-Medida de la Absorbancia y Transmitancia.

Mtodos Espectroscpicos
Se denominan genricamente a un amplsimo nmero de mtodos instrumentales
que utilizan tcnicas en las que se genera una seal de tipo ptico cuyo
fundamento est basado en la interaccin de la radiacin electromagntica con el
analito.

Al interaccionar la radiacin electromagntica con la muestra que contiene el

analito, se pueden originar distintos fenmenos, de entre los cuales la absorcin y
emisin de luz, son los mas relevantes y dan lugar a los mtodos
espectrofotomtricos de absorcin y (o) emisin.

Los mtodos pueden ser de absorcin molecular o atmica, dependiendo de que el

analito se encuentre en estado molecular o atmico.
Tambin existen mtodos fluorescentes, en los que existe una absorcin precedida
de emisin
Todos estos mtodos se denominan tambin espectroscpicos, porque estn basados
en los espectros de absorcin o emisin del analito.

La luz tiene una naturaleza dual:

Como onda
Como una corriente de partculas o paquetes de energa (fotones)

Radiacin Electromagntica
Luz
Onda o partcula?

Onda

Partcula

Longitud de onda

Presenta absorcin y
emisin de energa
radiante

Frecuencia
Velocidad
Amplitud

E h

hc

Fotn

Radiacin Electromagntica
La distancia entre dos picks (o dos valles) de una onda se llama longitud
de onda (= lambda).

Radiacin Electromagntica
CARACTERSTICAS DE LAS ONDAS

nodo

Radiacin Electromagntica
La longitud y la frecuencia de onda son inversamente
proporcionales y se relacionan mediante la siguiente
ecuacin:

x = c = c/
c = velocidad de propagacin de la radiacin en el vaco = 3,00 x 1010cm/s

La letra griega (lambda) se utiliza para representar la longitud de onda en ecuaciones.

La longitud de onda es inversamente proporcional a la frecuencia () de la onda. Una
longitud de onda larga corresponde a una frecuencia baja, mientras que una longitud
de onda corta corresponde a una frecuencia alta.

Ejemplo:

= c

Donde es la longitud de onda, c es la velocidad de la

onda, y es la frecuencia.
Por ejemplo, Cul sera la longitud de onda de la luz roja de un semforo?
frecuencia aproximada de 440 THz (1012 s-1)

= c

Radiacin Electromagntica
La energa UV es mayor que, cualquier color del
espectro visible. Sin embargo los rayos X son ms
energticos que la luz UV, como se puede apreciar
por su longitud de onda.

Con base a lo anterior se puede entender que existe

una relacin inversa entre la longitud de onda y la
energa del fotn correspondiente.

Cuanto ms larga la longitud de onda de la luz visible tanto ms rojo el color.

Asimismo las longitudes de onda corta estn en la zona violeta del espectro.

desplazamiento batocrmico ( ms corta) corrimiento hacia el rojo

Desplazamiento hipsocromico, ( ms corta) corrimiento hacia el azul

Todos los elementos poseen un espectro propio, que se puede

medir al someterse a temperaturas elevadas ya que producen
espectros discontinuos .

**Para ver espectros de la tabla peridica buscar en esta pgina

http://site.ifrance.com/okapi/quimica.htm **

Las ondas electromagnticas se diferencian en su frecuencia y su longitud de onda. El

conjunto de todas las ondas constituye el espectro electromagntico.
El espectro electromagntico se divide en partes que reciben nombres diferentes,
aunque no existe una separacin clara entre ellas.

Tipos de ondas electromagnticas

Rayos gamma
Su longitud de onda () < 0.1, donde 1 es igual a 10-10 m. Se originan en las
desintegraciones nucleares que emiten radiacin gamma. Son muy penetrantes y muy
energticos
Rayos X
Se producen por oscilaciones de los electrones prximos a los ncleos.
Imagen
Imagen
9. 10.
Paul
NASA/IPAC.
Hermans. Dominio
Creative commons.
pblico.
0.1 < < 30
Son muy energticos y penetrantes, dainos para los organismos vivos, pero se utilizan de
forma controlada para los diagnsticos mdicos.

Rayos UVA (Ultravioletas)

Se producen por saltos electrnicos entre tomos y molculas excitados.
30 < < 4000

El Sol es emisor de rayos ultravioleta, que son los responsables del bronceado de la
piel. La radiacin ultravioleta es absorbida por la capa de ozono, y, si se recibe en
dosis muy grandes, puede ser peligrosa ya que impide la divisin celular, destruye
microorganismos y produce quemaduras y pigmentacin de la piel.
Luz visible
Es la pequea parte del espectro electromagntico a la que es sensible el ojo
humano.
400 nm < < 750 nm
Se producen por saltos electrnicos entre niveles atmicos y moleculares.
Los cables de fibra ptica permiten utilizar la luz visible para transmitir grandes
volmenes de informacin a grandes distancias, sobre todo con el uso del lser (luz
monocromtica y coherente).

