MITOSIS

Dr. Misael Guevara P.

LA DIVISIN CELULAR
Una de las funciones del
cromosoma como
material hereditario
organizado es la de
conservar la
informacin gentica
almacenada.
Fenmeno citolgico por el que una clula eucaritica
origina dos clulas idnticas en informacin gentica.
EXPERIENCIA DE Taylor y col, en meristemos de Vicia
faba, usando timidina tritiada se confirm la replicacin
semi conservativa, de Watson y Crick por la presencia de
cromatidios marcados en sucesivas replicaciones.
CROMATIDO

TELOFASICO
METAFASE
INTERFASE
PERIODO S
CON
TIMIDINA H
3
ANAFASE
TELOFASE
INTERFASE
PERIODO S CON
TIMIDINA
NORMAL
METAFASE
CARIOCINESIS CITOCINESIS
El siguiente esquema pone
de manifiesto que si se
supone que el cromatidio es
una doble hlice de ADN
que se replica de forma
semiconservativa, se
obtienen los resultados
observador por Taylor y
colaboradores, es decir,
todos los cromosomas de la
clula estn marcados en
sus dos cromatidios en la 1
Metafase y todos los
cromosomas de la clula
estn marcados en un solo
cromatidio en la 2
Metafase.
Posteriormente la experiencia fue repetida en:
Bellevalia (Taylor, 1958a) Crepis (Taylor, 1958b).
Replicacin bidireccional semi conservativa y semi
discontinua del DNA en un replicn del cromosoma
eucaritico.
En la replicacin del ADN del cromosoma eucaritico
intervienen cuatro ADN polimerasas: ADN pol,
ADNpol, ADN pol y ADN pol.

ENZIMA


FUNCIN

ADN Pol



Sntesis Hlice retardada. Sntesis del cebador: 10 bases de ADN y 25
de ARN.

ADN Pol



Sntesis de la Hlice conductora.

ADN Pol



Polimerizacin de las Piezas de Okazaki.

ADN Pol



Unin de los fragmentos de Okazaki ( de aproximadamente 250 pb).

ADN Pol



Sntesis ADN mitocondrial.

INTERCAMBIO DE CROMATIDAS
HERMANAS
El intercambio de cromtidas hermanas (SCE, sister
chromatid exchange), Barbara Mc Clintock, Taylor y
col en Vicia faba y en Bellavia.
Esquema de los resultados obtenidos por Taylor y col (1957)
Periodo S
Con TH
18
Especie con 2n = 4

Periodo S
Con T normal
Telofase 1a Metafase despus
de la incorporacin
del istopo
1a Anafase
mittica
1a Telofase
2a Metafase despus
de la incorporacin
del istopo Cromatidio
marcado con TH
18

Pintado cromosmico
Mas adelante se introdujeron nuevas
tcnicas que permitan pintar los
cromatidios hermanos de un cromosoma y
por lo tanto detectar el fenmeno de los
SCEs.
Anlogos de base 5-bromodesoxiuridina.
Tincin con flurocromo Hoechst.
Este tipo de tincin origina los que se denomina
cromosomas en arlequn, y es especialmente
adecuado para distinguir intercambios entre
cromtidas hermanas.
Interfase
Profase
temprana
Profase tarda
Metafase
Anafase
Telofase
PROFASE
Los cromosomas comienzan a
hacerse visibles (dos cromatidios).
Hiperfosforilacin de la histona H
1
relacionada con la condensacin
cromosmica.
Fosforilacin atribuida a la
protena quinasa p
34
.
Cohesin de los cromatidios
hermanos.
Movimientos de los cromosomas
hacia la placa ecuatorial.

Metafase
Los cromosomas
estn unidos al huso
mittico por los
centrmeros y se
alinean en el plano
ecuatorial de la clula.
ANAFASE
.

