Inmunoelectroforesis en agar. 1. El antigeno se coloca en el medio. 2. Se separa por electroforesis. 3. Se agrega suero hiperinmune. 4. Al unirse antigeno y anticuerpo se forman lneas de precipitacin.

PRUEBAS DE HEMOAGLUTINACION

Algunos virus tienen la propiedad de aglutinar eritrocitos de mamferos o aves permitiendo identificarlos y cuantificarlos. Grupos virales: orto y paramixovirus, alfa y flavirus, coronavirus. Mycoplasma gallisepticum. La hemoaglutinacin ocurre cuando la hemoaglutinina acta de manera reciproca con un receptor especifico en la superficie del eritrocito.

P. DE HEMOAGLUTINACION

La glucoproteina sirve como el sitio de recepcin para la hemoaglutinina y como sustrato para la neuraminidasa viral. Las HA del virus se unen a los G.R. formando agrupaciones que se visualizan como aglutinacin.

Prueba de HA

Puede ser cuali o cuantitativa. La ultima dilucin que presenta aglutinacin se toma como el titulo, el cual se expresa en unidades aglutinantes = 1 DHA Es importante considerar: concentracin de sales, Ph, temperatura.

PRUEBA DE INHIBICION DE LA HEMAGLUTINACION HI

1. 2.

Los anticuerpos contra los virus hemoaglutinantes inhiben la hemaglutinacion al bloquear los lugares de unin. Esta prueba se usa para: Identificar el virus. Para medir concentraciones de Ab.

PRUEBA DE HI

1.
2. 3. 4.

Titulo: mas alta dilucin que Inhibe la Hemaglutinacion por el No. de DHA Para la interpretacin considerar: Mtodo y va de vacunacin. Tipo de vacuna. Edad y fecha de vacunacin. Enfermedades inmunosupresoras.

Prueba de HI

Anticuerpos fluorescentes

Estas tcnicas utilizan normalmente cultivos celulares (primarios o de lneas estables) infectados con el virus o la bacteria sobre la que se desea comprobar si hay o no anticuerpos en el suero problema. Tras la incubacin con el suero problema;). La unin se visualiza tras la adicin de un conjugado anti-inmunoglobulina marcado con isocianato o con peroxidasa y la posterior observacin al microscopio de fluorescencia o convencional respectivamente.

Reaccin de fijacin de complemento

Esta reaccin sigue siendo el mtodo de eleccin para el diagnostico indirecto de enfermedades infecciosas importantes en veterinaria: brucelosis, paratuberculosis. Posee alta especificidad y sensibilidad. La prueba se basa en que los complejos antigeno-anticuerpo, fijan el complemento, se impide que este se una a un sistema indicador

Que consiste en glbulos rojos de ovino, recubiertos de anticuerpos antihematies. El consumo in vitro del complemento en la primera etapa por la unin-antigeno anticuerpo, evitara que los glbulos rojos sean lisados (prueba positiva), sin embargo si se observa hemlisis revelar la *fijacin* del complemento a este segundo inmunocomplejo, lo que demuestra la ausencia de anticuerpos especficos al antigeno de la primera fase.

Seroneutralizacion

Este mtodo est considerado de referencia para cualquier estudio serolgico pues es el que ms se correlaciona entre la respuesta "in vitro" y la respuesta "in vivo". En esta prueba se puede valorar la capacidad que tienen los anticuerpos presentes en un suero problema para neutralizar la actividad biolgica de un antgeno.

Prueba de Neutralizacin

1.

2.

Son altamente sensibles y especificas. Se pueden realizar en 2 vas: La concentracin viral se mantiene constante y el suero diluido. El suero se mantiene constante y el antigeno diluido. Se podr determinar la capacidad neutralizante del suero o del antigeno.

Seroneutralizacion

La valoracin biolgica de la efectividad del proceso se puede realizar sobre cultivos celulares o animales de laboratorio.

Pruebas de Proteccin.
Son similares a las de neutralizacin solo que se realizan por completo in vivo. La capacidad de proteccion que posee un suero puede ser valorada mediante su inoculacion en diluciones seriadas en un grupo de animales de laboratorio, para luego desafiarlo con el antigeno.

El valor de proteccin de los sueros se expresa como Dosis Protectiva 50% (DP50%). El calculo se realiza mediante pruebas estadsticas como Reed y Muench.