Radiacin infrarroja
Es emitida por cuerpos calientes y son debidas a vibraciones de los tomos.
10-7 m < < 10-3 m
La fotografa infrarroja tiene grandes aplicaciones: en medicina (termografas), en la
industria textil se utiliza para identificar colorantes, en la deteccin de falsificaciones
de obras de arte, en telemandos, estudios de aislantes trmicos, cocina vitrocermica
halgena, etc.

En la foto se observa la fotografa en infrarrojos de un perro.

Radiacin de microondas
Son producidas por vibraciones de molculas.
0.1 mm < < 1 m
Se utilizan en el radar, en radioastronoma, banda UHF de televisin, enlaces de
telefona mvil y en hornos elctricos.

Ondas de radio
Son ondas electromagnticas producidas por el hombre mediante dispositivos
electrnicos, sobre todo circuitos oscilantes, y se detectan mediante antenas.
1 cm < < 1 km
Se emplean en radiodifusin (sistemas de radio y televisin).

Regiones del Espectro Electromagntico

Espectro Electromagntico
Dada la amplitud de lneas y frecuencias espectrales que contiene el espectro
electromagntico, el espectro que resulta de la interaccin
materia-energia radiante, puede ser muy complejo y abarcar amplias zonas: Vis-Uv, IR,
Microondas..etc.

Caractersticas de la radiacin electromagntica

Energa fotn (E) = h

Donde h es la constante de plank (6,63 x 10-34 Js)

En trminos de longitud de onda y nmero de onda

E = hc = hc

Cuando incrementa, disminuye la energa y frecuencia del fotn

Desde hace muchos aos se ha usado el color como ayuda para reconocer las
sustancias qumicas; al reemplazar el ojo humano por otros detectores de
radiacin se puede estudiar la absorcin de sustancias, no solamente en la zona
del espectro visible, sino tambin en ultravioleta e infrarrojo.

Se denomina espectrofotometra a la medicin de la cantidad de energa

radiante que absorbe un sistema qumico en funcin de la longitud de onda
de la radiacin, y a las mediciones a una determinada longitud de onda.
La teora ondulatoria de la luz propone la idea de que un haz de luz es un flujo
de cuantos de energa llamados fotones; la luz de una cierta longitud de onda
est asociada con los fotones, cada uno de los cuales posee una cantidad
definida de energa.

Transmitancia

La figura muestra un haz de radiacin paralela antes y despus de que ha pasado a

travs de una capa de solucin que tiene un espesor de b cm y una concentracin c
de una especie absorbente.
Como consecuencia de interacciones entre los fotones y las partculas absorbentes,
la potencia del haz es atenuada

La transmitancia T de la solucin es entonces la fraccin de la radiacin

incidente transmitida por la solucin.

La transmitancia se expresa a menudo como porcentaje:

Absorbancia
La absorbancia A de una solucin se define mediante la ecuacin:

La mayor parte de los trabajos analticos se realizan con soluciones de manera

que vamos a desarrollar la relacin que existe entre la concentracin de la
solucin y su capacidad de absorber radiacin.

Absorcin UV-Visible
Para que ocurra la absorcin de una radiacin Uv-Visible en molculas orgnicas, se
requiere que la energa absorbida corresponda al salto de un orbital poblado a uno
desocupado

E h

hc

Proceso de Absorcin
La energa de excitacin a una molcula proveniente de un fotn durante el proceso de
absorcin se representa as:
A + h A* A + calor

donde:
A es el absorbente en su estado de energa bajo
h representan a la constante de Planck y la frecuencia respectivamente.
A* es el absorbente en su nuevo estado de excitacin energtica

La energa del fotn incidente posee una longitud de onda ()

A* es inestable y rpidamente revierte a su estado energtico ms bajo, perdiendo as la
energa trmica correspondiente.
La absorcin de determinadas longitudes de onda depende de la estructura de la
molcula absorbente (absortividad, a)

Medicin de Transmitancia y Absorbancia

La transmitancia y la absorbancia se miden en un instrumento llamado
espectrofotmetro, la solucin del analito se debe contener en algn recipiente
transparente, tubo o celda.

Procesos de absorcin

Absorcin
Reflexin
Abs del recipiente
Abs matriz
Dispersin de la
radiacin

Blanco

-Ley de Beer, aplicaciones y limitaciones

Las leyes de Lambert y Beer *

Ley de Lambert: cuando un rayo de luz monocromtica (I0) pasa a travs de un
medio absorbente, su intensidad disminuye exponencialmente (I) a medida que
la longitud del medio absorbente aumenta

I = I0e-ab

I0

1 cm.

I0

2 cm.

Ancho de la celda

I0

3 cm.

Ley de Beer: Cuando un rayo de luz monocromtica pasa a travs de un medio

absorbente, su intensidad disminuye exponencialmente a medida que la
concentracin del medio absorbente aumenta

I = I0e-ac
I0

I0

I0

Lo que significa que combinando ambas leyes se crea la Ley de Beer-Lambert donde
la fraccin de luz incidente que es absorbida por una solucin es proporcional a la
concentracin de soluto y al espesor de la sustancia atravesada por la luz. La relacin
entre la luz incidente (I0) y la reflejada (I) dar una idea de la cantidad de radiacin que
ha sido absorbida por la muestra.