El sistema mittico en
una clula eucaritica
superior , contiene:
cromosomas,
cinetocoro, los centros
de traccin y los
microtubulos del huso
(tubulina y ).
Otras molculas
identificadas, actina,
miosina, dineina,
calmodulina, creatin-
fosfoquinasa.
CINETOCORO
En la mitosis los microtublos ensamblan el aparato
mittico, estructura esencial para la distribucin del
material gentico.
Duplicacin de los centrmeros antes de la mitosis
TIPOS DE FIBRAS
CROMOSMICAS
Centromrica, del
centrmero al centro de atraccin
Neocentromricas de
otra regin del cromosoma al centro
de atraccin
Penetrantes atraviezan al
cromosoma
CONTINUAS
Interzonales, entre los grupos
anafsicos.
Del fragmoplasto, o del
cuerpo medio.
De la vaina, rodean al cromosoma
TELOFASE
En clulas animales
comienza a aparecer una
constriccin a lo largo del
plano ecuatorial.

Este proceso se llama
citocinesis. Eventos que
siguen contrarios a los de la
profase.


CITOCINESIS
El citoplasma de la clula madre queda distribuido entre
las dos clulas hijas.
CRONOLOGIA DEL CICLO
CELULAR
Clculo del ndice mittico.- Proporcin de clulas en
cualquier fase de la mitosis en relacin a la poblacin
celular analizada, el valor del ndice mittico, es un a
medida de la duracin relativa de la mitosis frente a la
interfase.
Mtodo de sincronizacin de los cultivos celulares.-
Seleccin de la sincrona
Por la induccin de la sincrona
CONTROL DEL CICLO CELULAR
En regiones concretas del ciclo, la clula comprueba que
se cumplen las condiciones para pasar a la siguiente etapa,
de tal modo que, si no se cumplen el ciclo se detiene.
Existen cuatro transiciones principales:
Paso de G
0
a G
1
o iniciacin de la proliferacin.
Paso de G
1
a S o iniciacin de la replicacin.
Paso de G
2
a M o iniciacin de la mitosis.
Paso de metafase a anafase.
Factores reguladores del ciclo
Las ciclinas y las quinasas dependientes de ciclinas (cdk)
son el producto de proto-oncogenes y trabajan en
asociacin en la regulacin positiva del ciclo. Las cdks
actan fosforilando serinas y treoninas de protenas diana
para desencadenar procesos celulares. A ellas se unen las
ciclinas para regular el proceso con intervencin de otros
factores activadores.
Protena p
34,
codificada por un gen cdc2 (factor promotor
de la maduracin, o promotor de la mitosis), cuando la
activiadad se inicia:
1. La protena p
34
(quinasa) induce la condensacin de
cromosomas,

fragmentacin de membrana, fosforilacin
de protenas del citoesqueleto y las centrosomales.
2. Las ciclinas.- activan la quinasa, y se degradan cuando
la clula sale de la fase M.
3. Residuos fosfotirosina y fosfotreonina.- como factores
de activacin de la P
34
.
4. Protenas quinasas.-
5. Protena p
13
.-Inhibidor o activador de la quinasa P
34
.
Mitosis
(fase M)
G1
(pre- start
G
Start
(compromiso)
G1
post.start
S
G
2
MPF
M
P
MPF
MPF
MPF
MPF
MPF
MPF
M
degradacin
p13
G1
G1
S-K
p
G1
M
M
p
p
p
MPF
S-K
MPF
Formas de
P34
G1
M
Ciclinas
ORGANIZACIN
SUPRACROMOSMICA
Existe una relacin entre las funciones gnicas y la
localizacin de los loci en los cromosomas?.
En fagos la organizacin gentica del ADN, es un buen
ejemplo del binomio estructura funcin.
El fago T7 de Escherichia coli, tiene un cromosoma
constituido por una molcula lineal de ADN bicatenario
que puede dividirse en tres regiones consecutivas que
actan secuencialmente durante el ciclo infectivo, de tal
manera que se manifiestan tres clases de genes
(tempranos, intermedios y tardos).
CROMOSOMAS HOMOLOGOS

