Universidad Nacional JOSE FAUSTINO

SNCHEZ CARRIN
Facultad de Medicina Humana
APOPTOSIS
Seminario de Biologa N 10

Alumnos: Susanibar Capelo, Angie
Samanamud Ramirez, Carlos
DEFINICIN

Se considera a la apoptosis como un mecanismo fisiolgico de muerte
(inherente al desarrollo celular), que se desencadena por diversas seales,
las cuales pueden ser fisiolgicas, o por estimulaciones exgenas
ambientales.

Este mecanismo de muerte celular interviene en importantes fenmenos
fisiolgicos como: embriognesis, mantenimiento de la homeostasia,
renovacin tisular y desarrollo y funcionamiento del sistema inmunitario.

Debido a que la apoptosis puede considerarse como un proceso de
eliminacin de clulas defectuosas, la desregulacin de los genes que
codifican las protenas relacionadas con la apoptosis, puede ser la causa
del desarrollo de diversos tumores.
ANTECEDENTES HISTRICOS

El concepto de "muerte celular programada" fue acuado por Lockshin
y Williams en 1964 y describa la muerte de las clulas que ocurra en
lugares y momentos determinados como eventos programados dentro
del plan de desarrollo del organismo. Aos despus, en 1972, Kerr,
Wyllie y Currie
llamaron apoptosis.
En 1982 Horvitz public los estudios genticos realizados sobre el
nematodo caenorhabditis elegans en los que se describieron los
genes encargados del control y la ejecucin de la apoptosis en este
organismo. Gracias a la homologa existente entre estos genes en c.
elegans y organismos superiores, la apoptosis en este nematodo ha sido
tomada como referente del proceso en todos los sistemas.
MODELO INICIAL: C.ELEGANS
El estudio de este nematodo fue iniciado en los aos 60 por Sydney
Brenner.
La ventaja que proporciona c. elegans como sistema experimental es que
posee 959 clulas somticas transparentes, que pueden ser estudiadas
individualmente mediante microscopa, y 17800 genes diferentes que
forman su mapa gentico secuenciado ntegramente. Este organismo, a
pesar de su simplicidad, desarrolla los procesos que en organismos
superiores son motivo de estudio: embriognesis, desarrollo,
funcionamiento del sistema nervioso, comportamiento y envejecimiento.
Se estableci el nmero y la localizacin de las clulas que moran por
apoptosis durante el desarrollo y mediante el anlisis de mutantes se
describieron los genes implicados en este mecanismo. Estos genes se
denominaron ced y se enumeraron desde el -1 al -10.
Ced-3. -4 y -9 regulan la fase ejecutora de la apoptosis y el resto est
implicado en los procesos de eliminacin por fagocitosis de la clula
apopttica. Posteriormente se describi el gen EGL-1 que participa
tambin en la regulacin de la MCP.

CED-3 se activa por homodimerizacin y para hacerlo posible, existe otra
protena CED-4 capaz de interaccionar con ella y tambin consigo misma.
La unin de CED-3 a CED-4 y la posterior homodimerizacin de esta,
traera consigo la activacin de CED-3. CED-4 tiene tambin su homologo
en mamferos, Apaf-1, que se une a procaspasa-9 y facilita su activacin.
La tercera protena de esta maquinaria es CED-9, la pieza reguladora, que
se une a CED-4 y la inhabilita para mediar la activacin de CED-3, al
impedir su homodimerizacin.

Su interaccin con una protena pro-apopttica como es EGL-1 en c.
elegans, la separa de CED-4 dejndola realizar su funcin activadora de la
apoptosis.

En mamfero, esta protena es equivalente a toda una familia con miembros
tanto pro-apoptticos como anti-apoptticos que regulan el proceso de
muerte celular.
GENES HOMOLOGOS EN MAMIFEROS
DIFERENCIAS ENTRE APOPTOSIS Y NECROSIS
APOPTOSIS NECROSIS
CAUSAS Falta factores de
crecimiento
Influencia hormonal
Toxicidad suave
Anoxia
Dao fsico o qumico
MORFOLOGA Clula encogida Clula inflada
NCLEO Condensacin
Segmentacin
Fragmentacin del ADN
Degradacin del ADN
MEMBRANA CELULAR Protuberancias, cambios en
la distribucin de la
fosfatidilserina
Lisa, lisis
MITOCONDRIA Cambios moleculares Inflamiento
EXPRESIN Expresin gnica
Sntesis proteica
Activacin de proteasas
------
MORFOLOGA


Inicialmente se produce la constriccin de la membrana, disminuyendo el
tamao celular y agrupando las organelas, dndole al citoplasma un
aspecto ms denso. Los cambios nucleares son los rasgos ms
caractersticos. La cromatina se condensa en la periferia, por debajo de la
membrana nuclear, en masas densas bien definidas.

