Celulase

Tallyta Santos Teixeira

Tecnologia de Processos
Fermentativos I
Prof. Alex Cangussu

AGOSTO/2013

Introduo
Fontes
Produo
Substratos
Inculo
Biorreatores (FSm e

FSS)
Comparao entre FSm
e FSS
Purificao
Ensaio de celulase
Concluses e

INTRODUO
1012
toneladas de biomassa
so produzidas no
planeta Terra
anualmente;

Cerca de 1,8 x

Cerca de 60%

lignocelulose;
35-50% de celulose;
20-35% de
hemicelulose;

Fonte: Santos et al 2012.

Complexo enzimtico lignocelulsico

Componentes:

Celulase
s

Celulose
Composto estrutural
essencial em:
txteis, de papel e materiais
de construo.
Principal nutriente para
animais ruminantes

Hemicelulases,
Diferentes enzimas que degradam lignina

Celulose
Cadeias lineares de -1,4-D-glicose;
Composta por longo polmero no

ramificado de glicose;
Cristais altamente insolveis.

Fonte: http://comendonaquimica.blogspot.com.br/2012_07_01_archive.html

Celulase
Componentes enzimticos principais:

- Endoglucanase;
Exoglucanases ou celobiohidrolases;
-glicosidases ou celobiase.
Celulose

Celobiose

Fonte: Ogeda e Petri, 2010

Indstria
Alimentcia

Txtil

Aplicao
- Extrao de sucos de frutas e
vegetais,
- Tratamento de vinhos,
- Produtos de padaria.
-Biostoning
-Polimento de tecido celulsico

Papel
Limpeza
Agrobiotecnolgi
ca

- Reutilizao de papel
-Detergente para roupas
- Biocombustveis
- Suplemento da alimentao

FONTES

Fusarium solani

Microrganismos terrestres e

marinhos;
Fungos filamentosos:
Solo,
Plantas,
Ambiente marinho.
Bactrias.

Fonte: http://www.apsnet.org/publications/imageresources/Pages/phyto31.aspx

Aspergillus niger

Fonte: http://www.taxateca.com/ordeneurotiales.html

 Celulases: baixa atividade

especfica.
Pesquisas:
Isolar estirpes selvagens altamente
produtoras, Trichoderma reesei

Fonte: Nature Biotechnology, 2008

 1970 E.U.A
Primeiro programa de mutao
Trichoderma reesei QM 6a : estirpe

selvagem.
Mutante: Trichoderma reesei QM 9414;
Produziu de duas a quatro vezes mais
celulase do que o tipo selvagem
QM
Trichoderma reesei
QM 6a
6a
Trichoderma sp.et al, 1971).
(Mandels

Fonte: http://ec.asm.org/content/11/7/885/F3.expansion.html

Fonte: http://mycorant.com/trichoderma-sex-and-fuel/

 Final dos anos 80:

Engenharia Gentica e novas estirpes T.

reesei .
Mutante T. reesei Rut NG-14 ;
Mutante T. reesei Rut C30

Fonte: Castro e Pereira, 2010

PRODUO
Depende do uso;
Custos relativamente altos;
Reduo dos custos:
Produo in situ: resduo do

substrato incorporado no final

do produto;
Fermentao em estado
Slido: tecnologia alternativa.
Fonte: http://www.maisgestao.com.br/images/calcular-custo-producao.jpg

Substrato
Fonte de carbono e
nitrognio solveis

Celulase pura
ou
monocomponen
te
Celulose pura

Resduos de colheitas:

Subproduto do milho Gros de cevada Polpa de sorgo doce

Fonte: Bana Craft, 2013.

Bagao da cana

Fonte: Revista Plantar, 2013

Fonte: Gonalves, 2012

Farelo de trigo

Fonte: Nirvana, 2012

Fonte: Correio do Estado, 2011.

Serragem

Fonte: Dreamstime, 2012

Materiais lignocelulsicos

naturais;
Produtos de base a granel
com aplicao agrobiotecnolgica;
Pr-tratamento:
Fsico: moinho de bolas;
Qumico: cido ou base;
Combinado: exploso a

vapor.
Fonte: Santos et la, 2012.

Inculo
Disponibilidade de uma cultura inicial

confivel para a produo de

microrganismo;
Miclio:

- Vantagem: rpido crescimento;

Desvantagem: controle preciso;
Esporos:

Fonte: Infoescola

- Vantagem: produo longe dos silos;

Desvantagem: crescimento mais lento;
Cultura mista (T. reesei e Aspergillus spp).

Biorreatores
Condies timas para o crescimento

do fungo:
Temperatura
pH
Transferncia de O2

Fermentao Submersa
Reator agitado

mecanicamente (STR);
T. reesei so
cultivados em:
Fermentadores de at
230 m;
Meios simples e
barato ;
Materiais como soro e
vrios resduos
vegetais.

Fonte:http://www.discoverarmfield.co.uk/data/cex/images/cem.jpg

 Mutante T. reesei Rut C30:

32- 33 C ;
pH 3,5- 4,0.
Primeiro estgio (0-48h): mximo

cultivo;
Segundo estgio (48-96h):produo de
enzimas.

Fonte: Limn et al 2011

Modo de operacional mais comum:

Fermentao descontnua simples;

FPU (Filter paper unit): Unidade
internacional de papel de filtro;
Rendimento

200-400 FPU/g

Produtividad
100-400 FPU/hL
e

Fermentao descontnua alimentada:

Maior rendimento
Maior produtividade
Condies timas de
cultivo
Fermentao contnua no tem tido

sucesso para produo de celulase.