Asociacin meitica.-
Asociacin somtica.-
Se presentan como
evidencia de los
cromosomas homlogos en las clulas somticas como el
fenmeno de sobrecruzamiento somtico descrito en
Drosophila, esto se explicara por la cercana de los
homlogos en la fase G2.
CROMOSOMAS
HOMEOLOGOS
Cromosomas equivalentes por su origen evolutivo
comn, se pone de manifiesto por la proximidad en su
disposicin espacial en el ncleo de la clula.
Se pone de manifiesto en:
Asociacin secundaria de bivalentes.
Alosindesis.
ASOCIACIN SECUNDARIA DE
BIVALENTES
Darlington (1928), la describe como la disposicin
por parejas o por grupos en lugar del azar en la
metafase I de la meiosis de algunas especies de plantas
poliploides, estableciendo una cierta similitud
citolgica y gentica de los bivalentes asociados.
El trigo comn Triticum aestivum (2n=42) es una
especie alohexaploide , de constitucin geonmica
AABBDD, donde los genomas A,B y D tiene 7
cromosomas y derivan de un genomio ancestral G de 7
grupos de 3 cromosomas pertenecientes a cada uno de
los genomios.
ASOCIACIN SOMATICA
La asociacin somtica de cromosomas homologos ha
sido demostrada por Feldman y col (1972) en placas
metafsicas dispersas utilizando el mtodo de las
distancias corregidas.
La equivalencia funcional de los cromosomas
homologos se manifiesta a nivel citolgico en su
proximidad espacial en el ncleo de las clulas tanto
meiticas como somtica.
CROMOSOMAS GENETICAMENTE
RELACIONADOS
Asociacin meitica.- En estudios realizados en
Hamster chino y otros materiales se ha podido encontrar
un ordenamiento al azar de los cromosomas no
relacionados, sin embargo en los poliploides hay un
ordenamiento de los bivalentes en las placas metafsicas
por genomios.
Asociacin somtica.-
Placas metafsicas dispersas.- Al parecer la
distribucin de la distancia entre pares de
cromosomas no homlogos seala que no es al azar.
Asociacin extremo .- Observada en plantas, estas
mantienen un ordenamiento dentro del ncleo, se
podra plantear la hiptesis de que son la expresin
citolgica de la estructura supra cromosmica (Du
Praw).
Intercambios cromosmicos.- Han reforzado la idea
de el ordenamiento espacial de los cromosomas no
relacionados en el ncleo, esto por el tipo de
translocaciones que se generan experimentalmente
entre estos.
Compartimentalizacin genmica.- La disposicin de
los genomios paterno materno ha sido descrita en las
primeras divisiones embrionarias en animales.
En plantas alopoliploides y en hbridos
interespecificos se ha observado que los genomios
ocupan espacios definidos en la arquitectura nuclear.
EVOLUCION DEL SISTEMA
MITOTICO.
Existen dos teoras acerca de esto:
La teora de la filiacin directa (Cavalier- Smith (1975).-
Los organismo provienen monofileticamente de
organismos procarioticos.
La teora del endosimbionte (Margulis) 1970-1981,
propone la simbiosis de entre distintos tipos celulares de
procariotas, lo que podra explicar la evolucin de la clula
eucariotica.
Pickett- Heaps (1975) resume la evolucin as:
1. Inicialmente el genoma (cromosomas) unido a la
membrana de la clula primitiva.
2. El cromosoma fue envuelto por una membrana.
3. Aparecen microtbulos relacionados al mecanismo de
separacin.
4. Aparece el ncleo .
5. Los cromosomas se sueltan de la membrana llevando
consigo los organizadores del microtbulo, que serian
el origen de los cinetocoros.
6. Posteriores modificaciones del ncleo eucaritico.
VARIACIONES DEL CICLO
CELULAR
Divisin celular: Cariocinesis o mitosis
y la citocinesis.
Modificaciones: Mecanismos naturales
(relacionados con fenmenos
de citodiferenciacin inducidos
artificialmente.
POLIPLOIDIA
4N
VARIACIONES EN LA REPLICACIN Y
REPARTO DEL MATERIAL
HEREDITARIO.
Situacin normal: Una
clula en el periodo G
1
entra
al periodo S y replica su
material gentico y es
obligado a entrar en divisin
celular.
Al terminar la mitosis y antes
de entrar en otro ciclo de
divisin pasar por un periodo
S de replicacin.
Cortocircuitos: Una clula que ha pasado S vuelve a entrar
