Transferencia de genes en animales

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Biologa Molecular
Ingeniera Gentica
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Sntesis de Sondas de ADN

Localizacin desrdenes genticos

Tecnologa del ADN GENMICA Es el estudio del genoma y su accin.

El genoma es la suma total del material gentico presente en un organismo particular e incluye el ADN presente en los cromosomas y en los organelos subcelulares (ej., mitocondrias) e incluye el genoma de ARN de algunos virus.
El anuncio el 26 de junio de 2000, del borrador del genoma humano en un 90%, marc un hito histrico para la humanidad.

El genoma de un organismo es el juego completo de ADN. La planificacin del Proyecto Genoma Humano se inici en 1986, previsto para el 2007. En Junio de 2000 se present el 90% del borrador con la secuenciacin de unos 30,000 genes y 3 mil millones de pares de bases (pb). Los genes son secuencias especficas de bases que codifican instrucciones para hacer protenas. Los genes son un 2% del genoma humano.
Entre una persona y otra el ADN solo difiere en 0.2% 60% De 289 genes humanos implicados en enfermedades, hay 177 cercanamente similares a los genes de Drosophila.

GENOMAS

Tecnologa del ADN

IDENTIDAD GENTICA
70%

20%

95% idntico

Humanos 30,000 genes

Chimpanc 30,000 genes

Ratn 30,000 genes

A. thaliana 25,000 genes

C. elegans 19,000 genes

D. melanogaster 13,000 genes

Tecnologa del ADN PROTEMICA

La Protemica es la caracterizacin sistemtica a gran escala de las protenas presentes en una clula, tejido u organismo. Es una disciplina en su infancia limitada por la tecnologa disponible para quienes la practican. Este es un diferente paradigma del reduccionismo convencional de la investigacin cientfica que tpicamente se enfoca en un simple gen o una protena; en tanto, que la investigacin del Proteoma (conjunto de todas las protenas que intervienen en los procesos biolgicos de una especie) aborda problemas tales como el nivel de protenas o actividades que cambian entre dos condiciones experimentales (Spelcher, 2002. The Scientist 16(8): 12, Apr. 15).

INGENIERA GENTICA O ADNr

La Ingeniera Gentica o tecnologa del ADNr se inici en la dcada de los 70s. Se refiere a un grupo de tecnologas usadas para cambiar la composicin gentica de las clulas y mover genes a travs de las fronteras de las especies para producir nuevos organismos. Se pueden aislar genes, modificarlos, introducirlos a nuevos hospederos, y clonarlos para obtener una ventaja novedosa sobre el organismo natural.

Ingeniera

Gentica

NUEVOS ANTIBITICOS

PAPA con la vacuna que previene la insulina dependencia de la diabetes mellitus 100 veces ms poderosa que la actual vacuna. PAPA con la sub-unidad B antignica de la enterotoxina del Vibrio cholerae causante del clera). FRIJOL de SOYA con anticuerpos que protegen contra el virus 2 de Herpes simplex (HSV). TABACO con anticuerpos que previenen la caries dental producida por Streptococcus

mutans.

La manifestacin de la caries dental est mediada por mecanismos complejos que son iniciados por factores, entre los que se incluyen genticos, conductuales, ambientales y microbianos. En el caso de los factores microbianos, la presencia de bacterias es fundamental para el inicio y progresin de las lesiones de caries, sin bacterias no hay lesin. De hecho se trata de una enfermedad infecciosa polimicrobiana donde cada especie bacteriana individual puede contribuir colectivamente a la cariogenicidad total de la biocomunidad de la placa dental (biopelcula dental) asociada a caries(5,6). Por ello, es importante entender el rol que juegan especies bacterianas especficas en la progresin de la caries dental.

El paso ms importante en la formacin de la caries, es la adhesin del SM a la superficie dental, mediada por la interaccin entre la protena Ag I/II y algunas de la saliva adsorbidas por el esmalte. El SM produce glucanos solubles e insolubles a partir de los azcares de la dieta, utilizando la enzima glucosiltransferasa (GTF), fomando acumulaciones bacterianas; de este modo la unin se hace ms fuerte, las bacterias degradan la sacarosa a cidos que desmineralizan el diente, formando las cavidades que se encuentran en la caries.

GTF
Considerada un factor de virulencia en la caries, pues atravez de ella se sintetizan glucanos que facilitan la adhesin sacarosa dependiente y la acumulacin clula a clula de las bacterias 15 - 17. Se sabe que el SM produce hasta tres tipos diferentes de GTF (GTF-B, C y D) 18, cada una con propiedades variadas, de manera que, medidas teraputicas en la superficie dental podran alterar la adherencia, y por consiguiente el poder cariognico del SM 10, 11. Los anticuerpos anti-GTF han demostrado tener el potencial para lograr una respuesta de IgAs e interferir con la adherencia de manera efectiva 19. Algunos estudios demuestran que los SM manipulados genticamente para evitar la formacin de GTF B, pierden su capacidad de adhesin y agregacin en la placa 20. Sin embargo, Barrientos luego de realizar un estudio de mediciones de GTF B concluye que posiblemente la actividad de esta enzima en individuos sanos podra no tener relevancia como factor de virulencia para el desarrollo de caries 20.

