EVALUACIN DE UN NUEVO NANOCOMPUESTO PARA

LA DETECCIN RPIDA DE E. coli

Rodriguez, Claudio1; Lobaina, Tamara 1; Zhurbenko, Raisa 1; Alfonso, Ivonne 1; Gontijo, Svio 2; Gomes, Alinne 3; Pearanda,
Diego 3; Sinisterra, Rubn 3; Corts, Maria 2
1Centro Nacional de Biopreparados, Carretera a Beltrn Km 1 1/2, Bejucal, Mayabeque, Apartado 6048, Cuba; e-mails:
claudio@biocen.cu
2Restorative Dentistry Department, Faculty of Dentistry, Universidade Federal de Minas Gerais, Av. Antnio Carlos 6627, CEP
31270-901 Belo Horizonte, MG, Brazil; E-Mail: savio.morato@yahoo.com.br
3Chemistry Department, ICEx, Universidade Federal de Minas Gerais, Av. Antnio Carlos 6627, CEP 31270-901 Belo Horizonte,
MG, Brazil; E-Mails: sinisterra@ufmg.br
Introduccin: Nuevos mtodos para el diagnstico microbiolgico han sido diseados basados en la nanotecnologa. Pocos de
ellos han alcanzado el mercado por su elevado costo. BioCen y CNIC lograron un mtodo de obtencin de nanocompuestos
para la deteccin de bacterias y levaduras de inters clnico. Objetivo: Evaluar un nuevo compuesto nanoestructurado para la
deteccin rpida de E. coli con el empleo de hidroxiapatita y sustratos fluorognicos.
Materiales y mtodos: Se emplearon nanopartculas de hidroxiapatita (HAP-S) obtenidas en el CNIC funcionalizadas con una
composicin nutritiva y el marcador metilumbeliferil-glucuronido de BioCen (HAP-SCCL). Se determin la posible capacidad
inhibitoria del HAP-S por la prueba de difusin en Agar de Mueller Hinton. Se estudi el tiempo de la aparicin de fluorescencia a
diferentes concentraciones y volmenes de inculo, antes y despus de una previa hidratacin y se compar la aparicin de la
fluorescencia utilizando un mtodo visual con respecto al espectrofluoromtrico.

Figura 1. Imgenes de Microscopa de Barrido

Agregados de nanopartculas de
HAP-S,
Nanocompuesto HAP-S/CCL.

(A)
(B)

Figura 2. Efecto antimicrobiano de las nanopartculas (HAP-S) a

diferentes concentraciones (en el sentido de las manecillas del
reloj): 0.05 (1); 0.5 (2); 1 (3);
5 (4); 10 (5); 15 (6) and 20 (7) % m/v
frente a: E. coli (ATCC 25922), P. aeruginosa (ATCC 27853), E.
faecalis (ATCC 29212) and S. aureus (ATCC 25923). Crculos
centrados superiores (c) muestran los halos de inhibicin frente a
gentamicina,
amikacina,
sulfamethoxazole-trimethoprim
y
chloranfenicol respectivamente como controles positivos.

Figura 3. Influencia de diferentes nanocompuestos

(HAP-S/CCL y HAP-S/MUG) y de volmenes de
inculos (0.2 and 0.4 ml) sobre el tiempo de deteccin
de la fluorescencia. NF: no se observa fluorescencia
despus de 24 h de incubacin.

Figura 4. Hidratacin de HAP-S/CCL. Influencia del volumen de agua

adicionada (0.1 y 0.2 ml), tiempo de hidratacin (1 y 2 h) y volumen
de inculo (0.1 y 0.2 ml) sobre el tiempo de deteccin de la
fluorescencia.

Figura 5. Influencia del volumen de inculo de E. coli

(0.1; 0.2 y 0.3 ml) y de la concentracin (3 x 106 y 3 x
108 UFC/ml) en el tiempo de deteccin de la
fluorescencia.

Figura 6. Deteccin espectrofotomtrica y visual de las seales

fluorescentes de 1 a 6 h de incubacin. (a): Imgenes de deteccin
espectrofotomtrica de la fluorescencia en microplacas.
(b): Imgenes de la deteccin visual en tubos.

Resultados y discusin: Se demostr que HAP-S no ejerce efecto inhibitorio sobre las bacterias. Se pudo detectar la presencia
de E. coli en un volumen de 0,4 ml a una concentracin de 3 x 108 UFC/mL en un periodo de 1:30 h en tan solo 0,1 g del
nanocompuesto. La previa hidratacin del nanocompuesto antes de la inoculacin y la deteccin de la intensidad de la
fluorescencia por el espectrofluormetro permitieron la deteccin de E. coli en 1 h.
Conclusiones: El nuevo nanocompuesto es capaz de detectar E. coli en tiempo reducido y presenta como otras ventajas la
simplicidad del procedimiento y su factibilidad econmica.