en otro periodo de replicacin sin pasar por la fase M o que
la clula que termina una mitosis entra en otra mitosis.
ENDOREPLICACIN
Al termino de (S) los
cromosomas no entran en
mitosis si no que vuelven a
pasar a otro periodo (S);
cada cromosoma tendr
como consecuencia cuatro
comtidas (Diplo-duplo
cromosomas), cudruplo
cromosomas si vuelve a
repetirse la anomala.
Un caso extremo de endoduplicacin es el de la Politena
( cromosomas gigantes) .
Duplocromosomas humanos. Microscopia electrnica
con tcnica de montaje total. La estabilidad se logra
mediante interconexiones de bucle de cromatina entre
los cromatidios internos de los cromosomas hermanos
HAPLOCROMOSOMAS
Fenmeno contrario a la endoreduplicacin, se produce
al termino de la telofase mittica , los cromosomas en
estado de cromatidio, vuelven a entrar en otra fase M sin
pasar previamente por el periodo S.
Los cromosomas en metafase aparecen con un solo
cromatidio y reciben el nombre de Haplocromosomas,
descritos por Ostergreen y col. en clulas de endospermo
de Haemanthus katharine y en Tradeschantia paludosa
El fenmeno se manifiesta en la mitosis post meioticaen
las microsporas juveniles del centeno apoplasmtico
(plantas cuyas clulas tienen el citoplasma de trigo,
mientras que el ncleo es de centeno).
Es posible que la formacin de los haplocromosomas
en el material vegetal descrito responde a un
mecanismo gentico similar al que controla el gen
rum de la levadura de fisin Schizosacharomyces
pombae, ya que su ausencia de expresin anticipa la
entrada de la clula en mitosis sin pasar por el periodo
S.
C-METAFASE EN CLULAS DE MERISTEMO RADICULAR DE CEBOLLA , Allium cepa
(2n= 16). Se observa claramente el engrosamiento y acortamiento de los cromatidios y las
configuraciones tipicas en X e Y.
ENDOMITOSIS
En la clula eucariotica la carioteca
desaparece al finalizar la profase, diferente a los
organismos eucarioticos primitivos (Protozoos,
flagelados y algas inferiores,etc).
Como en la endomitosis las cromtidas hermanas de
los 2n cromosomas se separa pero no pueden emigrar a
los polos de la clula ( no hay tampoco una verdadera
endotelofase), quedando entonces dentro del nucleo 4n
cromatidios sueltos que constituyen otros tantos
cromosomas. Es decir se duplican el numero
cromosmico dando lugar a una clula tetraploide.
La rotura y de la membrana nuclear se produce,
aparentemente por fosforilacin de las protenas que
constituyen las lminas por la actividad quinasa de la
proteina p
34
.
Tambin causas naturales de citodiferenciacin (en
vegetales, bien por tratamiento con ciertos agentes
qumicos, no deja aparecer la membrana nuclear en
profase, continuando el proceso mittico (endomitosis)
en el interior de la envoltura nuclear (endoprofase,
endoprometafase, endoanafase, y endotelofase). Sin
que se produzca despues la citocinesis).
Se trata entonces de un caso de endopolipoidia, aunque
equivalente al mecanismo de la endomitosis es totalmente
diferente al mecanismo de la endoreduplicacin que
origina los diplocromosomas y posteriormente, la
duplicacin del numero de cromosomas de la clula.
Ejemplo.- Una poblacin de clula meristemtica de
Allium cepa tratadas con la droga cordicepina (3'-
Desoxiadenosina), Gimenez y Martin, 1971), demostraron
que solo se inducia la endomitosis en las clulas que
estaban en profase, permitiendo que las demas clulas
mitticas siguieran su curso normal.
VARIACIONES EN LA ANAFASE
Los tratamientos en anafase pueden producir husos
monopolares o multipolares o impedir la formacin de
los microtbulos (c-mitosis).
a) Husos multipolares.- usando: mercaptoetanol, 8-
hexaclorociclohexano(clulas vegetales(Gimenez y
Lopez- Saez (1960) . Permite entender el
comportamiento de micronucleos (constituidos por uno
o pocos cromosomas).
b) C-MITOSIS.- Mitosis que se realiza bajo la accin de
la colchicina. Esta puede impedir la formacin o
disgregar los microtbulos que afectaran el movimiento
anafsico de los cromosomas .
En clulas vegetales los cromosomas C-metafsicos