Fermentao em Estado
Slido
Tecnologia alternativa;
Mutantes de T. reesei:
Rendimento: 100-200 FPU /g ;
Produtividade: 200-800 FPU /mL.
T. Reesei Rut C30

Fonte: http://www.slideshare.net/EmeC1/celulases

Reator bsico:
Reator bandejas do tipo Koji

Fonte: Adaptado de Durand, 2003

 Reator de bandeja modificado

(PlaFractor).

Fonte: http://www.sciencephoto.com/media/211806/enlarge

Fonte: Adaptado de Suryanarayan, 2003

 Novos modelos:

Controle da
temperatura
Controle da
umidade
Controle on-line

Fermentao
Fermentao Slida
Submersa
Prefervel
Enzimas puras ou
O produto fermentado
quando
componentes
bruto pode ser usado
enzimticos especficos
diretamente.
so desejados.
Rendimento 200-400 FPU/g DM em
100-400 FPU/hL
global
substrato
Produtivida
10-20 FPU/mL
33 FPU/mL
de
Reator
STR- Stirred Tank
Reator Tipo Koji
bsico
Reactors
Custo
$ 160/m
$150/ toneladas
Rendimento mdio de Rendimento mdio de
celulase de 20 FPU/ mL produo de celulase
Estimativa do custo de
de 50 FPU/ g de
produo: $8/ 106
substrato, Estimativa
FPU
do custo de produo:
$3/ 106

PURIFICAO
Primeira etapa downstream (FSm):

separao da cultura lquida da

parte insolvel da fermentao;
Filtros rotativos a vcuo Centrfuga decantadora

Fonte: http://media-sa.viva-images.com/vivastreet_br/clad/63/7/71619394/large/1.jpg?dt=11246aa48ae159eb188c80d0a8fe6a2f

Fonte:http://www.hellopro.es/Riera_Nadeu_S_A_-8923-noprofil-1001494-10142-0-1-1-fr-societe.html

 Segunda etapa: ultrafiltrao de

lquido (sobrenadante).

Ultrafiltrao

Fonte http://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/b/b6/Ultrafiltration_Grundm%C3%BChle.jpg

 Purificao laboratorial de celulases e seus

componentes:
Cromatografia de troca inica

Fonte: Lehninger et al, 2006

omatografia de excluso
Cromatografia de afinidade
or tamanho

Fonte: Lehninger et al, 2006

ENSAIO DE CELULASE
Identificar a atividade hidroltica total em

substratos selecionados;
Mtodo mais utilizado: Ensaio da
atividade em papel filtro (FPA)
Quantifica a capacidade de hidrlise de
uma preparao enzimtica de numa
faixa do papel filtro Whatman #1 em
acares redutores.

Fonte: Wikienergia, 2009

Fonte: http://img1.mlstatic.com/papel-filtro-qualitativo-whatman-n-1_MLB-O-2778193674_062012.jpg

 Celulose: 1 mg de protena total

representa atividades de 0.54-0.57

FPU (Nieves et al 1998).
1 mg de protena celulase pura era
equivalente a aproximadamente 1
FPU.

Fonte: http://chemistry.umeche.maine.edu/CHY431/Wood12.html

Fonte: http://enzymeinchina.com.pt/product/6-3b.jpg

CONCLUSO E
PERSPECTIVAS
A celulase uma das mais importantes

enzimas industriais;
Variabilidade de aplicao na indstria;
Limitaes: alto preo;

Fonte: http://www.epama.com.br/demissoes-de-alto-custo
Fonte: http://chemistry.umeche.maine.edu/CHY431/Wood12.html

Para obter sucesso na produo de

celulase so necessrios:
1) Seleo e melhoria dos melhores
microrganismos produtores de celulase;
2) Escolha da tecnologia de fermentao;

A demanda pelo uso racional

de lignocelulose ir guiar a
produo microbiana de
celulase.

Referncias
CASTRO, A. M.; JNIOR, N. P. Produo, propriedades e aplicao de

celulases na hidrlise de resduos agroindustriais. Quim. Nova, Vol.

33, No. 1, 181-188, 2010.
DURAND, A.Bioreactor designs for solid state fermentation.

Biochemical Engineering Journal , v. 13 ,2003, p.113125

LEHNINGER,

A.L.; NELSON, D.L.; COX, M.M. Princpios

bioqumica. 4 ed. So Paulo: SARVIER, 2006, p. 102.

de

LIMN, M.C.; PAKULA, T.; SALOHEIMO, M.; PENTILLA, M.The effects of

disruption of phosphoglucose isomerase gene on carbon utilisation and

cellulase production in Trichoderma reesei Rut-C30. Microbial Cell
Factories, v.10, n. 40, p. 1-21, 2011.
SANTOS, F. A. ; QUEIRZ, J.H. de; COLODETTE, J. L.; FERNANDES, S.A.;

GUIMARES, V.M.; REZENDE, S. T. Potencial da palha de cana-deacar para produo de etanol .Quim. Nova, v. 35, n. 5, p. 10041010, 2012.
SURYANARAYAN,

S. Current industrial practice in solid state

fermentations for secondary metabolite production: the Biocon India
experience. Biochemical Engineering Journal v. 13, n. 23, March
2003, p. 189195.

SZAKACS, G.; TENGERDY, R. P.; NAGY, V. Cellulases. In: PANDEY, A.;

WEBB, C.; SOCCOL, C. R.; LARROCHE, C. Enzyme Technology. New