Universidad Nacional Autnoma de Mxico

Facultad de Estudios Superiores Iztacala

Mdulo: Instrumentacin
Protocolo del artculo original:

Capacidad inmunomoduladora de cepas

potencialmente probiticas de
Lactobacillus aisladas de leche materna y
heces del lactante.
Equipo 5:
Cortez Vega Ruby Guadalupe
Hernndez Regino Laura Monserrat
Jaimes Soto Mnica Andrea
Jimnez Garca Mara Guadalupe
Lpez Salazar Dafne Andrea
Tenorio Snchez Carolina

INTRODUCCIN.
Sistema Inmunolgico: es el conjunto de rganos
y tejidos formados de clulas que tiene como
misin fundamental proteger la identidad del
individuo mediante: reconocimiento y defensa.

Probiticos:

suplementos
alimenticios
que
contienen microorganismos vivos que mejoran el
equilibrio microbiano en el intestino de los seres
humanos.

 Microbiota intestinal: Bacterias benficas

que habitan en el intestino.

Prebiticos: Ingredientes de los alimentos

no digeribles que producen efectos
beneficiosos sobre el husped (crecimiento
actividad de un tipo de un nmero
limitado de bacterias del colon)

Problema
Cul es la capacidad
inmunomoduladora de cepas
probiticas de Lactobacillus
paracasei (66 y 71) y de L.
rhamnosus en las especies
murinas?

HIPTESIS
La administracin de la cepa L.
paracasei (66 y 71) y la cepa L.
rhamnosus (75) estimular la
produccin de citoquinas (IFN-y e
IL-10) ayudando la homeostasis
intestinal, y por consiguiente
favorecer el sistema inmune.

OBJETIVO GENERAL
Evaluar la capacidad inmunoreguladora
de dos cepas de la L. paracasei (66 y 71)
y una de L.rhamnosus (75) aisladas de la
leche materna y heces del lactante, en
Mrida Venezuela, caracterizadas como
potenciales probiticos.

OBJETIVOS
PARTICULARES

Evaluar las concentraciones de

citoquinas posteriores a la
administracin de cepas en especies
murinas.
Constatar la presencia de
inflamacin en el intestino delgado
mediante el anlisis de cortes
histolgicos.

DISEO
ESTADSTICO

Los datos obtenidos son procesados con el

programa SPSS para Windows (versin 15.0);
Anlisis de la varianza (ANOVA) de una va
Test post hoc de Tukey
Establecer significativas

Qu es?

Resultados son representados

grficamente en histogramas

Explican la concentracin de IFN-y y de IL10 en fluido intestinal de ratones

Administracin por 7 das

1. Lactobacilos
2. Diferencia significativa p<0,05

Estandarizacin y elaboracin de los

inculos bacterianos para la alimentacin
de los ratones.
24 horas en
caldo Man
Rogosa Sharpe

Lactobacillus
paracasei
ssp.
paracasei

Lactobacillus
paracasei
ssp.
paracasei

Cepa de L.
rhamnosus

Cepa de L.
rhamnosus

Diluciones
seriadas.

Agua
peptonada

Inculo
bacteriano
en
concentraci
n mxima
de 10
UFC/mL

Cultivo en
placas de
agar
Incubacin
durante 24
horas a 37C

Contaje y
estandarizacin del
inculo bacteriano

Incubacin durante
24 horas a 37C

Descartar
sobrenadante

Centrifugado a 4000
rpm /10 min

Re suspensin del
sedimento en 5mL de
leche descremada al
10%

Conservacin
bajo
refrigeracin

Animales de experimentacin y periodos

de administracin.
Ratones BALB
machos sanos
de 6 semanas
de vida,
provistos por
el bioterio
CERELA
3
animale
s por
cepa
bacteria
na
Grupo
de
control

Bacterias
administrada
s en el agua
de bebida
durante 7
das
No se administran
bacterias a este
grupo

Determinacin de las concentraciones de

citoquinas IFN-y e IL-10 en fluido
intestinal.
lavados con
Buffer fosfato
salino (PBS)
estril
Con los fluidos
intestinales de
cada ratn se
harn pruebas de
enzimas
inmunoensayo
(ELISA)
Estuches comerciales
de ELISA para la
determinar de IFN-Y e
IL-10 en ratones
distribuidos por

El intestino
delgado de cada
se extraer
recuperando el
fluido intestinal
en tubos
Eppendorf
Determinacin
de
valores de las
citoquinas IFN-y e IL10
Primero
Grupo
de
Grupos
control
alimentados
con las
cepas de
Lactobacillus

RESULTADOS

Determinacin de las
concentraciones de citoquinas
IFN-
e IL-10 en fluido intestinal:

Figura 1. Concentracin de IFN- en fluido intestinal de

ratones, despus de la administracin durante 7 das de las
cepas de lactobacilos.
*Diferencias significativas (p<0,05).

Figura 2. Concentracin de IL-10 en fluido

intestinal de ratones, despus de la
administracin durante 7 das de las cepas
de lactobacilos.
*Diferencias significativas (p<0,05).

DISCUSIN
Los resultados de este estudio tambin coincidieron
con lo afirmado por algunos autores, de que el
principal perfil de secrecin de citoquinas a nivel
intestinal, inducido por BAL probiticas, se caracteriza
por incrementos en el IFN- y en la IL-10.
Por el contrario, en una de las tres cepas de
lactobacilos evaluadas en el presente estudio (cepa
66), no se observaron incrementos significativos en la
produccin de las citoquinas IFN- e IL-10 en el
intestino de los ratones, lo cual demuestra que no
todos los probiticos ejercen los mismos efectos, ya
que existe una gran variabilidad inmunolgica entre
especies, e incluso entre cepas pertenecientes a la
misma Especie.

CONCLUSIN
Las cepas 71 (L. paracasei ssp. paracasei)
y 75 (L.rhamnosus) tienen la capacidad
de estimular la produccin de las
citoquinas IFN- e IL-10, en ausencia de
reacciones inflamatorias, manteniendo la
homeostasis de la mucosa intestinal.
Podran ser utilizadas como adyuvantes
del sistema inmune intestinal, sin producir
efectos secundarios indeseables.

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