Posteriormente el ncleo se fragmenta, formndose, al mismo tiempo,
vesculas citoplasmticas y los denominados cuerpos de apoptosis. Estos
cuerpos apoptticos se componen de citoplasma y organelas muy
agrupadas, pudiendo contener tambin fragmentos nucleares, rodeados
siempre de membrana. Los cuerpos de apoptosis sern fagocitados por las
clulas sanas adyacentes del parnquima o por macrfagos, donde se
degradaran con rapidez dentro de los lisosomas, gracias a su actividad
enzimtica.

Seguidamente las clulas adyacentes seran capaces de migrar o proliferar
reemplazando as el espacio ocupado por la clula apopttica suprimida.

La constriccin celular y la formacin de cuerpos apoptticos tienen un
comienzo abrupto con una duracin de pocos minutos; sin embargo los
cuerpos de apoptosis permanecen en el tejido aproximadamente 2 horas
hasta que sean fagocitados y degradados.

CARACTERISTICAS

Uno de los eventos ms tempranos de la apoptosis es la deshidratacin
celular.
Las clulas que eran redondas originalmente aparecen elongadas y,
generalmente, ms pequeas.
Otro cambio, quiz el ms caracterstico de la apoptosis, es la condensacin
de la cromatina nuclear.
El DNA en la cromatina condensada presenta hipercromasia y se marca
intensamente con sondas fluorescentes.
La envuelta nuclear se desintegra, la laminina sufre degradacin
proteoltica y, por ltimo, se produce la fragmentacin nuclear.
La activacin de endonucleasas que cortan preferencialmente en secciones
internucleosomales es otra caracterstica especfica de la apoptosis.
Cuando la apoptosis sucede in vivo , los cuerpos apoptticos son
fagocitados por las clulas vecinas como fibroblastos o clulas epiteliales (y
no necesariamente por macrfagos profesionales)
Otra caracterstica es la preservacin, al menos en la fase inicial de la
apoptosis, de la integridad estructural y de la mayora de las funciones de la
membrana plasmtica.


Los orgnulos celulares incluyendo la mitocondria y los lisosomas,
permanecen preservados durante la apoptosis, aunque el potencial
transmembrana de la mitocondria est enormemente decrecentado.
La movilizacin del catin calcio (Ca 2+ ) intracelular, la activacin de la
transglutaminasa que une protenas citoplsmicas, la prdida de
microtbulos, prdida de la asimetra de los fosfolpidos de la membrana
plasmtica que permite la exposicin de la fosfatidilserina en la cara
externa de la membrana plasmtica.
La duracin de la apoptosis puede variar, pero generalmente es corta (3-6
horas), incluso es ms breve que la duracin de la mitosis.
Proliferacin Muerte
Desrdenes de
acumulacin de
clulas
Desrdenes de
prdida de
clulas
Homeostasis
HOMEOSTASIS
CELULAR
MITOSIS
APOPTOSIS
AGOTAMIENTO
CELULAR
PROLIFERACIN
CELULAR
(+)
(+)
(-)
(-)
CNCER
Enf. Autoinm
ATROFIA
Enf. Neurodeg
HIV

MOLCULAS
IMPLICADAS EN EL
PROCESO DE
APOPTOSIS

RECEPTORES DE MUERTE

Los receptores de muerte pertenecen a la superfamilia del receptor de
TNF (TNFR) cuyos miembros tienen en comn un dominio extracelular
rico en cistena.
Tienen un papel fundamental los llamados receptores de muerte, situados
en la superficie de la clula, y que reciben la seal de ligandos de muerte
especficos para cada uno de ellos. Los receptores pueden dar la seal
directamente a las caspasas en pocos segundos disparando as el programa
de apoptosis.
Los receptores de muerte mejor caracterizados son los siguientes:
CD95 (APO-1/Fas)
TNFR1
DR3
DR4 y DR5




INDUCCION VA CD95/FAS
Muerte celular
mediada por las clulas
T citotxicas.
Respuesta inmune:
supresin de clulas T
activadas.
Sitios
inmunoprivilegiados:
destruccin de clulas
inmunes e
inflamatorias.