Ley de Lambert-Beer

A abC
A: absorbancia
a: absortividad, absorbilidad, coeficiente de extincin

b: paso ptico
C: concentracin

si b = 1cm y c = gramos /litro

a = L g-1cm-1

si b = 1cm y c = moles/litro

= L mol-1cm-1 (absortividad molar)

si b = 1cm y c = 1g/100ml

= ml g-1cm-1

Absortividad

A = abc
a es una constante de proporcionalidad que comprende las caractersticas qumicas de
cada compuesto, o molcula y su magnitud depende de las unidades utilizadas para b y
c.
Cuando se expresa la concentracin en moles por litro y la trayectoria a travs de la celda
en centmetros, la absortividad se denomina absortividad molar y se representa con el
smbolo .
En consecuencia cuando b se expresa en centmetros y c en moles por litro.

A = bc
Donde A representa la absorbancia del compuesto

Absorbancia
La absorbancia es directamente proporcional a la longitud del recorrido b a travs de la
solucin y la concentracin c del color absorbente. Estas relaciones se dan como:

A = abc
A menudo b es dada en trminos de cm. y c en gramos por litro, entonces la absortividad
tiene unidades de lg1cm1.

Ley de Beer
25 mM

5 mM

Max
Longitud de onda (nm)

Ley de Beer

A abC
Y = mx
A

m es la pendiente = a o
cuando b = 1 cm

Concentracin

Transmitancia y absorbancia

La Transmitancia (T) es la relacin

entre la intensidad de luz transmitida
por una muestra problema (P) con la
intensidad de luz incidente sobre la
muestra (Po): Se expresa como % T

P
T
P0
De lo anterior se desprende que la Absorbancia (A) o luz que es
absorbida por la muestra es igual al logaritmo en base diez del recproco
de la transmitancia (T) o bien al -log10 de la transmitancia, en el que el
disolvente puro o (blanco) es el material de referencia; esto es:

A log T

P0
A log
P

Transmitancia y absorbancia

%T

%T

0.001

0.1

3.000

0.100

10.0

1.000

0.500

50.0

0.301

0.800

80.0

0.097

1.000

100.0

0.000

P
x 100
P0

A log T

%T vara entre 0 y 100%

A vara entre y 0

Transmitancia y absorbancia
Absorbancia contra concentracin (comportamiento lineal)

Absorbancia

Concentracin
% Transmitancia contra concentracin (pendiente con signo negativo y comportamiento
exponencial)

% Transmitancia

Concentracin

Transmitancia y absorbancia
La representacin grfica correspondiente a absorbancia
transmitancia en un gradiente de concentraciones es la siguiente:

Concen
tracin

Ejercicios

Indique el valor de absorbancia correspondiente a un valor de T = 45.0 %.

A = - log T = - log (0,45) = 0,346787
Si una disolucin de concentracin 0.0100 M tiene una T = 45.0 % a una longitud
de onda dada, cul ser el valor de transmitancia que corresponde a una disolucin
0.0200 M de la misma sustancia?
A bc
A` bc`
A
A`
b
c
c`

A`

Ac` 0,346787 x0,0200M

0,693575
c
0,0100M

T 10 A 100,693575 0,2025

T 20,25 %

 A 580 nm una disolucin de un determinado complejo, presenta una

absortividad molar de 7,00 x 103 L mol-1 cm-1. Calcule:

a) La absorbancia de una solucin 2,50 x 10 -5 M del complejo a 580 nm en una

celda de 1,00 cm.
b) La transmitancia para la misma solucin.
a)

A bc

A 7,00 103

A 0,175
b)

L
mol
1,00 cm 2,50 10 5
molcm
L

A log T
T 10 A
T 100,175

T 0,668

66,8 %

Ley de Beer
Alcance de la ley de Beer
Realmente la ley de Beer, A = b C, es una ley experimental que nosotros hemos
tratado de establecer tericamente, suponiendo que se cumplen varias condiciones o
supuestos. Estos supuestos establecidos para deducir la ley son:

1.- La radiacin es monocromtica.

Una radiacin monocromtica (mismo color) significa que est constituida por
fotones de una sola clase. Es decir, de la misma E (energa) y n (ndice de refraccin)
* n = medida de la interaccin del medio con la radiacin (tablas)
n = c/v [c = 3,00 x 1010cm/s y v = velocidad]

Ley de Beer
2.- Las especies disueltas actan independientemente unas de otras en el proceso de
absorcin.

3.- La absorcin tiene lugar en un volumen de seccin recta y uniforme.

4.- La degradacin de la energa absorbida es rpida en forma de calor y no radiacional
(es decir, los posibles foto efectos son despreciables).

5.- El ndice de refraccin, n, de las disoluciones a medir es independiente de la

concentracin de las especies absorbentes.

