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REATORES COM CLULAS E

ENZIMAS IMOBILIZADAS

UNIVERSIDADE ESTADUAL DO RIO GRANDE DO SUL
UNIDADE UNIVERSITRIA BENTO GONALVES
COMPONENTE CURRICULAR: BIORREATORES
Prof. NICIA CHIES DA FR
Acadmicas: Rafaela F. Pacheco
Thaise Sutil
Dezembro de 2013
Definio

Reatores bioqumicos ou reatores biolgicos, so
reatores qumicos nos quais ocorrem uma srie de
reaes qumicas catalisadas por biocatalisadores.




Enzimas
Clulas vivas
Microrganismos Animais Vegetais
Biocatalisadores!
Introduo






So os biorreatores mais
conhecidos e utilizados.
So empregados desde a dcada de
40 para a produo industrial para
uma grande diversidade de
produtos, como: enzimas,
antibiticos, vitaminas, cidos
orgnicos, solventes e tratamento
de resduos.

Clulas vivas
Microrganismo
Biorreatores - Classificao
Reatores em fase aquosa (fermentao submersa)
Clulas Livres
Reatores agitados mecanicamente: STR
Reatores agitados pneumaticamente
Coluna de bolhas
Air lift
Reatores de fluxo pistonado (plug flow)
Clulas / Enzimas Imobilizadas
Em suportes
Leito fixo
Leito fluidizado
Em membranas
Membranas planas
Reatores de fibra oca (hollow fiber)
Imobilizao de Clulas e Enzimas
Biocatalisadores fisicamente confinados ou
localizados em uma regio definida do espao, com
reteno de suas atividades catalticas e que podem
ser utilizados repetida ou continuamente.

A imobilizao geralmente conseguida atravs do
contato de um material (suporte) com as clulas
vivas que se pretende imobilizar.


Mtodos de Imobilizao
As principais caractersticas de um suporte para a
imobilizao de clulas vivas so as seguintes:

No toxidez s clulas;
Alta capacidade de reteno;
Resistncia ao ataque qumico e microbiano;
Pouca sensibilidade s possveis solicitaes
mecnicas;
Alta difusividade de substratos e produtos.
Mtodos de Imobilizao
Os suportes mais utilizados na imobilizao de
clulas vivas so:







Mtodos de Imobilizao
Existem basicamente 3 mtodos de imobilizao de
clulas em suportes:

1. Adsoro;

2. Ligao covalente;

3. Envolvimento.

Os mecanismos de interao clula-suporte so
diferenciados para cada uma dessas tcnicas.







Adsoro
As foras de interao entre a superfcie celular e a
superfcie do suporte so complexas e envolvem
mltiplos tipos de ligaes.

Interaes eletrostticas;

Ligaes inicas;

Ligaes covalentes parciais.



Ligao Covalente
No mtodo de ligao covalente os suportes so
especialmente funcionalizados para conter um
grupamento qumico que ser responsvel pela
imobilizao da clula ao suporte.

Tcnica de sinalizao de esferas de vidro, seguida
de reao com glutaraldedo.

Limitao desta tcnica a potencial toxidade do
sistema.


Envolvimento
Imobilizao de clulas vivas atravs da tcnica de
confinamento de uma populao celular em uma matriz
polimrica formadora de um gel hidroflico.

Materiais mais utilizados para partculas de gel so
os polmeros naturais:
Agar;
K-carragena; + utilizado
Alginato;
Pectina.
Vantagens da Imobilizao - Clulas

Possibilidade de utilizao de altas concentraes
celulares no volume reacional, implicando em
maiores velocidades de processamento;

Operao de sistemas contnuos com velocidade de
alimentao acima da velocidade especfica mxima
de crescimento da clula (no imobilizada);

Eliminao de problemas com reciclo externo de
clulas (sedimentadores, filtros e centrfugas).
Vantagens da Imobilizao - Clulas

Provvel obteno de maiores fatores de converso
de substrato ao produto desejado;

Possibilidade de utilizao de projetos de
biorreatores mais adequados cintica do sistema
biolgico utilizado;

Maior proteo ao sistema biolgico em relao ao
estresse ambiental, ocasionado por elevadas
concentraes de substratos, pH e cisalhamento.

