Identificao de

Enterobactrias.
Dra. Tnia Mara Ibelli Vaz
Pesquisador Cientfico
Instituto Adolfo Lutz - So Paulo
ndice
Famlia Enterobacteriaceae
Patogenia
Isolamento e identificao de enterobactrias
Aspecto das colnias
Identificao Bioqumica ( cultura pura)
Reao de VM e VP
Escherichia coli
Salmonella
Shigella
Klebsiella
Enterobacter
Serratia
Citrobacter
Proteus - Providencia - Morganella
Fluxograma BGN OXIDASE
Consideraes finais
Introduo

Definio

Bacilos Gram negativos
AAF / Fermentadores da glicose
Oxidase negativa e catalase +
Mveis / imveis
Cresce em meios comuns

Habitat
Plantas, solo, gua, intestino do homem e animais


Famlia Enterobacteriaceae
Introduo

Nomenclatura e Classificao

Mtodos Fenotpicos
Moleculares novas espcies
reclassificao

Classificao
Gneros ( 42)
Espcies ( centenas )
biotipos e sorotipos
Complexos


Famlia Enterobacteriaceae
Classificao - patogenia
- Enteropatgenos
- Infeces nosocomiais - espcies importantes
- Outras espcies - raras em material clnico
isoladas em : meio ambiente
plantas
animais
Identificao de Enterobactrias
Enterobactrias - principal componente da flora intestinal normal
do homem.


Infeces -intestinal, feridas e trato urinrio

Abcessos, pneumonia, meningites

Infeces nosocomiais

Famlia Enterobacteriaceae
Patogenia
Infeces intestinais

Caractersticas
normalmente na comunidade
DTA doena transmitida por alimento
surtos / casos isolados
hospitalar

Patgenos entricos clssicos

Salmonella spp
Shigella spp
E.coli - categorias diarreiognicas
Yersinia enterocolitica
Famlia Enterobacteriaceae
Patogenia
Infeces extra-intestinais
Comunidade
Hospitalar

Qualquer espcie
Fatores de risco:
Paciente
Veculos de transmisso
Alimentos contaminados

Espcies mais comuns

Escherichia coli
Klebsiella pneumoniae
Klebsiella oxytoca
Proteus mirabilis
Enterobacter spp
Salmonella ( sorotipos)
Serratia marcescens
Citrobacter spp
Providencia spp

Famlia Enterobacteriaceae
Patogenia
ISOLAMENTO E IDENTIFICAO DE ENTEROBACTRIAS
Famlia Enterobacteriaceae
Crescem bem nos meios comuns e meios seletivos para BGN
( 18 a 24h 1 mm de dimetro).

1- Exame macroscpico da cultura:
Aspecto morfolgico das colnias ( AS, MC,SS, TSA )
Tempo de crescimento e tamanho da colnia
Observar pureza da cultura

2-Exame microscpico da cultura:
Gram: tamanho, morfologia, reao tintorial, etc
Aspecto das colnias
Agar MacConkey
Aspecto das colnias
Salmonella. E.cloacae
E.coli
Salmonella.
E. coli
Aspecto das colnias
E. cloacae
Famlia Enterobacteriaceae
Identificao Bioqumica ( cultura pura)
Meios presuntivos
IAL (Pessoa e Silva)
EPM-MILI
TSI
IAL
Provas complementares:

Fermentao de acares
LDC- ODC - ADH
CiSi

Pesquisa de enzimas
DNase
gelatinase,lipase, NAR, ONPGase
Identificao Bioqumica
Gram
Oxidase VM e VP
Srie completa - 47 testes
Famlia Enterobacteriaceae
Reao de VM e VP
Famlia Enterobacteriaceae
Enterobacter
Klebsiella
Serratia
Maioria das espcies dos outros Gneros
Salmonella
Shigella
E.coli
Proteus
Morganella
Providencia
Citrobacter
Kluyvera
Enterobactrias VP+ Enterobactrias VP -
Citrato de Simmons
Escherichia coli
Glicose+/Gs+/-
sacarose+/-
urease-
*H
2S-