Ley de Beer
Propiedades de la Ley de Beer

La ley de Beer rige el proceso de absorcin en cualquier regin del espectro

electromagntico, ya sea absorcin de radiacin visible-ultravioleta, absorcin de
rayos X, etc.
La absorbancia es una propiedad aditiva, es decir, en disoluciones que contengan
ms de una especie absorbente la absorbancia total es la suma de las
absorbancias individuales de cada especie absorbente.
Suponiendo que no haya interaccin entre las distintas especies absorbentes (es
decir, que estas sean independientes entre s), la absorbancia total para un sistema
absorbente multicomponente 1, 2, 3,... n, cuyas absorbancias individuales sean A1,
A2, A3,....An viene dado por:
A TOTAL = A i = A1 + A2 + A3 +.......... + An

DESVIACIONES DE LA LEY DE BEER

La relacin lineal entre la absorbancia y el paso ptico, b, se cumple siempre.

Para un paso ptico constante se suelen encontrar desviaciones a la
proporcionalidad directa entre la A medida y la C de la especie absorbente.
Estas desviaciones pueden representar limitaciones reales de la ley de Beer (no se
cumple alguno de los supuestos de dicha ley enumerados previamente
(Desviaciones Fundamentales o Intrnsecas).
Otras ocurren como consecuencia de la forma de realizar las medidas
(Desviaciones Instrumentales) o como resultado de los cambios qumicos asociados
a las variaciones de concentracin (Desviaciones Qumicas).

Ley de Beer

Absorbancia

DESVIACIONES DE LA LEY DE BEER

Concentracin

Las desviaciones de la Ley de Beer pueden ser positivas (curva A) o negativas (curva B).

Se pueden dividir en cuatro clases:

a) Limitaciones o desviaciones intrnsecas
b) Limitaciones instrumentales
c) Limitaciones qumica
d) Otras limitaciones

Ley de Beer

a) Limitaciones intrnsecas o reales de la ley de Beer.

La ley de Beer describe bien el proceso de absorcin en disoluciones diluidas de la
especie absorbente (concentracin <10-2 M).
A concentraciones elevadas, la ley de Beer presenta desviaciones por dos razones:

Al elevar la concentracin aumenta el grado de interaccin mutua entre las

especies absorbentes, alterando su capacidad de absorcin a una longitud de onda
determinada (contradice el supuesto 2).
Trabajando a C elevadas, las variaciones de C causan alteraciones significativas en
el ndice de refraccin, n, de la disolucin. Puesto que sabemos que:
n2
aire
n = --------- = --------naire
2
al cambiar n cambia la a la que ocurre la absorcin. Cambia (contradice el
supuesto 1).

Ley de Beer
b)Limitaciones o desviaciones instrumentales de la ley de Beer.
Aparte de desviaciones accidentales debidas a un mal funcionamiento del
espectrmetro. Ej:
i) fluctuaciones de la potencia de la fuente.
ii)luz errtica que llega al detector sin pasar por el camino ptico del
instrumento.
iiii) respuesta no lineal del sistema electrnico detector-amplificador.
Existe una causa instrumental de error sistemtico e inevitable: el empleo de radiacin
no-monocromtica.
Rara vez se puede usar de forma prctica en Espectrofotometra de Absorcin
Molecular una radiacin que se limite a una sola .
Realmente los dispositivos para seleccionar la dejan pasar una banda mas o menos
estrecha de .
El uso de un laser monocromtico o de lmparas de ctodo hueco para cada longitud de
onda es poco prctico en Espectrofotometra de Absorcin Vis-UV.
En la prctica se utiliza una lmpara que emite un espectro contnuo y un
monocromador con los que se puede cubrir todo el intervalo de longitudes de onda (p.e. el
visible, desde 390-750 nm) de inters.

Ley de Beer

EFECTO DE LA RADIACION POLICROMATICA EN LA LEY DE BEER

Si la medida se realiza en la zona del espectro donde no hay grandes variaciones de
absorbancia con la longitud de onda (banda A), no vara mucho a lo largo de la banda, es
decir, constante y a pesar de que la luz es policromtica se cumple la ley de Beer.
Sin embargo, si la medida se realiza en una zona donde existen grandes variaciones de la
absorbancia con la longitud de onda (banda B), vara a lo largo de la banda y se
encuentran desviaciones de la ley de Beer.
Banda A

Absorbancia

Absorbancia

Banda B

Longitud de onda

Banda

Banda

Concentracin

Esta es otra razn importante por la cual la medida de la absorbancia en

espectrofotometra debe realizarse en el mximo de la lnea de absorcin del analito
donde A/ es mnima.

Ley de Beer
c) Limitaciones o desviaciones qumicas de la ley de Beer.
Su origen es una reaccin qumica que modifica la concentracin de la especie absorbente.
Las desviaciones qumicas de la ley de Beer se producen si la especie absorbente
participa en un equilibrio qumico que modifica la concentracin de la misma en el
momento de la medida.
Las desviaciones son aparentes ya que la [analito] real es diferente de la concentracin
analtica (o total) de dicha especie en la disolucin.

Ley de Beer

c) Limitaciones o desviaciones qumicas de la ley de Beer.