Protenas asociadas a la pared Se han obtenido principalmente del SM serotipo c los Ag I, II, I/II (PAC, B, IF, P1, MSL-1) y III (A). Su funcin no es del todo conocida, se presume que son los responsables de la hidrofobicidad de las clulas de SM y en consecuencia importantes para unirse al diente 11. El AgI/II es el ms abundante, se piensa que es indispensable para la adhesin y agregacin sobre el diente, toma como sustrato las protenas de la pelcula adquirida 13 . Se ha demostrado que existe una alta correlacin entre la presencia de IgA y este antgeno, es decir, a mayor cantidad de dientes cariados existe un mayor ttulo de anticuerpos de IgA salival (IgAs) contra Ag I/II de SM 22. Se cree que el Ag III no confiere proteccin contra la caries 12. Estas protenas tienen el inconveniente de ocasionar una reaccin autoinmune con el tejido cardaco 9, 14, 23-25. Para su uso, debe demostrarse que est reaccin no existe obteniendo fragmentos nicamente protectores, factible por manipulacin gentica y fabricacin de pptidos sintticos, llamados anticuerpos monoclonales 9, 26.

Antgenos hidratos de carbono

Importante para la diferenciacin en serotipos de las cepas del SM, cuando se emplean bacterias totales para inmunizacin, en formas purificadas son escasamente antignicos. Algunos estudios en ratas demuestran que confieren algn grado de proteccin 11.

Otros antgenos

Varias protenas antignicas han sido probadas en animales 11. Entre las que tenemos protenas ligadas a dextranos, polisacridos extracelulares purificados, cido lipoteicoico, dextranasa y ribosomas 11, 14. An faltan estudios para demostrar su poder protector 27.

Sistema inmunolgico bucal

Los tejidos duros y blandos de la cavidad oral se encuentran bajo la proteccin de factores inmunes especficos y no especficos 10, 11, 14. Limitan la colonizacin microbiana de la mucosa oral y de las superficies dentales, previniendo la penetracin de sustancias 10, 11.
La cavidad bucal se comporta como un ecosistema con diferentes hbitat que albergan a microorganismos de diversas caractersticas 28. Inmunolgicamente, este ecosistema se divide en dos ambientes, uno baado por la saliva, llamado dominio salival (mucosas, dientes y superficies visibles); y el otro por el fluido gingival, denominado dominio gingival 14, 28. Existe evidencia concreta que el sistema inmunitario humano responde contra los microorganismos responsables de la caries y/o sus productos metablicos, esto responde a que la caries es una enfermedad crnica infectocontagiosa 14.

Elementos inespecficos (Inmunidad natural) Carecen totalmente de memoria inmunolgica, no estn sujetos a estimulacin especfica, pero se pueden interrelacionar con Ig salivales 11. Epitelio mucoso Impide el paso de microorganismos, las clulas con microorganismos adheridos son lavadas por el flujo salival 4, 28. Saliva Su viscosidad dificulta la adherencia de los microorganismos. El flujo salival ejerce una funcin de limpieza, adems, las protenas antibacterianas constituyen una defensa contra la infeccin en boca 4, 5, 28. Su capacidad amortiguadora es importante en la remineralizacin, ayuda a neutralizar los cidos 5. Clulas Tras la barrera mucosa, tenemos PMNn, macrfagos y clulas NK 5, 28. Masticacin, deglucin y secrecin Por razones bastante obvias, arrastran los microorganismos al tracto digestivo 5. Protenas Tenemos el complemento en el fluido crevicular y los anticuerpos naturales de mayor importancia en la enfermedad periodontal 28. Tienen una funcin redundante, es decir, si falta una siempre van a haber otra 28. A.- Mucinas Otorgan viscosidad a la saliva; forman complejos con las bacterias bucales bloqueando sus adhesinas evitando que se unan al epitelio mucoso. Compiten por los receptores del epitelio formando complejos con IgAs y otras protenas salivales, potenciando su accin antibacteriana 28. B.-Lactoferrina Glicoprotena con capacidad para asociarse a los iones frricos, esenciales para la sobrevivencia y el crecimiento bacteriano 30. Capaz de unirse directamente a bacterias G(+) y G(-), formando complejos con IgAs 5, 28, 29. C.-Lisozima o muranidasa Rompe los enlaces N-acetilglucosamina o N-acetilmurmico de la pared celular, degradando la pared de bacterias G(+), forma complejos con IgA y con otras protenas como la peroxidasa 5, 28, 29. D.- Histatinas y protenas ricas en prolina Modifican la adherencia, inhiben el crecimiento y la viabilidad bacteriana 28. E.- Lactoperoxidasa Protege al husped produciendo compuestos que regulan el metabolismo y crecimiento bacteriano, previene la acumulacin txica de peroxido de hidrgeno e inactiva sustancias con actividad mutagnica y carcingena 29. F.- Glucoprotenas salivales Intervienen en los procesos de adhesin, agregacin y coagregacin bacteriana, a travs de mecanismos indirectos pueden bloquear receptores para la adhesin de algunas bacterias 5. G.- Otros Como el sistema de mieloperoxidasa y de protenas con funcin aglutinante y detergente, provocan la agregacin de bacterias y bloquean la adhesin a la pelcula adherida 11, 29.

