Practica No.

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Cromatografa

Laboratorio de qumica orgnica 1

Monserrath
Yareth
Daniel
Jacqueline
Octubre 2014

Objetivos

Conocer la tcnica de cromatografa y los factores experimentales que

la afectan
Aplicar y comparar los mtodos cromatogrficos de capa fina y
columna, para separar, identificar y purificar compuestos orgnicos.
Observar el efecto de diferentes fases mviles y estacionarias en la
separacin.
Determinar los valores de Rf, como un parmetro en la identificacin de
los compuestos separados.

Fundamentos de la Cromatografa

Segn la IUPAC La cromatografa

es
un
mtodo,
usado
principalmente para la separacin
de los componentes de una
muestra,
en
la
que
los
componentes se distribuyen en dos
fases, una de las cuales es
estacionaria, mientras la otra es
mvil.

Fundamentos de la Cromatografa

En 1903 el qumico ruso Tswett uso por

primera vez la cromatografa para
separar mediante ella extractos vegetales
coloreados.

En que se basa?

En la separacin de una mezcla de solutos, basado en la diferente

velocidad con que se mueve cada soluto a travs de un medio
poroso, tomando en cuenta la polaridad de las sustancias a usar
en la cromatografa.

Consiste en el reparto diferencial de dos o mas compuestos

(llamados solutos) entre dos fases, una de las cuales permanece
fija ( fase estacionaria o adsorbente) y la otra que fluye a travs de
ella (fase mvil o eluyente).

Fundamentos de la Cromatografa

La estructura qumica del soluto y su

peso molecular definen que tipo de
tcnica de separacin cromatogrfica se
deber utilizar.
El punto de ebullicin determina el
estado fsico de la sustancia, o sea, si
esta es o no es voltil a temperatura
ambiente o superior.
Polaridad una sustancia podr ser
soluble en disolventes polares o no
polares.

Fundamentos de la Cromatografa
Fase mvil: fluido que se filtra a
travs o a lo largo del lecho
estacionario, en una direccin
definida.
Fase estacionaria: es la sustancia que
est fija en una posicin en el
procedimiento de la cromatografa. Un
ejemplo es la capa de silica en la
cromatografa en capa fina.

Diferencia de velocidad
Es la caracterstica de la cromatografa que permite buena
observacin de la separacin del soluto, y depende
principalmente de la capacidad adsortiva del adsorbente, de
la concentracin del soluto y de la velocidad con que fluyen la
solucin y el disolvente
Transicin muy rpida= malo
Transicin muy lenta= malo
Se requiere una transicin media. s

Tipos de Cromatografa

De acuerdo con la naturaleza de ambas fases se pueden distinguir los

diferentes tipos de separaciones cromatogrficas
Estacionaria
Fases
Solida
Gaseosa
Liquida
Mvil

Liquida

Cromatografa
Gas-solido (CGS)
Cromatografa
adsorcin
columna
cromatografa
capa fina (TLC)

Cromatografa
Gas-liquido (CGL)

de Cromatografa liquidoen liquido o de particin

y
en

Particin

Fundamentos de la
Cromatografa

Fenmeno de reparto entre las dos fases debido a su

solubilidad. La solubilidad es una medida de la polaridad y
de otro tipo de interacciones moleculares.

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Coeficientes de Reparto

si consideramos una sustancia que es capaz de disolverse en dos

solventes que no se pueden mezclar entre s, la relacin entre las
concentraciones de esta sustancia en los distintos solventes es el
llamado coeficiente de reparto. Este coeficiente es constante para una
determinada temperatura, y puede representarse con la siguiente
frmula:

C1 la concentracin de la sustancia en el primer solvente y C2 la

concentracin en el segundo solvente.

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Adsorcin
- La adsorcin es un fenmeno de adhesin superficial cuyo mecanismo
consiste en interacciones dipolares.. El termino superficie incluye tanto
las superficies geomtricas externas como la superficie interna de los
capilares, las grietas y los intersticios.