Ej: muchos equilibrios son dependientes del pH y un caso clsico es el observado
en las disoluciones no amortiguadas de K2Cr2O7 en las que se produce el equilibrio
de hidrlisis (al disolver la sal en agua):
Cr2O7 2-

+ H2O 2 CrO4 2-

+ 2 H+

[1]

Sistema que viene regido por la correspondiente constante de equilibrio

[CrO4 2-]2 [H+]2
Keq = ---------------------[2]
[Cr2O7 2- ]
Si se prepara una disolucin de K2Cr2O7 disolviendo la sal slida en agua:
CT = [Cr2O7

2-

] + [CrO4 2-]

[3 ]

Ley de Beer

La constante de equilibrio se puede expresar:

[Cr2O72-] eq
[H+]2eq
------------------- = ---------[CrO4 2-]2 eq
Keq

[4]

Las [CrO42-] y [Cr2O72-] en el equilibrio dependen de CT (ecuacin [3]) y de la [H+]

(ecuacin [4]).
El CrO42- (amarillo) absorbe a 372 nm y el Cr2O72- (naranja) absorbe a 350 y 450 nm
si se preparan los patrones simplemente por dilucin con agua se observarn
desviaciones aparentes de la ley de Beer.
Anlogamente, cualquier cambio de pH originar modificaciones de las
concentraciones relativas de ambas especies y por lo tanto habr desviaciones de la
linealidad.

Ley de Beer

c) Limitaciones o desviaciones qumicas de la ley de Beer.

En estos equilibrios dependientes del pH, el pH deber ser ajustado (tamponado)

de modo que se asegure que el equilibrio se desplace en una determinada
direccin.
Por ejemplo,
Si la disolucin se hace francamente cida, todo el Cr(VI) estar como Cr2O72- y
se observa el cumplimiento de la ley de Beer a 350 y 450 nm.
Por el contrario, si el sistema se hace fuertemente alcalino, el Cr(VI) estar todo
como CrO42- y se cumplir la ley de Beer a 372 nm.

Ley de Beer

d) Otras causas de desviacin de la ley de Beer.

La variacin de la temperatura puede influir claramente en el espectro y
sobre el establecimiento del equilibrio qumico.
Sin embargo, para oscilaciones pequeas de temperatura (e.g. 5 C, en torno
a la temperatura ambiente del laboratorio) no se suelen observar variaciones
significativas de la absorbancia.
Los foto efectos, tales como fluorescencia, dispersin no corregida,
reacciones fotoqumicas, etc. tambin causan desviaciones de la ley de Beer.
El detector las puede registrar como una disminucin de la absorcin
caracterstica de las especies absorbentes en la muestra.
El disolvente puede influir en el espectro de absorcin de las especies.
En general, el espectro de una sustancia se desplaza a longitudes de onda ms
largas (se rebaja DE) al aumentar la polaridad del disolvente y si vara la
variar .

Rango para realizar cuantificaciones

Slo se debe utilizar el rango de concentraciones donde la relacin con la

absorbancia es lineal.
Depende de la absorbilidad de la sustancia.

Rango para realizar cuantificaciones

La mayor parte de las especies cumplen con la ley en un determinado intervalo de

concentraciones. Fuera de l, experimentan desviaciones positivas o negativas.
Esto se observa bien en el calibrado:

Absorbancia

respuesta debida
a la autoabsorcin
o a la luz escasa que
atraviesa la cubeta

respuesta del blanco,

interferencias o escasa
sensibilidad

concentracin

Es preciso asegurar
que se est trabajando
en el intervalo lineal!!

Seleccin de longitud de onda

banda A
A

banda C
banda A

banda C

banda B

banda B

concentracin

Se debe de procurar medir las absorbancias en el entorno ms prximo a la max. de

absorcin en el espectro (se minimizan errores) y se logran mximas sensibilidades.

Midiendo lejos de ese punto de mxima absorcin:

pequeas variaciones en la medida se traducen en grandes errores.

Anlisis de Muestras
El paladio (II) y el oro (III) se determinan de forma simultanea al reaccionar con el
metiomeprezina (C19H24N2S2). El mximo de absorcin del complejo de paladio se da
a 480 nm, mientras que el del complejo de oro se presenta a 635 nm. Los datos de
absortividad molar a esas longitudes de onda son los siguientes:

Absortividad Molar ()
480 nm
635 nm
Complejo De Pd

3.55 x 103

5.64 x 102

Complejo de Au

2.96 x 103

1.45 x 104

Se trata de una muestra de 25 ml con exceso de metiomeprazina y se diluye a 50 ml.

Calcule las concentraciones molares del paladio (II) CPd y del oro (III) CAu, en la muestra,
si la absorbancia de la solucin diluida es de 0.533 a 480 nm y de 0.590 a 635 nm
cuando se mide en una celda de 1.0 cm.