Vantagens da Imobilizao - Enzimas

Desenvolvimento de sistemas contnuos;
Maior estabilidade enzimtica;
Uso mais eficiente do catalisador atravs de
reutilizaes;
Flexibilidade no projeto de reatores;
Efluentes livres de catalisadores;
Maior versatilidade na etapa de separao;
Menor custo de mo de obra;
Facilidade de Automao e controle;
Possibilidade de utilizao das enzimas in-natura.
Tipos de Biorreatores Empregados

Os reatores utilizados para o cultivo de clulas
imobilizadas podem ser divididos em trs categorias, de
acordo com o padro de fluxo:

Reatores de mistura;

Reatores de leito fixo e

Reatores de leito fluidizado.
Biorreator Leito Fixo para Clula Imobilizadas

Nos biorreatores de leito fixo, os agregados
imobilizados so empacotados em uma coluna, atravs
da qual o meio de fermentao passado.

Apesar da simplicidade de design e baixo custo, este
tipo de reator mais utilizado em fermentaes
aerbicas.

No recomendo o uso em cultivos aerados devido
a depleo rpida do oxignio no incio da coluna.



Biorreator Leito Fixo


O leito fixo pode ser:

Leito fixo vertical;

Leito fixo horizontal;

Leito fixo paralelo.
Aspectos Relativos ao Transporte de Massa
Efeitos difusivos:
Limitaes de transporte de massa de reagentes e
produtos sobre a cintica das transformaes
bioqumicas realizadas pelas partculas.

Essas resistncias se devem ao filme de fluido que se
forma ao redor das partculas. Difuso
Interparticular

Transporte condutivo atravs das partculas. Difuso
intraparticular




Aspectos Relativos ao Transporte de Massa
A eficincia de uma partcula que contm clulas
imobilizadas definida como:

=

: velocidade real de reao


: velocidade reacional mxima possvel na ausncia de


qualquer limitao de transporte de massa

Aspectos Relativos ao Transporte de Massa
O coeficiente de massa no caso da difusividade
interpaticular esta contido no nmero de Sherwood, est
relacionado com nmero Reynolds e com nmero de
Schmidt.



Aspectos Relativos ao Transporte de Massa
O coeficiente de massa no caso da difusividade
intraparticular dada pela equao da difusividade
efetiva

est relacionado com outras propriedade das


partculas.






O valor de

deve ser medido experimentalmente.


Aspectos Relativos ao Transporte de Massa
A eficincia () de reao no caso da difuso
intraparticular est relacionada com o mdulo de Thiele
:






Aplicaes de clulas imobilizadas
Produo de etanol;

Produo de antibiticos;

Tratamento de resduos;

Produo de metablitos utilizando clulas animais;

Utilizao de microrganismos geneticamente
modificados.

Biorreator Leito Fixo Enzimas Imobilizadas

um biorreatores onde a reao catalisada por
enzimas imobilizadas. Os mtodos de imobilizao so
os mesmos j citados anteriormente. So utilizados os
seguintes biorreatores:
Biorreator em batelada;
Biorreator agitado contnuo;
Biorreator de leito fixo;
Biorreator de leito fluidizado.








No recomendado o uso de reatores de leito fixo
para fluidos de alimentao que contenham slidos
insolveis.

Quanto caracterstica da corrente de alimentao!

Para leito fixo recomendado meios de baixa
viscosidade ou sem material particulado.



Caractersticas Considerar
Quanto s caractersticas fsicas do suporte:
Em reator de leito fixo no devem ser usados
suportes compreensveis ou pequenos.

Quanto s caractersticas cinticas:
As reaes que obedecem cintica Michaeliana
tem um maior rendimento nos reatores de leito fixo.



