GENTICA MOLECULAR

DEFINICION

La gentica molecular es la rama que estudia la estructura y la funcin de los genes a nivel molecular, as como tambin de los cidos nucleicos Una de las aplicaciones de la gentica molecular es la clonacin de Adn en las bacterias

TECNICAS UTILIZADAS EN GENETICA MOLECULAR

Existen tres tcnicas de biologa molecular utilizadas por la gentica molecular: amplificacin; separacin y deteccin de secuencias.
La reaccin en cadena de la polimerasa es especficamente utilizada para la amplificacin, un "instrumento indispensable para una gran variedad de aplicaciones".

En la tcnica de separacin y deteccin el ADN y el ARNm son aislados a partir de sus clulas. La expresin del gen en clulas u organismos es hecha en un local o tiempo que no es normal para ese gen especfico.

QUE ES UN GEN
Un gen es un trozo de ADN que lleva la informacin para que se fabrique una protena. Desde el punto de vista de la gentica, podemos decir que un gen es una porcin de cromosoma que lleva la informacin para que se manifieste un carcter.
ADN...................................Protena GEN...................................Carcter

1. EL ADN, LA MOLCULA DE LA HERENCIA

Ncleo de la clula con su dotacin de cromosomas
El ADN (cido desoxirribonucleico) es la molcula portadora de la informacin gentica

ADN

Detalle de un cromosoma

Segmento de ADN que constituye un gen

LOS CIDOS NUCLEICOS

Son grandes molculas formadas por la repeticin de una molcula unida (El nucletido). Pueden alcanzar tamaos gigantes, siendo las molculas ms grandes que se conocen. Estn constituidas por millones de nucletidos. Son las molculas que tienen la informacin gentica de los organismos y son las responsables de su transmisin hereditaria.

Fosfatos van unidos al azcar en el C-5 y el C-3

Hebras antiparalelas

Punta 3 libre Punta 5 libre

ACIDOS NUCLEICOS

La molcula de ADN es una doble hlice antiparalela (Watson y Crick 1953)

ADN
cido

desoxirribonucleico (ADN), esta compuesta por: 1. 2 cadenas de nucletidos, formando una doble hlice. Azcar (desoxirribosa). Fosfato. 1 base nitrogenada.

 1. 2. 3. 4.

Existen 4 tipos de bases nitrogenadas: Adenina, Guanina, Citosina, Timina Se unen entre s mediante enlaces de hidrgeno. Adenina Timina. Citosina Guanina.

1.
2.

Representacin esquemtica de cuatro eslabones de una cadena de nucletidos. Cada nucletido consta de un grupo fosfato (P),un azcar (D) y alguna de las cuatro bases nitrogenadas, adenina (A), citosina (C), guanina (G) y timina (T).

REPLICACIN

EXPRESIN DEL MATERIAL GENETICO.

La

replicacin del ADN tiene lugar en el ncleo, antes de la divisin celular. El mecanismo consiste en: Separacin de las dos cadenas de polinucletidos, cada una acta como plantilla. La cadena original se abre, cada uno de los nucletidos atrae a otro nucletido complementario previamente formado por la clula.

1.

2.

3.

Los nucletidos se unen por enlaces de hidrgeno. Los nucletidos complementarios van encajando en su lugar, a travs una enzima llamada ADN polimerasa.
Este proceso contina hasta que se ha formado una nueva cadena de polinucletidos .

4.

5.

PROTENAS PRINCIPALES REPLICACIN

Topoisomerasas: rompen una hebra y la tensin del enrrollamiento de la hlice se relaja Helicasas: completan el desenrrollamiento ADN polimerasas: complejos agregados de diferentes protenas. Primasas: sintetizan los iniciadores de ARN que se necesitan para iniciar la replicacin Ligasas: sellan las lagunas dejadas por las ribonucleasas cuando remueven los primers, catalizan la unin fosfodiester entre nucletidos adyacentes. Protenas de unin a la hebra sencilla del ADN: estabilizan la horquilla de replicacin.