A 480 nm, se tiene que:

A480 = Pd(480)bCPd + Au(480)bCAu
0.533 = (3.55 x 103 M-1cm-1)(1 cm) CPd + (2.96 x 103 M-1cm-1)(1 cm) CAu
Reordenando:
CPd = 0.533 (2.96 x 103 M-1 CAu)

3.55 x 103 M-1

A 635 nm, se tiene que:

A635 = Pd(635)bCPd + Au(635)bCAu
0.590 = (5.64 x 102 M-1cm-1)(1 cm) CPd + (1.45 x 104 M-1cm-1)(1 cm) CAu
Sustituyendo CPd:
0.590 = (5.64 x 102 M-1) (0.533 (2.96 x 103 M-1 CAu)) + (1.45 x 104 M-1) CAu
3.55 x 103 M-1
0.590 = 0.0847 (4.70 x 102 M-1) CAu + (1.45 x 104 M-1) CAu

Anlisis de Muestras

CAu =

(0.590 0.0847)

= 3.60 x 10-5 M

(1.45 x 104 M-1- 4.70 x 102 M-1)

CPd = 0.533 (2.96 x 103 M-1 x 3.60 x 10-5 M)

3.55 x 103 M-1

= 1.20

x 10-4 M

Puesto que el anlisis incluye una dilucin doble, las concentraciones de Pd (II)
y Au (II) en la muestra original son:
2.40 x 10-4 M y 7.20 x 10-5 M , Respectivamente.

- Espectrofotometra ultravioleta-visible

Un espectrofotmetro es un instrumento que descompone un haz de luz (haz de radiacin

electromagntico), separndolo en bandas de longitudes de onda especficas, formando
un espectro atravesado por numerosas lneas oscuras y claras, semejante a un cdigo de
barras del objeto, con el propsito de identificar, calificar y cuantificar su energa. UvVisible e IR

Componentes de un espectrofotmetro

a)
1

b)
2

FUENTE DE RADIACIN o LMPARA

SISTEMA PTICO

a) Sistema para dirigir la radiacin

b) Sistema de aislamiento de la longitud de onda

RECIPIENTE PARA LA MUESTRA (GENERALMENTE LQUIDA)

SISTEMA DE DETECCIN (TRANSDUCTOR DE LA RADIACIN)

Fuentes Radiantes Comunes

Fuentes de Radiacin

Continuas

Lineales

Caractersticas
Haz de radiacin con adecuada potencia (intensa)
Voltaje de salida estable, durante periodos de tiempo razonables

Fuentes de Radiacin
Fuentes de radiacin (lmparas)

Requisitos:
Intensidad de radiacin elevada
Emitir en un amplio rango de (emisin continua)

Intensidad constante con el tiempo.

Dependen de la regin del espectro

Fuentes de Radiacin
Zona Ultravioleta:
Lmpara de deuterio.
Intervalo de utilidad 160-390 nm
Basada en la descarga de un gas a baja presin.

con emisin contnua de fotones desde 160-500nm.

Fuentes de Radiacin

Zona Visible:
Lmpara de Wolframio
(lmpara de inscandescencia).
Se basa en la incasdencencia, emite luz en el visible
e IR cercano desde 350-2500 nm regida por las leyes
de emisin del cuerpo negro. La radiacin emitida
depende de la temperatura.

Fuentes de Radiacin

Zona Visible y ultravioleta:

Lmpara de Arco de Xenn

(lmpara de descarga).
Se basa en la descarga entre dos electrodos en un bulbo
de cuarzo con Xe a alta presin, la excitacin de Xe
produce la emisin de luz contnua entre 250 y 600
nm.La emisin es muy intensa por lo que se utiliza en
Fluorimetra molecular.

Componentes de un espectrofotmetro

Monocromador

Colimador
Lmpara

Muestra

Colimador

detector

Sistemas ptico comunes

Sistema ptico
En Espectrofotometra VIS-UV es esencial disponer de una radiacin constituida
por un grupo limitado y contnuo de (Banda) ya que:
La ley de Beer se aplica a radiacin monocromtica.
Los anchos de banda estrechos aumentan la SENSIBILIDAD al disminuir la
seal del blanco pero no de la muestra.
Mejoran, tambin, la SELECTIVIDAD, con menos menor probabilidad de
que sustancias distintas del analito absorban.

Sistema ptico

Estn constituidos por dos componentes:

I.

Sistema para dirigir la radiacin

Se utilizan:

II.

Diafragmas, Rendijas, Lentes, Espejos,etc.

Sistema de aislamiento de .
a ) Sistemas NO DISPERSIVOS: Actan atenuando todas las excepto
la deseada.
b) Sistemas DISPERSIVOS: Dispersan la radiacin policromtica
separando espacialmente las del espectro.

Sistema ptico
a ) Sistemas NO DISPERSIVOS: FILTROS
Son lminas que al interponerse en el paso de la luz absorben parte de la radiacin
o la interfieren, permitiendo que pase nicamente la deseada.

Filtros de Absorcin
Filtros

De paso de banda
De corte

Filtros de Interferencia

Filtros de absorcin: Actan dejando pasar una banda de (Filtros de paso de

banda) o bloqueando las ms largas o ms cortas que una determinada
(Filtros de corte).
Anchura de banda efectiva = 30-50 nm.

