Contaje de placa aerbica,

Tincin Gram y Aislamiento

Laboratorio de Microbiologa de
Alimentos

Contaje de placa aerbica

Provee un estimado general de bacterias

aerbicas vivas

val!a calidad

Predictor de "s#el$%li$e&

Monitoreo ambiental

'cluye
(
Anaerobos obligados
(
Microaero$licos

Contaje en placas

Asume
(
Cada colonia proviene de una sola c)lula
bacterial
(
Algunas colonias puede ser originadas de una
"agrupamiento&de bacterias
*e reporta como
% +nidad $ormadora de colonias ,C-+./gramo
ml0
% 12 como bacterias totales

3esultados del Contaje de placa
aerbica

val!a la sanitacin de una producto

Predice la durabilidad ,*#el$%li$e.

4ndicador de seguridad ,*a$ety.

Monitorea el ambiente

Limitaciones del contaje de
placa aerbica

*lo se consideran organismos aerbicos

1o se sabe el tipo de bacteria

l medio de cultivo permite el crecimiento de

ciertas bacterias

Limitaciones visuales/rrores #umanos

5i$cil de distinguir entre partculas de alimentos

y bacterias

1o se debe utili6ar en alimentos $ermentados

Las colonias podran ser muy pe7uenas para verse

Tipos de muestra

L7uidas
(
L7uidos no viscosos se miden con pipetas
(
L7uidos viscosos se pesan

*lidas
(
Pesar as)pticamente

8isopo
(
Tomar muestra pasando un #isopo por un 9rea de$inida

Ambientales y de envases
(
njuage el interior del envase
(
Abra una placa para tomar una muestra del aire
(
Placas 325AC

Protocolo para Contaje en Placas

Prepare un #omogenado de la muestra

(
5ilucin :;:<
(
: parte de la muestra a :< partes del volumen
total

Me6cle en licuadora o "stomac#er&por =

minutos
:< g/ml muestra >< ml o$ diluyente
:;:< 5ilucin ( :<
%:

Protocolo para contaje en placas

Prepare diluciones seriadas

(
5iluya #asta 7ue obtenga colonias separadas entre =<%
=<< en una placa
(
+tilice una pipeta est)ril entre cada dilucin
(
Ponga la pipeta usada en el 9rea designada

Me6cle cada botella de dilucin =? veces en un

arco de >< grados por @ segundos

+se amortiguador de $os$ato o peptona para diluir

5iluciones
Dilution Blanks Containing 90 ml Diluent
:< ml :< ml :< ml :< ml
:<
%:
:<
%=
:<
%A
:<
%B
:<
%?
,:;:<.
,:;:<<. ,:;:<<<.
,:;:<<<<.
,:;:<<<<<.
Sample Homogenate

Placas
:<
%:
:<
%=
:<
%A
10
-4
10
-5
: ml : ml : ml : ml
: ml : ml
: ml : ml
: ml : ml
Put : ml o$ ac# 5ilution into mpty Petri%5is#

Protocolo Contaje de placas

Anada :C%=< ml de agar ,B?%?<-., a la placa petri

(
l agar no puede estar muy caliente por7ue mata las
bacterias

M)todo est9ndar agar de placa ,Plate Count

Agar.

Mueve :<' en cada direccin

5eje 7ue solidi$i7ue

4ncube las placas invertidas a A?%A@ por BC

#oras0

sterili6acin

l e7uipo y el medio de cultivo debe estar est)ril

sterili6acin en aire caliente

(
:@< C por una #ora

Ponga en #orno por = #oras luego 7ue )ste alcance la

temperatura

nvuelva en papel o papel de aluminio

sterili6acin por vapor

(
:=:C por :? min0 5ebe alcan6ar el autoclave :? psi de
presin

7uipo y medio l7uido

1o ponga las tapas apretadas

Tincin Gram

Gram positivo negativo

Dasado en la estructura de la pared

Gram positivo
(
Pared gruesa por la capa de peptidoglicano

Gram negativo
(
Capa $ina con presencia del lipopolisac9rido

2btencin de colonias aisladas

La meta es obtener colonias aisladas del

alimentos y/o cultivo

Las colonias pueden ser identi$icadas y

evaluadas
:
=
A
B

Collect loop$ul o$ culture

*treaE in eac# area starting

Fit# area :

-lame Loop in betFeen

areas

Contaje de placas

*lo cuente las placas 7ue tengan entre =<

y =<< colonias

M9s de =<<
(
T1TC

Menos de =<
(
T-TC

Contaje de placas
% :@? % % %
Average
:< :?< T1TC T1TC T1TC =
:>
=
=<< T1TC T1TC
T1TC
:
:
:;:<<<<< :;:<<<< :;:<<< :;:<< :;:< Plate
:
Too 1umerous to Count
=
Too -eF to Count

Average tFo countable plates and Multiply by 5ilution -actor

Count is :@? ' :<

B

Must Convert to TG2 *igni$icant 5igits

:0C ' :<

H
c$u/ml or g

Contaje%jemplos
T-TC :=? =?< % Average
=< :<< =<< T1TC =
:< :?< A<< T1TC :
:<
%B
:<
%A
:<
%=
:<
%:
Plate
+se ALL -2+3 even t#oug# A<< is outside range0 4$ 21
PLAT is in 3A1G, use D2T8 $or Average0
=?< ' :<
=
( =0? ' :<
B
:=? ' :<
A
( :0A ' :<
?
AI3AG ( @0C ' :<
B
c$u/g or ml

Contaje % jemplos
A?< % % % Average
B<< T1TC T1TC T1TC =
A<< T1TC T1TC T1TC :
:<
%B
:<
%A
:<
%=
:<
%:
Plate
All 5ilutions are outside 3ange so Fe M+*T use counts
2utside range
A?< ' :<
B
( A0? ' :<
H
c$u/ml or gJ
+se an "J& F#en using dilutions outside countable ranges
T#is means it is an *T4MAT5 count

Contaje% jemplos
:=? =?< % Average
? B<< T1TC =
:< A<< T1TC :
:<
%A
:<
%=
:<
%:
Plate
4$ Dot# 5ilutions are outside 3ange, use t#e 8ig#er 5ilution
,L2G3 C2+1T*.
@0? ' :<
A
c$u/ml or gJ

Placas con muc#as colonias

Cuente la dilucin mayor y utilice las rejillas en el contador de

colonias
(
: rejilla K : cm
=
(
+na placa pl9stica est9ndar tiene ?H cm
=
de 9rea de super$icie

*i L:< colonias/cm
=
cuente := cuadrados ,H consecutivos verticales
y H consecutivo #ori6ontales.
(
Totalice y divida por := ,promedio.0 Multipli7ue por ?H para
obtener
(
el n!mero total de colonias en la placa0 3eporte como estimado

*i M:< colonias/ cm
=
(
Cuente B cuadrados, promedie y multipli7ue por ?H

Iariaciones al contaje a)robico

Psicotr$icos
(
4ncube a ?%@ C por :< das
(
+se esparcido

Termod!ricos
(
Ponga ? ml de la muestra o la dilucin :;:< de la
muestra slida en bano de agua entre H<%C<n C por A<
minutos
(
n$re en #ielo por :< minutos
(
Ponga en placa e incube

Primer Perodo

s7uema

*egundo Perodo

Petri$ilms

Ientajas y desventajas de utili6ar
los petri$ilms

Ientajas
39pido
Menos espacio
-9ciles
1o #ay 7ue preparar
medio
5istincin entre C-+
vs0 Partculas de
alimentos

5esventajas
Mor$ologa de la
colonia
Costoso
5i$cil de leer