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ESTRUCTURA BACTERIANA

Las bacterias son organismos relativamente sencillos.


Sus dimensiones son 2 m de ancho por 7-8 m de longitud en la
forma cilndrica (bacilo) y cocos de 0,5-1,5 m.
Carecen de un ncleo delimitado por una membrana aunque presentan
un nucleoide, una estructura elemental que contiene una gran molcula
circular de ADN.
El citoplasma carece de orgnulos delimitados por membranas y de las
formaciones protoplasmticas propias de las clulas eucariotas.
En el citoplasma se pueden apreciar plsmidos, pequeas molculas
circulares de ADN que coexisten con el nucleoide, contienen genes y
son comnmente usados por las bacterias en la conjugacin.
El citoplasma tambin contiene vacuolas (grnulos que contienen
sustancias de reserva) y ribosomas (utilizados en la sntesis de
protenas).

ESTRUCTURA BACTERIANA

Una membrana citoplasmtica compuesta de lpidos rodea


el citoplasma y, al igual que las clulas de las plantas, la
mayora posee una pared celular, que en este caso est
compuesta por peptidoglicano (murena).
Algunas bacterias, adems, presentan una segunda
membrana lipdica (membrana externa) rodeando a la
pared celular.
El espacio comprendido entre la membrana citoplasmtica
y la pared celular (o la membrana externa si esta existe) se
denomina espacio periplsmico.

MEMBRANA CITOPLASMATICA
Es una fina estructura que rodea completamente la clula.
La estructura general es de una bicapa lipdica, los fosfolpidos poseen tanto
unidades altamente hidrofbicas (cidos grasos) como unidades relativamente
hidroflicas (glicerol) y pueden presentarse en mltiples formas qumicas
distintas debido a la variacin en la composicin de los cidos grasos y de los
compuestos fosforilados que se unen al esqueleto del glicerol.
Dado que los fosfolpidos se agregan en soluciones acuosas, tienden a formas
bicapas de manera espontnea, los cidos grasos apuntan hacia el interior
(mantenindose en un entorno hidrofbico), mientras que las porciones
hidroflicas son las expuestas a la fase acuosa.
ULTRAESTRUCTURA BASICA DE UNA BICAPA
H2O
LIPIDICA
REGION

HIDROFILICA

ACIDOS
GRASOS
REGION
HIDROFB ICA

GLICEROL

FOSFATO
H2O

Estructuras intracelulares

La membrana citoplasmtica bacteriana tiene una


estructura similar a la de plantas y animales. Es
una bicapa lipdica compuesta fundamentalmente
de fosfolpidos en la que se insertan molculas de
protenas.
A diferencia de las membranas eucariticas,
generalmente no contiene esteroles (son
excepciones
micoplasmas
y
algunas
proteobacterias),
aunque
puede
contener
componentes similares denominados hopanoides.
.

Estructuras intracelulares
FUNCIONES DE LA MEMBRANA CITOPLASMATICA

En las bacterias realiza numerosas funciones entre las que


se incluyen las de barrera osmtica, transporte, biosntesis,
transduccin de energa, centro de replicacin de ADN y
punto de anclaje para los flagelos.
Muchas importantes reacciones bioqumicas que tienen
lugar en las clulas se producen por la existencia de
gradientes de concentracin a ambos lados de una
membrana. Este gradiente crea una diferencia potencial
anloga a la de una batera elctrica y permite a la clula,
por ejemplo, el transporte de electrones y la obtencin de
energa.
La ausencia de membranas internas en las bacterias
significa que estas reacciones tienen que producirse a travs
de la propia membrana citoplasmtica, entre el citoplasma y
el espacio periplsmico.

Estructuras extracelulares
Pared celular

Las bacterias disponen de una pared celular que rodea a su


membrana citoplasmtica.
Las paredes celulares bacterianas estn hechas de
peptidoglicano o murena.
Esta sustancia est compuesta por cadenas de polisacrido
enlazadas por pptidos inusuales que contienen aminocidos
D. Estos aminocidos no se encuentran en las protenas, por
lo que protegen a la pared de la mayora de las peptidasas.
Las paredes celulares bacterianas son distintas de las que
tienen plantas y hongos, compuestas de celulosa y quitina,
respectivamente. Son tambin distintas a las paredes
celulares de Archaea, que no contienen peptidoglicano.
La penicilina puede matar a muchas bacterias inhibiendo un
paso de la sntesis del peptidoglicano.

Estructuras extracelulares
Pared celular

Existen dos diferentes tipos de pared celular


bacteriana denominadas Gram-positiva y
Gram-negativa
Las bacterias Gram-positivas tienen una pared
celular gruesa que contiene numerosas capas de
peptidoglicano en las que se inserta cido teicoico.
Las bacterias Gram-negativas tienen una pared
relativamente fina, consistente en unas pocas
capas de peptidoglicano, rodeada por una segunda
membrana lipdica (la membrana externa) que
contiene lipopolisacridos y lipoprotenas.

Estructuras extracelulares
Pared celular

Las micoplasmas son una excepcin, pues carecen de


pared celular.