EL ADN es la molcula que permite perpetuar la vida: REPLICACIN DEL ADN

Hebra molde

Hebra lder

Hebra retardada

TRANSCRIPCIN

URACILO sustituye a la TIMINA

La secuencia correspondiente a una unidad de transcripcin en el ADN se transcribe en una hebra complementaria de ARN, llamada transcrito primario, a partir del cual, por modificaciones posttranscripcionales , se origina el ARN mensajero

TRADUCCIN

TRANSMISIN DE LA INFORMACIN

La transmisin se lleva a cabo principalmente gracias a la existencia de los cidos ribonuclicos o ARNs:
ARN

mensajero (lineal de hebra simple) ARN de transferencia ARN ribosomal Y a las ARNs polimerasas

ARN de transferencia activado: cargado con el aminocido correspondiente

Elongacin II: Se forma el enlace peptdico entre el grupo carboxilo de la metionina (Met) y
el grupo amino del segundo aminocido, la glutamina (Gln).

P
5

ARNm

AAAAAAAAAAA 3

AU G CAA U G C U UA C GA UAG UAC GUU

CODIGO GENTICO Y PROTEINAS.

El ADN incorpora las instrucciones de produccin de protenas. Una protena es un compuesto formado por aminocidos, que determinan su estructura y funcin. La secuencia de aminocidos est determinada por la secuencia de bases de los nucletidos . Cada secuencia de tres bases, llamada triplete, constituye una palabra del cdigo gentico o codn, que especifica un aminocido.


1. 2.

La sntesis protica comienza:

Separacin de la molcula de ADN Inicia la transcripcin, una parte de la hebra acta como plantilla para formar ARNm. ARNm sale del ncleo celular y se acopla a los ribosomas. Los aminocidos son transportados hasta los ribosomas por ARNt. Se inicia la traduccin que consiste en el enlace de los aminocidos en una secuencia determinada por el ARNm para formar una molcula de protena.

3.

4.
5.

MUTACIONES

Variaciones en la secuencia de bases del ADN que no causan alteraciones funcionales patolgicas, son alelos o polimorfismos del gen existentes en la poblacin (>1%)

Alteraciones en la secuencia de bases del ADN que alteran la funcin normal (produciendo patologa) del producto gnico son mutaciones

MUTACIONES
Germinales o constitucionales: El individuo las adquiere por herencia de sus padres, puede ocurrir de novo en una clula germinal de alguno de los padres. Todas las clulas del cuerpo llevan la misma mutacin Ejemplo: enfermedades hereditarias

Somticas: Se adquiere en el transcurso de la vida Es portada nicamente por la clula afectada y sus clulas hijas. El individuo es un mosaico. Ejemplo: cncer

CLASES DE MUTACIONES

Sustitucin de bases:
Sustituciones sinnimas (silenciosa): otro codn mismo aa). (20-25%). Mutaciones sin sentido (cambio a codn STOP). (24%). Mutaciones de sentido equivocado: sustitucin del aa en la protena. (70-75% ). Mutaciones en el sitio de corte y empalme del ARN.

Otros tipos de mutaciones:

a- Mutaciones de cambio en el marco de lectura - deleciones - duplicaciones o insersiones b- Mutaciones dinmicas

La patologa molecular intenta explicar porque un cambio gentico dado podra resultar en un fenotipo clnico particular.

CLONACIN DE ADN EN BACTERIAS

El trmino clonacin para este tipo de amplificacin envuelve hacer mltiples copias idnticas de una secuencia de ADN. La secuencia de ADN objetivo es entonces inserida en un vector de clonacin. Una vez que este vector origina plsmido, a partir de un virus autorreplicante o una clula superior del organismo, cuando el ADN de tamao apropiado es inserido el "alvo y fragmentos de ADN del vector son ligados" y crean una molcula de ADN recombinante. Las molculas de ADN recombinantes son despus colocadas en una cepa de bacterias (Escherichia coli generalmente), que producen varias copias idnticas por transformacin. A transformacin es el mecanismo de absorcin de ADN que poseen las bactrias. Apenas una molcula de ADN recombinante puede ser clonada dentro de una nica clula bacteriana, de modo que cada clon corresponde apenas a una insercin de ADN.