Sistema ptico
Filtros de interferencia: Se basan en las interferencias pticas para obtener una
banda relativamente estrecha.
Anchura de banda efectiva: 5-10 nm.

Se construyen con un dielctrico transparente, CaF2 MgF2, que ocupa el espacio

entre dos pelculas metlicas semitransparentes muy delgadas, generalmente de
Ag. Todo ello colocado entre dos capas de vidrio transparente.

Sistema ptico

Los filtros de interferencia son mejores que los de absorcin:

1.

Anchos de banda efectivos menores (5-10 nm frente 40-50 en Filtros de

Absorcin).

2.

El porcentaje de transmitancia en el mximo es ms alto 70-85% del inicial,

mientras que en los filtros de absorcin es 50 %.

Sistema ptico
b ) Sistemas DISPERSIVOS: MONOCROMADORES

Dispersan la radiacin separando espacialmente las distintas ls de la luz

policromtica.

Proporcionan bandas de anchura pequea.

Varan de forma continua y en un amplio intervalo la l y al mismo tiempo aislan una

pequea banda de la luz policromatica, es decir, monocroman la radiacin.

Monocromadores de red
Monocromadores

Monocromadores de Prisma

Redes de
transmisin
Redes de
reflexin

Sistema ptico
b ) Sistemas DISPERSIVOS: MONOCROMADORES

Constan de tres componentes:

1.

Sistema dispersante: Red o prisma

2.

Lentes, colimadores y de enfoque, para dirigir la radiacin

3.

Rendijas de entrada y salida.

Monocromadores

Filtros de absorcin
o de interferencias

Rejilla de reflexin

prisma

Monocromadores

Lmpara

computadora

Detector
Celda

Selector

Componentes de un espectrofotmetro

Monocromador

Colimador
Lmpara

Muestra

Colimador

detector

Recipientes para muestras

UV: cuarzo
< 350 nm

Vis: cuarzo, vidrio,

plstico

Recipientes para muestras

Se asume que el tubo, celda o cubeta en la cual se vierte la solucin

a leer no debe desviar la trayectoria de la luz como requisito para el
cumplimiento de la ley de Beer.
Como el cuarzo aparte de ser muy transparente presenta un
comportamiento constante ante la variacin de la longitud de onda es
comn que las celdas del espectrofotmetro o colormetro sean de este
material .

Precauciones y Cuidados

Las muestras no deben tener burbujas, encontrarse turbias o con precipitados.

El volumen de la muestra en la cubeta, no debe ser excesivo para evitar que se
desborde, en caso de que sucediera, se debe limpiar con un pao limpio o papel
absorbente suave, para evitar rayarla.
La cubeta se sujeta por los lados opacos.
La cantidad a adicionar es, mximo, hasta partes de la cubeta
No se deben derramar lquidos, sobre todo solventes, cidos o lcalis; dentro del
contenedor de la cubeta, se puede daar parte del mecanismo
Se debe mantener, el espectrofotmetro, limpio y libre de humedad

Recipientes para muestras

Componentes de un espectrofotmetro

Monocromador

Colimador

Muestra

detector

Colimador

Lmpara

Un colimador es un sistema que a partir de un haz (de luz, de electrones,

etc.) divergente obtiene un "haz" paralelo. Sirve para homogeneizar las
trayectorias o rayos que, emitidos por una fuente, salen en todas direcciones
y obtiene un chorro de partculas o conjunto de rayos con las mismas
propiedades.

Detectores Comunes

Detectores
Requisitos de los detectores
Deben responder a un amplio rango de longitudes de onda
Deben dar respuesta rpida

Deben ser sensibles a bajos niveles de radiacin

Deben producir seal elctrica faclmente amplificable

Deben tener bajo nivel de ruido
La seal debe ser proporcional a la potencia radiante

Detectores
Actualmente , la forma ms utilizada de transduccin de la energa radiante en
Espectrofotometra VIS-UV es mediante un detector de fotones

Los detectores de fotones son dispositivos que transforman la energia

radiante en una seal elctrica

Entre estos detectores estn:

1.- Clula Fotovoltaica
2.- Fototubo
3.- Tubo Fotomultiplicador
4.- Fotodiodos

Detectores
1.- Clula Fotovoltaica:
La energa radiante genera una corriente en la interfase entre un semiconductor (ej.
Se, Hg-Cd-Te) y un metal (Fe o Cu).
Al incidir la radiacin, el semiconductor se vuelve conductor. Se rompen los enlaces
y se liberan electrones y huecos positivos.
Los electrones migran hacia la pelcula metlica y pasan al circuito externo para
recombinarse con los huecos que migran hacia el metal base.
Se crea una corriente cuya magnitud es proporcional al nmero de fotones que
inciden.

Detectores

Se utilizan en el VIS (350-700 nm)

No usan fuente externa de Energa
RADIACIN
ELECTROMAGNTICA

Ag SEMITRANSPARENTE

SEMICONDUCTOR
Ag
METAL BASE

+ e-

e-

e-

+ +

Metal Base

Las clulas fotovoltaicas de Si se denominan Clulas solares y se

utilizan como fuentes de potencia o bateras solares.