Caractersticas Considerar
Limitaes difusivas no desempenho do reator

Influncia da limitao transferncia de massa externa em
reatores:

Maiores vazes lineares menores que 1 2 cm/min;

Vazes maiores problema de queda de presso atravs
do leito.




Caractersticas Considerar
Limitao difusiva interna da taxa de reao de uma
enzima imobilizada pode ser reduzida por:
Diminuio da razo atividade/volume de suporte;
Menor concentrao de sada por unidade de volume do
reator;
Aumento da concentrao de substrato;
Diminuio da espessura ou do dimetro do suporte da
enzima imobilizada.




Caractersticas Considerar
Temperatura e transferncia de calor:

A temperatura influncia tanto na velocidade da reao
quanto na desnaturao da enzima;

A transferncia de calor assume um papel extremamente
relevante, quando a reao deve ser realizada sob
temperatura controlada.

problemtica em reatores de leito fixo!





Caractersticas Considerar
Queda de Presso:

No planejamento de reatores com leito fixo deve se levar
em conta as eventuais variaes das presses durante o
processo;

As quedas de presses so maiores nos reatores de leito
fixo;

Quanto menores as partculas, maior ser a queda de
presso. Partculas menores que 50 mesh no devem ser
usadas.





Caractersticas Considerar
Aplicaes de Enzimas Imobilizadas


Isomerizao da glicose

Hidrlise da lactose

A produo contnua de L-aminocidos;

A produo de cido 6-amino-penicilnico


Artigo Cientfico
Ttulo do trabalho: Bioconverso de soro de queijo em
etanol atravs de biorreatores com clulas
imobilizadas.

Autores: Juliana Curzel Zaparoli1, Sabrina Gabardo,
Rosane Rech, Marco Antnio Zchia Ayub

Apresentado: Instituto de Cincia e Tecnologia de
Alimentos da UFRGS no XXIII Salo de Iniciao
Cientfica .



Bioconverso de Soro de Queijo em Etanol
Introduo: O emprego de substratos alternativos de
baixo custo, tais como o soro de queijo. Alm de auxiliar
na produo de etanol pode solucionar o problema de
gerao de subprodutos para as indstrias laticinistas.

Objetivo: O trabalho teve como objetivo avaliar e
comparar a bioconverso da lactose presente em meio de
soro de queijo em etanol usando Kluyveromyces
marxianus CBS 6556 imobilizada em alginato de clcio
em biorreatores de leito fixo e fluidizado.


Bioconverso de Soro de Queijo em Etanol
Matrias e Mtodos

1. Soro de queijo: Foi fornecido pela Eleg Laticnios
S.A. (RS, Brasil)

2. Material biolgico: Kluyveromyces marxianus CBS
6556 fornecida pelo Centro de Desenvolvimento
Biotecnolgico (SC, Brasil).



Bioconverso de Soro de Queijo em Etanol
3. Fermentao em biorreatores
3.1 Pr-inculo: foi realizado atravs da transferncia de
clulas em 800 mL de meio YEP-Lactose.

3.2 Tcnica de Imobilizao: adicionada em uma
soluo alginato de sdio 4%, e gotejada em soluo
de cloreto de clcio 0,1M a 35 C.

3.3 Biorreator: A fermentao em batelada foi realizada
utilizando biorreator de coluna preenchido com esferas.
Foram testados biorreatores de leito fixo e fluidizado
Bioconverso de Soro de Queijo em Etanol
Resultados
A bioconverso da lactose a etanol verificada para ambos
os sistema de biorreatores.
Bioconverso de Soro de Queijo em Etanol
Discusso

A lactose foi consumida em sua totalidade em apenas
6 horas em biorreator de leito fluidizado e em 24
horas no biorreator de leito fixo.

Em relao produo do etanol, um perfil mais lento
tambm observado no biorreator de leito fixo frente
ao de leito fluidizado.