TDA-
indol+
LDC+/-
Motilidade+/-
lac+
CISI -
K.oxytoca ( LDC+/ motil.-CiSi+)
Diagnstico Diferencial
Citrobacter amalonaticus e C. diversus
( LDC-/motil.+CiSi+)
Aeromonas
Marcadores Epidemiolgicos

Infec. Intestinais
Sorotipagem
Fatores de virulncia
Infec. Extra-intestinais
Sorotipagem
Met. moleculares
Prova
Salmonella
Glicose+/gs v
sac -
H
2
S +
urease-
TDA -
indol -
LDC +
Mov. +
CiSi+
Lac -
Diagnstico diferencial
Citrobacter spp ( H
2
S + )
Proteus
glicerol
Marcadores Sorotipagem
Fagotipagem
Moleculares
Prova de
Fermentao
Shigella
E.coli ( LDC - / Mov.-)
Lactose
Ci Christ.
Acetato Trab.
Marcadores Sorotipagem
Met.moleculares
Glic.+ /gs -
sac -
urease -
TDA -
H
2
S
indol v
LDC -
Mov. -
CiSi -
Lac -
Diagnstico diferencial
Citrato
Sdio
Klebsiella
Enterobacter ( LDC+ / Mov.-)
ADH
ODC
Fermentao
Marcadores Sorotipagem
Met. moleculares

Diagnstico diferencial
Lac+
CiSi +
Enterobacter
LDC,ODC,ADH
Motilidade
DNase
Fermentao
Enterobacter
Klebsiella
Serratia
E.cloacae

Marcadores Sorotipagem
Met. moleculares
Diagnstico diferencial
Lac+
CiSi+
Serratia
Espcies de Serratia
LDC,ODC,
malonato,
fermentao , pigmento
Marcadores: Sorotipagem
Met.moleculares
Glic.+ / gs-
sac. -
urease -
H
2
S -
TDA -
indol -
LDC +
Mov. +
CiSi +
Lac -
DNase +
Gelatinase +
Lipase +
Citrobacter
Glic.+ / gs-
sac =V
urease -
H
2
S = V
TDA -
indol = V
LDC -
Mov. +
CiSi +
Lac +
Espcies de Citrobacter
ODC, indol, H2S malonato
fermentao
Glic.+/ gs -
sac. -
urease +
TDA +
H
2
S = V
indol = V
LDC -
Mov. +

CiSi +
Lac +
Proteus
Providencia
Espcies H
2
S +
BGN NF
Swarming
TDA, H
2
S, ODC,
gelatinase,
fermentao
Proteus - Providencia - Morganella
Diagnstico diferencial
Fluxograma
BGN Oxidase
Lac +
Lac -
E.coli
Enterobacter
Klebsiella
Kluyvera
Citrobacter
Shigella
Salmonella
Serratia
Proteus
Providencia
Morganella
gar Mac Conkey
IAL IAL
Cit. Simmons
Cit. Simmons
+
Enterobacter
Klebsiella
Kluyvera
Citrobacter
-
E.coli
VP +
+
Salmonella
Serratia
Proteus/Prov.(V)
-
Shigella
Morganella
IDENTIFICAO DE ENTEROBACTRIAS
Enterobactrias em microbiologia clnica Poucas espcies

Espcies incomuns , novas espcies, espcies atpicas podem ocorrer
(isoladas de material clnico, ambiente, plantas e animais)
PROBABILIDADES

Tratar-se de uma espcie rara
Cepa contaminada
Uma ou mais testes no adequados na identificao ( turvao)
Manipulao errada ( concentrao do inculo)
Composio e quantidade do meio ( substrato presente)
Controle de Q
IDENTIFICAO DE ENTEROBACTRIAS
O que fazer?
Checar tudo:

Pureza da cultura

Repetir todos os testes no mesmo sistema ou utilizando os
meios anteriormente utilizados

Repetir todos os testes em outro sistema de identificao ou
utilizar partidas diferentes do meio.

Encaminhar para laboratrios de referncia
Consideraes finais
Importncia da caracterizao das espcies

Evitar falsos surtos
No identificao do surto
Ateno para cepas atpicas
Ateno para espcies raras
Ateno para pureza das culturas