Induccin Va TNFR1
TNF se produce por clulas T y
Macrfagos activados en
respuesta a la infeccin.
Activacin de NF-B y AP-1:
Induccin de genes
proinflamatorios (1)
Induccin de apoptosis(2)


2
1
TRADD
FADD
PRO CASPASA 8
CASPASA 8 ACTIVA
TNF R1
TNF
TRADD
TRAF 2
IAP
Activacin
de NFB
Inactivacin
de Caspasas
C E L U L A R
Induccin Va TRAIL
Accin similar a CD95.
Unin a receptores DR4 y DR5.
Expresin constitutiva en muchos
tejidos
Mecanismos de proteccin celular
mediante la expresin de
receptores seuelo DcR1 y DcR2.
GENES REGULADORES DE LA APOPTOSIS

FAMILIA Bcl 2 Bax
Bcl-2
Bcl-x
Bax
Bak
Mcl-1

GEN c-myc

GEN DE SUPRESIN TUMORAL p53


FAMILIA DE Bcl-2
1. Grupo I:
- Actividad anti-apopttica
- Bcl-2, Bcl-X
L
, Bcl-w...
- 4 motivos BH: BH1-BH4
- Cola hidrofbica en el C-terminal
2. Grupo II:
- Actividad pro-apopttica
- Bax, Bak, Bok...
- Carecen de BH4
3. Grupo III:
- Actividad pro-apopttica
- Bid, Bik, Bad, Bim...
- Slo poseen el dominio BH3
- Pueden o no tener regin transmembrana

MECANISMOS DE ACCIN DE FAMILIA Bcl 2
Bax


Los miembros de la familia pro y anti-apopttica pueden formar dmeros;
si las parejas son idnticas se denomina homodmeros, y si son diferentes
heterodmeros.

GEN c-myc

La sobreexpresin de c-myc puede inducir bien proliferacin o bien
apoptosis.

GEN DE SUPRESOR TUMORAL p53
Se localiza en el brazo corto del cromosoma 17 (17 p13), est constituido por
11 exones dentro de un dominio cromosmico de 20 kb. En condiciones
normales acta como guardin del genoma previniendo la proliferacin
de clulas que presenten un DNA daado.
La regin N-terminal principalmente controla la transactivacin
transcripcional, mientras que la regin carboxi-terminal controla la
oligomerizacin, modulando la unin de los tetrmeros al DNA. El dominio
central es la regin por la que se une la protena como tetrmero, a la
secuencias dianas de los genes en el DNA.



ACTIVACIN Y FUNCIN

MECANISMO DE ACCIN

PROTEINAS DE LA FAMILIA DE LAS CASPASAS

Son cistein proteasas especficas de aspartato (caspase).
Se expresan como proenzimas (zimgenos)
Presentan 3 dominios:
Prodominio terminal
Subunidad larga (p20) que contiene el centro activo
C-terminal que es la subunidad pequea (p10)


Asp
Asp
Prodominio terminal
Subunidad larga (p20)
Subunidad pequea (p10)
ACTIVACION DE CASPASAS

Asp
Asp
Caspasa
iniciadora
Caspasa
activa
ACTIVACION POR OTRAS CASPASAS
Activacin de una caspasa por otra previamente activada: cascada de
caspasas.
Caspasas con prodominio corto: Caspasas efectoras
Caspasas 3, -6, -7.
Amplificacin e integracin de seales.
ACTIVACION INDUCIDA POR PROXIMIDAD
Activacin de una caspasa por proximidad: Trimerizacin de receptores
que reclutan caspasas y se procesan mutuamente.
Caspasas con prodominio largo: Caspasas iniciadoras.
Caspasa -8.
Implicada en va extrnseca (CD95).
ASOCIACIN CON UNA SUBUNIDAD
REGULADORA
Activacin de una caspasa a travs de un cofactor.
No se activa por proteolisis sino por cambio conformacional.
Caspasas con prodominio largo: Caspasas iniciadoras.
Caspasa -9. Cofactor: Apaf-1. Citocromo c.
Implicada en va intrnseca o mitocondrial.
SUSTRATOS DE CASPASAS
La caspasa-3 es la ltima responsable de los efectos apoptticos junto con
las caspasas -6 y 7.
Estas 3 caspasas ejecutoras causan el fenotipo apopttico:
Fragmentacin de DNA
Alteraciones de la membrana plasmtica
Translocacin PS



La caspasa-3 acta sobre el complejo DNAasa activado por caspasa (CAD)
y sobre su inhibidor, iCAD.
iCAD
CAD
Caspasa-3
INHIBIDORES DE CASPASAS
Protenas inhibidoras de apoptosis (IAP).
Se identificaron en baculovirus. Hay al menos 8 en mamferos:
- X-linked inhibitor of apoptosis (XIAP)
- c-IAP1
- c-IAP2
- IAP neuronal
- Survivina
- Livina (livin)
- BRUCE
Todos inhiben caspasa 3 y 7 activa y procaspasa-9.
Frenan la apoptosis por inhibicin, unin y degradacin:
Dominio repetido IAP de baculovirus (BIR) por el q el IAP se une e
inhibe a las caspasas. Entre 1-4 dominios BIR.