Detectores

2.- Fototubo:

La radiacin causa una emisin de electrones de una

superficie slida fotosensible.Basado en el efecto fotoelectrico.
Est constituido por un ctodo semicilndrico y un nodo de filamento en una
ampolla de cuarzo o vidrio donde se ha hecho el vaco.Entre los electrodos se
aplica un voltaje

El material fotosensible del ctodo(ej.xidos de metales alcalinos) emite

electrones al ser irradiado. Debido al voltaje aplicado entre los electrodos,
los electrones se dirigen al nodo, por el circuito fluye una corriente cuya
intensidad es directamente proporcional a la intensidad de la radiacin que la
provoca.

Detectores

ee-

Anodo

Catodo

e-

Se utilizan en el UV-VIS (190-700 nm)

Es ms sensible que la clula
fotovoltaica.

Detectores

3.- Tubo fotomultiplicador:

Constituido por un ctodo fotosensible (similar al fototubo) y un nodo colector
separados por una serie de electrodos positivos de MgO, GaP (entre 5-11),
llamados dnodos (cada uno a un voltaje 90 V superior al anterior) que emiten de
2 a 5 electrones cuando son golpeados con electrones de suficiente energa.

Al ser iluminado el ctodo fotosensible se emite electrones que son acelerados por
el campo elctrico e inciden sobre varias superficies liberando una cascada de
electrones secundarios, 106- 107 electrones por cada fotn incidente.

Detectores

Fotoctodo

Ventana
de cuarzo
Dnodo 1

Tienen tiempos de respuesta muy

rpidos.
Solo pueden medir radiacin de baja
potencia.

Dnodo 2

Dnodo 3
nodo

Son muy sensibles a la radiacin VIS

y UV.

Su sensibilidad viene limitada por la

corriente oscura debida a la
amplificacin.

Detectores

Detectores

4.- Fotodiodos de silicio:

La absorcin de la radiacin electromagntica aumentan la conductividad a travs
de una unin de polarizacin inversa.

La polarizacin inversa crea una capa de deplecin que reduce casi a cero la
conductividad del dispositivo. Sin embargo, cuando sobre esta zona de
deplecin incide la radiacin, se forman en ella agujeros y electrones libres que
dan lugar a un aumento de la conductividad y se crea una corriente elctrica que
es proporcional a la potencia radiante.

Detectores

electrones

huecos

Unin p/n de
polarizacin inversa

Sensibles entre 190-1100 nm.

Se pueden miniaturizar y utilizar en series lineales de fotodiodos (p.e.
1024 diodos).

Espectrofotmetros de haz simple

ESPECTROFOTOMETRO DE SIMPLE HAZ

Espectrofotmetros de haz simple

El rango espectral es entre 340 y 950 nm

El tipo de instrumento de haz sencillo es muy apropiado para medidas cuantitativas
de absorcin en una misma longitud de onda
Sin embargo, para medir la absorbancia de la muestra, debe primero medirse una
muestra de referencia por separado
Esto que puede causar inexactitud, ya que tanto la intensidad de la fuente, como la
respuesta del detector, fluctan en el transcurso del tiempo

Espectrofotmetros de doble haz

ESPECTROFOTOMETRO DE DOBLE HAZ

Espectrofotmetros de doble haz

Doble haz en el espacio

Doble haz en el tiempo

Espectrofotmetros de doble haz

Los instrumentos de doble haz tienen la ventaja de que compensan todas la

fluctuaciones de la fuente radiante
Compensan tambin las amplias variaciones de la intensidad de la fuente con la
longitud de onda.
el diseo de doble haz es muy til para el registro continuo de espectros de
absorcin

Espectrofotmetro de red de fotodiodos

Alcances

Aplicabilidad: Especies absorbentes y no absorbente con

tratamiento qumico a derivados absorbentes.

Alta sensibilidad: lmites de deteccin en 10-4 y 10-5 M.
Selectividad moderada: puede identificarse una longitud
de onda slo para el analito.
Buena exactitud: El error relativo de concentracin esta en
1 y 5%.
Facilidad y comodidad: mtodos fcil y rpidos, con
opcin a automatizacn.

Aplicaciones cuantitativas

Aplicaciones cuantitativas

Ley de Beer

25 mM

5 mM

Max
Longitud de onda (nm)

Curva de Calibracin

A = a[mg/ml] + intercepto
A=

[M] + intercepto

Adicin de Estndar
A

concentracin
Concentracin
de la muestra

S=A

Adicin de Estndar

Con el objeto de ahorrar tiempo o muestra, es posible realizar el mtodo de la

adicin estndar utilizando solamente dos volmenes de muestra, y en este
caso se har una nica adicin, de Vs ml del patrn a una de las dos muestras y
entonces:
S1 = kVxCx/Vt
S2 = KVxCx/Vt + KVsCs/Vt
Donde S1 y S2 son las seales analticas diluidas y de la muestra diluida mas
patrn aadido, respectivamente. Dividiendo la segunda ecuacin por la
primera, despus se reordena se obtiene:

Cx =

S1CsVs
(S2-S1)Vx