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Adsorbentes con sus disolventes

recomendados
Sustancias
Adsorbente
Disolvente
Resinas para intercambio de
iones

Agua: soluciones de sales

Resinas para intercambio de

iones
cido silicilico hidratado
Talco o cido silicilico

Agua
Alcohol butilico ms agua
benceno

Azcares

Bauxita
Papel de filtro

Agua
Agua

Aminocidos

Almidn
Resinas para intercambio de
iones
Dixido de titanio
Almina

Agua

Iones inorgnicos

cidos orgnicos

Agua
Agua
Agua

Alcaloides

Resinas para intercambio de

iones
Almina

Agua
Agua

Clorofilas

Sacarosa

ter de petroleo ms alcoholes

Xantosa

Sacarosa

ter de petroleo ms alcoholes

Alcoholes
alifticos y
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esteroides

Almina

ter de petroleo ms benceno

Intercambio inico
Fenmeno superficial
debido a las interacciones
entre iones de diferente
carga.

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Ultrafiltracin
Tcnica de separacin
consiste en el uso de
filtros que tienen unos
poros muy finos.

Fundamentos de la Cromatografa

Polaridad: es una propiedad de las

molculas que representa la separacin
de las cargas elctricas en la misma. Esta
propiedad est ntimamente relacionada
con otras propiedades como la

Solubilidad es una medida de la

capacidad de disolverse de una
determinada sustancia (soluto) en un
determinado medio (solvente). En la
solubilidad, el carcter polar o no polar de
la sustancia influye mucho, ya que, debido
a este carcter, la sustancia ser ms o
menos soluble.

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16

Conceptos

Cromatograma: grafico que representa la respuesta del detector en

funcin del tiempo de elucin.

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Cromatografa en columna

Es una tcnica de purificacin, puesto

que permite aislar los compuestos
deseados de una mezcla.

Se emplea para la separacin de

mezclas y purificacin de sustancias.

Como fase estacionaria (adsorbente) se

utiliza, slice o almina contenida en
una columna.

El tamao de la columna esta

determinado por la cantidad de mezcla
a separar.
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La relacin de masa de muestra /masa de adsorbente es de

1:100 a 1:500.

La velocidad a la cual el eluyente fluye a travs de la columna

se denomina velocidad de elusin y es importante en la
efectividad de la separacin.

El tiempo que la mezcla a separar permanece en la columna

es directamente proporcional a la magnitud del equilibrio entre
las fases estacionaria y mvil.

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Aplicacin
Permite separar mayor cantidad
de muestra.
Se pueden realizar cambios
secuenciales de la polaridad del
disolvente de elusin, lo que
mejora la eficiencia de la
separacin.
Hay un desplazamiento ilimitado
del frente del disolvente.
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Licopenos

Los compuestos que tienen enlaces dobles y sencillos alternados son

llamados compuestos conjugados. Los compuestos conjugados de varias
clases son comunes en la naturaleza, y varios de los pigmentos
responsables de los colores brillantes de las frutas y las flores tienen
numerosos enlaces dobles y sencillos alternados; por ejemplo el licopeno, el
pigmento rojo que se encuentra en los jitomates y del que se piensa protege
contra el cncer de prstata, es un polieno conjugado.
El licopeno es uno de los primeros carotenoides que aparecen en la sntesis
de este tipo de compuestos, constituyendo la base molecular para la sntesis
de los restantes carotenoides. El licopeno es un carotenoide de estructura
sencilla con una cadena aliftica formada por cuarenta tomos de carbono.
El licopeno es un carotenoide altamente lipoflico que se caracteriza por
carecer de anillos cclicos y poseer un gran nmero de dobles
enlaces conjugados.
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Carotenoides

Los carotenoides son pigmentos naturales que se

caracterizan por tener uniones cola con cola de dos
unidades C20 y tienen un sistema conjugado extendido de
enlaces dobles. Los carotenoides mas familiares son el
licopeno y el B- caroteno, pigmentos que se encuentran
en numerosas plantas, y que se aslan con facilidad de los
tomates maduros y zanahorias, respectivamente.
Los carotenoides son el grupo ms representativo de
los tetraterpenos, compuestos que se caracterizan por
una estructura con 40 tomos de carbono.
Los terpenos o isoprenoides son una vasta y diversa
clase de compuestos orgnicos derivados del isopreno (o
2-metil-1,3-butadieno),
un
hidrocarburo de
5 tomos de carbono. Dos isoprenos forman un terpeno.