Bioconverso de Soro de Queijo em Etanol
Concluses

A utilizao do soro de queijo para a produo de
etanol, revelou-se uma opo bastante vantajosa.

uma alternativa interessante do ponto de vista
tcnico, ambiental e econmico.

Quanto escolha do biorreator, o melhor desempenho
foi observado para biorreator de leito fluidizado
frente ao biorreator de leito fixo.
Artigo Cientfico
Ttulo do trabalho: Imobilizao de Lacase de
Aspergillus sp. em quitosana e sua aplicao na
bioconverso de fenis em reatores de leito fixo

Autores: Everton Skoronski, Mylena Fernandesb,
Agenor Furigo Jnior, Carlos Henrique Lemos Soares e
Jair Juarez Joo

Disponvel: Qumica Nova Orgo de divulgao da
Sociedade Brasileira de Qumica



Lacase na Bioconverso de Fenis
Introduo
Fenis so encontrados em diversos efluentes industriais
como os provenientes de indstrias txtil, papel, celulose
entre outras.

Lacases so polifenoloxidases que catalisam a oxidao
de uma variedade de substncias orgnicas e inorgnicas.

A oxidao de fenis catalisada por enzimas peroxidases
e polifenoloxidases tem apresentado resultados
promissores no tratamento de efluentes lquidos.



Lacase na Bioconverso de Fenis

Objetivo

O objetivo deste trabalho foi avaliar o desempenho da
enzima lacase de Aspergillus sp. imobilizada em
quitosana na bioconverso de fenis em reatores de leito
fixo.

Lacase na Bioconverso de Fenis
Materiais e Mtodos
Os experimentos foram realizados com lacase de
Aspergillus sp. comercializada pela Novozymes
(Dinamarca) como Denilite.

Como suporte foi utilizado quitosana (417963)
adquirida da Sigma-Aldrich (Alemanha).

Foi ainda utilizado glutaraldedo (25 %),
siringaldazina e 2,6-dimetxifenol. Todos os outros
reagentes foram de grau analtico.

Lacase na Bioconverso de Fenis
Aplicao da lacase imobilizada em reator de leito fixo

A estabilidade operacional da enzima foi avaliada em
reator de leito fixo, com diferentes massas do
biocatalisador.

O reator foi mantido em controle de temperatura.

Dois substratos foram utilizados: siringaldazina e 2,6-
dimetxifenol (DMP). A gerao do produto de
oxidao.
Lacase na Bioconverso de Fenis
Concluses

O processo de imobilizao permitiu a aplicao da
lacase em reatores de leito fixo.

Permitiu o seu uso em diversos ciclos de oxidao e
favoreceu a estabilidade operacional do biocatalisador
ao longo do tempo.
Lacase na Bioconverso de Fenis
Concluses

Entre os dois substratos avaliados em fluxo contnuo, o
desempenho do reator foi mais estvel quando se
utilizou como substrato SMP.

A utilizao de siringaldazina foi limitada devido
formao de compostos de oxidao que afetaram o
desempenho do biocatalisador.
Muito
Obrigada!

Referncias
BORZANI, W.; SCHMIDELL, W.; LIMA, U.A.; AQUARONE, E.
Biotecnologia Industrial. Processos Fermentativos e Enzimticos. So Paulo,
Edgard Blcher Ltda, vol.1, 2001.

CARNILHA. L; CARVALHO.W; SILVA. J.B.A. Biocatalisadores imobilizados:
uso de clulas e enzimas imobilizadas em process dos biotecnolgicos.
Biotecnologia e Desenvolvimento ano IX, n.36, jan/jun. 2006

CARVALHO. W; CANILHA.L; SILVIO.S.S. Uso de biocatalisadores
imobilizados: uma alternativa para a conduo de bioprocessos. Revista
Analytica, So Paulo, n. 23, jun/jul. 2006

pt.scribd.com/doc/81827897/NOCOES-SOBRE-REATORES-ENZIMATICOS

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