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IN M U N IDPRACTICA
A D N 01
MTODOS INMUNOQUMICOS
Blga Nilda Aurea Apayco Espinoza
introduccin
Los anticuerpos poseen una alta
especificidad y afinidad para un
antgeno especfico. Es la unin
especfica de un anticuerpo a un
antgeno lo que permite la deteccin
de analitos por medio de una variedad
de tcnicas de inmunoensayo.
Inm unoanlisis
A. Inmunoanlisis con reactivos no
marcados
1. Reaccin de precipitacin
. Reaccin de precipitacin en medio
lquido
a) Precipitacin en tubo
b) Floculacin
c) Turbidimetra
d) Nefelometra
bidimencional de Laurell
2.Reaccin de aglutinacin
a) Aglutinacin directa
b) Aglutinacin indirecta
c) Aglutinacin pasiva
complemento
Inmunoanlisis fluorescente
a) Microscopa inmuflorescente
b) Inmunoanlisis de fluorescencia
polarizada
c) Inmunoanlisis de fluorescencia
unida a enzimas
a) EIA homogneo
b) EIA heterogneo
c) Electroinmutransferencia o Western
blot o inmunoblotting
antgeno.
- QUIMILUMINISCENCIA
- BIOLUMINISCENCIA
precipitacin
Se forman complejos antgeno-anticuerpo
insolubles por la reaccin entre
antgenos
y
anticuerpos
solubles
(denominados
precipitinas)
aglutinacin
Agregacin o agrupacin de clulas como resultado de su
interaccin con anticuerpos especficos denominados
aglutininas (antgenos = aglutingenos, en este caso).
Existen varios tipos de aglutinacin en donde se destacan:
AGLUTINACIN ACTIVA-: anticuerpos dirigidos contra
componentes de las partculas (eritrocitos, bacterias).
- ejemplo determinacin de grupos sanguneos.
AGLUTINACIN PASIVA: los anticuerpos se dirigen contra
molculas que se han adherido intencionalmente a una
partcula que acta como medio de soporte pasivo (ltex).
Una variante es la aglutinacin pasiva reversa, en donde lo
que se detecta es el antgeno y las partculas estn
recubiertas por el anticuerpo.
monoclonales
ELISA
clnico, deteccin
viral, clasifi
cacin
de
radioinm unoanalisis
RIA: an se usan en la actualidad,
particularmente para la deteccin de
cantidades muy bajas de analitos. Sin
embargo, debido a las complicaciones
inherentes al manipuleo y desecho de los
materiales radioactivos en el laboratorio
clnico, RIA se usa con menos frecuencia
que otro tipo diferente de inmunoensayo,
denominado inmunoensayo enzimtico
(EIA).
biolum iniscencia
En bioluminiscencia, una reaccin
qumica medida por enzimas es
responsable por la excitacin, y esta
reaccin est siempre emparentada a
organismos vivos.
IN M U N O BLO T
INMUNOFLUORESCENCIA
Utiliza Ac marcados
Conjugados)
Con colorantes fluorescentes o
Fluorocromos (fluorescena
FITC
O rodamina, entre otros) como
Sistema indicador.
Cuando se aplica luz
ultravioleta
En el microscopio de
fluorescencia,
INMUNODIFUSION RADIAL
La inmunodifusin radial es una tcnica
de anlisis inmunolgico de tipo
cuantitativo. Se utiliza para detectar la
cantidad de anticuerpos IgG, IgM e IgA
que hay en el suero de un individuo. La
tcnica de inmunodifusin radial es lenta
y poco sensible ya que necesita mucha
cantidad de anticuerpos (o antgeno) para
que se formen complejos
INMUNODIFUSION EN GEL
Se enfrentan antgenos y anticuerpos
colocndolos en hoyos o pozos
circulares adyacentes hechos en la
agarosa, para que se formen lneas
de precipitacin entre ellos.
N EFELO M ETRIA
IN M U N O PRECIPITACIN
Tcnica muy precisa que tiene la
ventaja sobre el inmunoblot que no
desnaturaliza las protenas antes de
que se produzca la unin del
antgeno con el autoanticuerpo, y
permite as detectar autoanticuerpos
dirigidos contra eptopos
conformacionales.
IN M U N O ELECTRO FO RESIS
tcnica que se realiza en dos fases.
Primero se separa la mezcla de Ags por
electroforesis y posteriormente el
antgeno que se desea detectar se hace
reaccionar con un anticuerpo especfico
colocado en un pocillo lateral.. En
Inmunologa clnica, esta tcnica puede
utilizarse en la identificacin de las
protenas de mieloma.