Dominio RING q acta como una ligasa de ubiquitina: degradacin del
IAP y de cualquier caspasa unida a l.

Dominio CARD: regulacin directa o indirecta del procesamiento de las
caspasas. c-IAP1 y c-IAP2



XIAP
Es el ms potente inhibidor de caspasas 3, 7 y 9

An no se conoce la funcin del dominio BIR 1.

La regin que circunda BIR 2 une especficamente caspasas 3 y 7.

BIR 3 une caspasa 9.

BIR 2 no tiene rol directo en la inhibicin de caspasas.

VIAS DE INDUCCION
Existen dos vas de induccin de apoptosis:

Va extrnseca o va de los receptores de muerte

Va intrnseca o va de la mitocondria

VIA EXTRINSECA
A travs de receptores superficiales: receptores de muerte. Receptores de la
familia de TNFR: CD95, TNFR1, TNFR2. Tb DR3, TRAIL...

Requiere trimerizacin para la transduccin de la seal.

Al receptor activado se le asocia un complejo de protenas: dominio de
sealizacin inductor de muerte (DISC, death-induced signalling
domain)

VIA INTRINSECA
La regulacin de la apoptosis en esta va es debida a la familia de Bcl-2.

Bcl-2 fue descubierto como un proto-oncogn en el linfoma folicular de
clulas B y es homlogo a ced-9.

Existen 19 miembros que se dividen en tres grupos.

Cada miembro posee al menos uno de los cuatro motivos conservados
denominados dominios de homologa con Bcl-2 (BH): BH1-BH4.

MITOCONDRIA
La mitocondria no es slo la central productora de energa de la clula,
tambin es un arsenal pues secuestra un potente combinado de protenas
pro-apoptticas:

Citocromo c: Componente junto con Apaf-1 y caspasa 9 del
apoptosoma

Smac/DIABLO (second mitochondria-derived activator of
caspases/direct IAP-binding protein with low pI): es una
protena que inhibe IAPs secuestrndolas.

FUNCIONES
ELIMINACIN DE TEJIDOS DAADOS O
INFECTADOS

La apoptosis puede ocurrir, cuando una clula se halla daada y no tiene
posibilidades de ser reparada, o cuando ha sido infectada por un virus.
Cuando la capacidad de una clula para realizar la apoptosis se encuentra
daada (por ejemplo, debido a una mutacin), o si el inicio de la apoptosis
ha sido bloqueado (por un virus), la clula daada puede continuar
dividindose sin mayor restriccin, resultando en un tumor que puede ser
de carcter canceroso.
Por ejemplo, como parte del "secuestro" del sistema gentico de la clula
llevado a cabo por los virus del papiloma humano (VPH), un gen
denominado E6 se expresa originando un producto que degrada la protena
p53, vital para la ruta apopttica.




DESARROLLO EMBRIONARIO

ESCULTURA DE DISTINTAS ESTRUCTURAS
El ejemplo ms claro de esto es la eliminacin de las membranas
interdigitales para la formacin de los dedos en vertebrados superiores.

Otro proceso de formacin de estructuras en que esta involucrada la
apoptosis es en el vaciado de cuerpos slidos para crear una luz.
Por ejemplo, la formacin de la cavidad preamniotica en el embrin de
ratn por la muerte de clulas ectodermales de su interior
ELIMINACIN DE ESTRUCTURAS
En el proceso de desarrollo a veces se forman estructuras que despus es
necesario suprimir. La razn es que pueden ser restos vestigiales de alguna
estructura necesaria para una especie ancestral pero a la que la evolucin
ha hecho perder la utilidad.

Tambin pueden ser formaciones requeridas para determinados estadios
del desarrollo y que despus ya no son de utilidad. Por ltimo, tambin
pueden ser estructuras necesarias para un sexo pero no para el otro.

Ejemplos de este objetivo de la apoptosis durante el desarrollo son los
tubos pronefrticos, necesarios en peces y larvas anfibias pero que han
dejado de serlo en mamferos y por eso son eliminados.

Tambin los ductos de Mllerian, que forman el tero y los oviductos en
hembras de mamferos pero que en machos son eliminados por apoptosis.