engrosan y se acorten, adoptando una disposicin
tpica en Y o en X, como consecuencia mecnica
que impide al centrmero mantener paralelos a los
cromatidios o por activar sobre las proteinas de
cohesin que mantienen unidas las cromtidas
hermanas.
Al inicio de C-anafase, los cromatidios hermanos se
separan por efecto mecnico a nivel de centrmero.
Como no hay microtbulos los 4 cromatidios quedan
juntos y sin citocinesis todas ellas forman parte de la
misma clula.
La clula diploide inicia la c-mitosis con 2n y se
transforma en una clula tetraploide con 4
cromosomas en estado de un cromatidio.
La colchicina no es el nico agente qumico capaz de
inducir C-mitosis. Se conoce adems el efecto C-
mitosis de la colchemida la vimblastina, 8
hexaclorociclohexano, etc.
c) -mitosis.
La anoxia (privacin de O
2
) impide la migracin de los
cromatidos anafsicos hacia los polos por falta de energa,
pero se trata de un proceso reversible ya que al volver a
suministrar el oxgeno a las clulas los cromtidios
pueden continuar la anafase interrumpida.
VARIACIONES EN LA TELOFASE
Al final de la telofase mittica los cromatidios se
desespiralizan y se reorganiza la membrana nuclear.
La nucleolognesis implica la reconstruccin del nuclolo
en los nucleos hijos al termino de la mitosis.
En vegetales se ha demostrado que se puede impedir la
reorganizacin del nucleolo a pesar de la presencia de los
cuerpos prenucleolares preexisten tes inhibiendo la sntesis
de ARN durante la telofase. Quiere decir, la reorganizacin
del nucleolo por coalescencia de los cuerpo prenucleolares.
En torno a una regin cromosmica definida (NOR) es
ARN-dependiente.
Como en la endomitosis las cromtidas hermanas de los 2n
cromosomas se separa pero no pueden emigrar a los polos
de la clula (no hay tampoco una verdadera endotelofase),
Es decir se duplican el numero cromosmico dando lugar
a una clula tetraploide.
Se muestran clulas binucleadas de primera generacin
(inhibicin por cafena) y segunda generacin.
VARIACIONES QUE AFECTAN A LA
CITOCINESIS EN RELACION A LA
CARIOCINESIS.
En el ciclo celular, la cariocinesis y la citocinesis estn
acopladas originando las clulas hijas.
La Cariocinesis puede darse sola pero no la Citocinesis.
Esto puede explicar:
La induccin de clulas binucleadas (Gonzles y
Fernndez, 1966).
CARIOCINESIS SIN
CITOCINESIS
Si al termino de la mitosis no se produce la citocinesis,
los ncleos se mantienen en interfase (G0), G1- pre
star- o pueden pasar por periodos S y entrar en mitosis
de forma simultnea (bimitosis) con sus fases:
bimetafase, bianafase, bitelofase.
Si luego de la bimitosis no se realiza la citocinesis se
originan clulas tetranucleadas.
CITOCINESIS SIN
CARIOCINESIS
Tratando meristemos de cebolla con solucin acuosa de
Bromuro de etidio (100 mg/ml).
El tratamiento no inhibe la citocinesis producindose una
estrangulacin de los ncleos profsicos por el
crecimiento de la pared celular.
Al microscopio electrnico se observa la membrana
nuclear en forma permanente, la formacin del tabique se
produce por la congresin, ordenacin y coalescencia
de las vesculas producidas por los dictiosomas.
CITOCINESIS EN CLULAS
ANUCLEADAS.
En embriones humanos obtenidos por fecundacin in vitro
aparecen ms clulas que ncleos.
En microsporogenesis de centeno Secale cereale (haploide)
aparecen algunas diadas sin n8cleo, capaces deformar
tetradas por un proceso de citocinesis.
La citocinesis en clulas anucleadas hace pensar que el
citoplasma puede almacenar su propia informacin para
desencadenar los mecanismos necesarios para la
separacin celular.
CONCLUSIN
El proceso total de la divisin celular, est formado por
muchas fases que responden cada una a controles
genticos independientes, que pueden ser alterados
individualmente sin que se manifiesten en los dems.
El proceso puede ser alterado por causas genticas o por
causas experimentales.
La divisin celular es el resultado de la accin
coordinada de un control gentico mltiple.
MUCHAS GRACIAS