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Al ser ingerido el beta caroteno natural es transformado en

vitamina A en la mucosa del intestino delgado, y esta es
almacenada principalmente en el hgado en forma de
esteres de retinol. El beta caroteno tambin puede ser
absorbido y almacenado en el tejido graso sin ser
modificado, produciendo una coloracin ligeramente
amarilla o anaranjada en las palmas de las manos y las
plantas de los pies, causando pseudoictericia.

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Reactivos

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Silica gel
Propiedades
Su gran porosidad, que le otorga
alrededor de 800 m/g de
superficie especfica, le convierte
en un absorbente de agua.
Este gel no es txico, inflamable
ni qumicamente reactivo.

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Superficie

Hexano
C6H14
Densidad: 0.66 g/ml (a
20C)
PM: 86.17 g/mol
Punto de fusin: -95.6C
Punto de ebullicin: 69C
Solubilidad
en
agua:
6.1mg/L

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Acetato de etilo
CH3COOCH2-CH3
Estado de agregacin:
liquido incoloro, de olor
caracterstico.
Densidad: 900 kg/m3
PM: 88.11 g/mol
Punto de fusin: -84C
Punto de ebullicin: 77C
Solubilidad en agua: 8.7%
a 20 C
Riesgos:
Altamente inflamable.

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Metanol
CH3-OH
Estado de agregacin:
Liquido, incoloro.
Densidad: 791.8 kg/m3
PM: 32.04 g/mol
Punto de fusin: -97C
Punto de ebullicin: 65C
Solubilidad
en
agua:
totalmente miscible
Riesgos:

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OH

Naranja de metilo

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Azul de metileno

30

Pasos a seguir en una cromatografa

en columna

31

Acetato de Etilo:
Metanol (1:1)

32

33

Cromatografa en placa fina

Es una tcnica analtica y tiene como objetivo

el anlisis de una mezcla de componentes.
La fase estacionaria se deposita, formando
una capa delgada, sobre un material de
soporte tal como placas de vidrio o aluminio.
La fase mvil asciende por capilaridad a travs
de una capa delgada de adsorbente adherida
a un soporte.
Los adsorbentes empleados incluyen: slica
gel, almina, hidrxido de almina, hidrxido
de calcio, carbonato de calcio, conteniendo
algn material que permita que la fase
estacionaria se mantenga sobre el soporte.

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Aplicacin
Separar los componentes de una mezcla
Determinar el grado de pureza de un compuesto
Comparar la composicin de diferentes muestras

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Pasos a seguir en una cromatografa

en placa fina

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37

Parmetros para cromatografa en

capa Fina
Frente del disolvente (fd)
Centro del soluto (fs)

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Determinacin del Rf
Una vez que se hayan localizado los materiales
orgnicos sobre la placa debe medirse la
distancia desde la posicin que ocupan hasta
el origen ( punto donde se colocaron sobre la
placa).
El mtodo usual para determinar el movimiento
relativo de un compuesto esta dado por la
formula:
Relacin de frentes (Rf)= distancia recorrida
por el problema desde el origen/ distancia
recorrida por el frente de disolvente desde el
origen.
El valor de Rf que se obtiene depende del
disolvente empleado, del espesor y tipo del
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absorbente.

Bibliografa

Kirk, Raymond E. Enciclopedia de Tecnologa Qumica. Vol 6. 1a Edicin. Editorial:

Hispano-Americana pg. 310
* Whitesell, James K. Organic Chemistry. 1997 2 edicin. Editorial: Bartlett. Pg. 158-165
*Bloch, Daniel R. Organic Chemistry DeMystified. 2a Edicin. 2012 Editorial: Mc Graw
Hill. Pg. 226- 231.
* De Galiana Mingot, Toms. Pequeo Larousse de Ciencias Tcnicas. Editorial Larousse.
Pg. 9

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