Inmunidad especfica ante caries dental: IgA Representa el 15-20% del total de las Inmunoglobulinas el 80% de ellas circulan como un monmero, en gran cantidad en secreciones del tracto respiratorio, genitourinario, saliva, lgrimas, calostro y leche materna 4, 5. En estas secreciones adopta una estructura dimrica, con una cadena J, cuenta con un fragmento de receptor o una pieza secretoria que le permite unirse a clulas epiteliales para ser llevada a la luz, este receptor le brinda mayor resistencia al ataque proteoltico, gracias a esto las respuestas inmunes humorales en la mucosa son primordialmente de IgA secretoria (IgAs) 4, 11. Esta inmunoglobulina tiene una pobre capacidad opsonizante 4, 11. Existen dos subclases de IgA: IgA1 e IgA2, con diferente distribucin en los tejidos 4. En los fluidos internos la IgA1 representa el 90% de las IgA 4. En las secreciones mucosas, la IgA1 representa un 40-60% y la IgA2 hasta el 60%, debido a las proteasas producidas por algunos microorganismos que son capaces de hidrolizar la IgA1 4. IgG: Inmunoglobulina de mayor concentracin en circulacin sangunea (70% del total de los anticuerpos) 4, 5, 30. Existen 4 subclases, con localizacin intra y extravascular, su presencia es importante en el fluido crevicular 4, 5. Se ha asociado la presencia de SM por primera vez en la cavidad con la erupcin del primer diente temporal aproximadamente a los 6 meses de edad. Otra alternativa involucra a los linfocitos B asociados al tejido linfoide intestinal (GALT), los antigenos que llegan al tubo digestivo despus de deglutir saliva se ponen en contacto con el folculo linftico, activando a algunos linfoblastos que pasan a la circulacin general por el conducto torcico, llegando a las glndulas salivales y mamarias transformadas en clulas plasmticas productoras de IgAs 4, 14. Se han encontrado diferentes tipos de respuesta inmune en humanos, encontrandose anticuerpos salivales, en la leche materna, suero y tambin respuesta inmune de tipo celular 14.

Funciones Antibacterianas de IgA a.- Reduce la hidrofobicidada del SM evitando su adherencia a la pelcula salival 10, 14, 17, 28. b.- Se une a colonizadores tempranos, por bloqueo de la interaccin adhesina-receptor, ante el Ag I/II, bloquea la unin que les permite unirse a los colonizadores tempranos 6, 18, 28, 29. c.- Interfiere en la acumulacin de placa dependiente de sacarosa inhibiendo la produccin de glucanos, mediante el bloqueo a la enzima GTF y la adherencia 18, 28. d.- Inhibe la produccin de cidos y otras actividades metablicas, como la adquisicin de Fierro 18, 28.

Funciones antibacterianas de IgG

a.- Bloquea los determinantes de adherencia 10, 17. b.- Aglutina bacterias 10. c.-Inhibe enzimas bacterianas 10. d.- Bacteriolisis 10. e.- Quimiotaxica y opsoniza bacterias 5, 10, 17. f- Induce la inflamacin de los tejidos gingivales, con el incremento de la permeabilidad 10, 30, 4, 5.

El odontlogo del futuro no va a ser un abre huecos, sino que har que las caries sean revertibles y que incluso los dientes se regeneren. Con las clulas madre podremos formar nuevas clulas y con ADN recombinante artificial se volvern a regenerar los tejidos, manifest. Los consultorios de los odontlogos sern laboratorios de biologa molecular, porque vamos a dejar los dientes y las encas igual o mejor de cmo estaban antes, acot.

Los estudios sealan que hay cinco tipos de bacterias que pueden causar estas enfermedades (BacteroideForsitus, A. Actinomicetecomitans, PorfiromonaGingivalis, Treponema Dentcola y Prevotella Intermedia), cuyo cultivo en el laboratorio es muy difcil porque tarda muchos das en hacerse y se contaminan con facilidad, por lo que surgi la necesidad de buscar nuevas tcnicas. consultorio identifica el ADN de la bacteria para luego definir que tipo de antibitico ataca al tipo particular de patgenos y los niveles de defensa de la persona. Tambin se identifica el cdigo gentico del paciente para ver su perfil y carga bacteriana, porque no hay dos periodontitis bacterianas iguales.