CONTROL DE LA SOBREPRODUCCIN DE
CLULAS
En muchos organismos existe, en un principio, una sobreproduccin
celular y despus, el nmero es ajustado a lo necesario mediante apoptosis.
Un ejemplo es la generacin de neuronas y oligodendrocitos que se hace en
exceso para despus ajustar su nmero en funcin del nmero de clulas
que inervan o de axones que mielinizan respectivamente.
CONTROL DE LAS CLULAS DEFECTUOSAS
Durante el desarrollo, se eliminan por apoptosis clulas anormales, con
localizacin errnea, no funcionales o potencialmente peligrosas, de forma
que solo completen el proceso de desarrollo clulas no daadas.
HOMEOSTASIS
En un organismo adulto, la cantidad de clulas que componen un rgano o
tejido debe permanecer constante, dentro de ciertos lmites.

Las clulas de la sangre y de piel, por ejemplo, son constantemente
renovadas por sus respectivas clulas progenitoras. Por lo tanto, esta
proliferacin de nuevas clulas tiene que ser compensada por la muerte de
otras clulas.

La homeostasis se logra cuando la relacin entre la mitosis y la muerte
celular se encuentra en equilibrio. Si este equilibrio se rompe, pueden
ocurrir dos cosas:
Las clulas se dividen ms rpido de lo que mueren, desarrollando un
tumor.
Las clulas se dividen ms lentamente de lo que mueren, producindose un
grave trastorno de prdida celular.
REGULACIN DEL SISTEMA INMUNITARIO

SELECCIN NEGATIVA EN TIMO

Este proceso que se lleva a cabo en el timo como etapa final de la
maduracin de los linfocitos T, tiene como objeto la eliminacin, por
apoptosis, de los clones de timocitos que hayan generado un receptor del
linfocito T hacia el antgeno (TCR, de T cell receptor) con especificidad
hacia un Ag propio.

De esta forma se hace posible la autotolerancia en los organismos, es decir,
la incapacidad de responder a un Ag propio y por lo tanto, de desencadenar
procesos autoinmunes.
PATOLOGIAS
VINCULADAS CON
LA APOPTOSIS

ENFERMEDADES ASOCIADAS A INHIBICIN DE
APOPTOSIS
Cncer: linfoma no Hodgkin folicular (Bcl-2 +), carcinoma (p53 +),
tumores hormono-dependientes
Enfermedades autoinmunitarias: lupus eritematoso sistmico,
glomerulonefritis autoinmunitaria
Infecciones virales: Herpes virus, Poxvirus, Adenovirus

ENFERMEDADES ASOCIADAS A AUMENTO DE
APOPTOSIS
Sida
Enfermedades neurodegenerativas: enfermedad de Alzheimer, enfermedad
de Parkinson, esclerosis lateral amiotrfica, retinitis pigmentosa,
degeneracin cerebelosa
Sndromes mielodisplsicos (MDS): anemia aplstica
Dao isqumico: infarto de miocardio, apopleja, dao por reperfusin,
dao heptico por alcoholismo.



LUPUS ERITEMATOSO SISTMICO

El lupus eritematoso sistmico (LES o lupus) es una enfermedad
autoinmune crnica que afecta al tejido conjuntivo, caracterizada por
inflamacin y dao de tejidos mediado por el sistema inmunolgico,
especficamente debido a la unin de autoanticuerpos a las clulas del
organismo y al depsito de complejos antgeno-anticuerpo.

El lupus puede afectar cualquier parte del organismo, aunque los sitios ms
frecuentes son el corazn, las articulaciones, la piel, los pulmones, los vasos
sanguneos, el hgado, los riones y el sistema nervioso.

En los ganglios linfticos, ciertos macrfagos se encargan de ingerir
linfocitos apoptticos. En el LES, la ausencia de estos macrfagos conlleva
a la apoptosis sin fagocitosis exponiendo el material celular a
reconocimiento autoantignico, activando a otros linfocitos B en contra de
sus propias clulas.
ENFERMEDAD DE ALZHEIMER

La enfermedad de Alzheimer (EA), tambin denominada mal de
Alzheimer o simplemente alzhimer

es una enfermedad
neurodegenerativa, que se manifiesta como deterioro cognitivo y trastornos
conductuales.
Se caracteriza en su forma tpica por una prdida progresiva de la memoria
y de otras capacidades mentales, a medida que las clulas nerviosas
(neuronas) mueren y diferentes zonas del cerebro se atrofian.
La enfermedad suele tener una duracin media aproximada de 10-12 aos,
aunque esto puede variar.