Mycobacterium, el cual, si bien se encuadra dentro de las


Gram positivas, no parece serlo desde el punto de vista
emprico, ya que su pared no retiene el tinte. Esto se debe a
que presentan una pared celular poco comn, rica en
cidos miclicos, de carcter hidrfobo y ceroso y bastante
gruesa, lo que les confiere una gran resistencia.

PARED CELULAR GRAMPOSITIVA


La pared celular de las
Grampositivas est constituida
principalmente por cadenas de
peptidoglucano,
a
menudo
unidas por puents peptdicos .
Sin embargo estas clulas
contienen tambin una gran
cantidad de cidos teicocos,
polmeros de glicerol y ribitol
unidos por grupos fosfato y
aminocidos como D-alanina o
azcares como la glucosa estn
unidos a los grupos glicerol y
ribitol.

PARED CELULAR GRAMPOSITIVA

Estructura del cido teicoco


Esta constituido por fosfato glicerol y una
cadena lateral, R.
Donde R puede representar
D-alanina, Glucosa u otras molculas.

PARED CELULAR GRAMPOSITIVA

La pared celular de las Grampositivas est constituida


principalmente por cadenas de peptidoglucano, a menudo unidas por
puents peptdicos .
Sin embargo estas clulas contienen tambin una gran cantidad de
cidos teicocos, polmeros de glicerol y ribitol unidos por grupos
fosfato y aminocidos como D-alanina o azcares como la glucosa
estn unidos a los grupos glicerol y ribitol.

PARED CELULAR GRAMNEGATIVA

A. La membrana externa
Sirve como membrana de permeabilidad selectiva que mantiene afuera
a sustancias hidrfobas y sustancias hidrfilas por encima de cierto
tamao y retiene las protenas periplsmicas. La membrana exterior es
una tpica capa doble de fosfolpidos en la cual los fosfolpidos de la
capa ms externa han sido sustituidos por molculas de LPS.

PARED CELULAR GRAMNEGATIVA

B. Porinas
Halladas en la membrana externa y con un peso molecular de 35,000,
forman los poros transmembrana o canales de difusin que permite el
pasaje de pequeas molculas hidrfilas a travs de la membrana
externa.

PARED CELULAR GRAMNEGATIVA

C. Lipoprotena
Es la protena ms abundante en las clulas Gramnegativas, su funcin
consiste en estabilizar la membrana externa y anclarla a la capa de
peptidoglucano.

PARED CELULAR GRAMNEGATIVA

D. LPS
Conocido como lpido A, consiste en unidades
del disacrido de glucosamina fosforilada que
tiene unidos varios cidos grasos de cadena
larga. Es termoestable, letalmente txico,
pirognico.

PARED CELULAR GRAMNEGATIVA

E. Protoplasto y Esferoplasto
La capa de glucopptidos de la pared celular puede eliminarse
mediante hidrlisis con lisozimas, pero es estabilizada en soluciones
hipertnicas de sacarosa.
- Protoplasto, cuando se libera un cuerpo esfrico sin pared
osmticamente sensible, Grampositivas.
- Esferoplasto, cuando hay retencin de la cubierta celular se
denomina esferoplasto (Gramnegativas).

PARED CELULAR GRAMNEGATIVA

F. Periplasma o espacio periplsmico


Ees el espacio que aparece entre la membrana plasmtica y la
membrana externa, se observa fcilmente en (Gramnegativas), con
dificultad en Grampositivas., debido a las altas presiones osmticas
internas de las bacterias Grampositivas 8 - 20 atm en comparacin con
la Gramnegativas 3 a 5 atm.

PARED CELULAR GRAMNEGATIVA

G. Componentes de la membrana,
La membrana estn compuestas aproximadamente por 60 - 70% de
protenas, 30 - 40% de lpidos y pequeas cantidades de hidratos de
carbono. Los constituyente principales son las fosfatidiletanolaminas
75%, fosfatidilglicerol 20% y glucolpidos. La colina, esfingolpidos,
cidos grasos poliinsaturados y esteroides son raros.

DIFERENCIAS ENTRE GRAMPOSITIVAS Y


GRAMNEGATIVAS
GRAMPOSITIVAS
Produccin
de
polisacridos
conocidos
como
cidos teicocos, una
capa de la pared
celular relativamente
gruesa, contigua y
que
recubre
la
membrana
plasmtica.
GRAMNEGATIVAS
Presentan 3 capas de envoltura distintas, dispuestas de manera laxa, estas
incluyen la membrana externa (ME), convoluta, arrugada con surcos u
ondulante, que contiene el antgeno O somtico conocido como
lipopolisacrido LPS, una capa densa intermedia, y la membrana
plasmtica interna. Un espesor de 0.0075 um.

DIFERENCIAS DE LA PARED CELULAR DE


GRAMPOSITIVAS, GRAMNEGATIVAS Y
MICOPLASMA

Grampositiva

Gramnegativa

Micoplasma

PARED CELULAR
La pared celular encontrada en todas las bacterias con excepcin de los micoplasmas,
protege a la clula de los medios de baja presin osmtica y mantiene la forma. La
pared celular esta compuesta por un glucopptido nico para las bacterias.
El espesor oscila generalmente entre 0.150 um y 0.500 um de espesor, pudiendo
incluso alcanzar 0.8 um (Lactobacillus). Las paredes de las clulas jvenes son ms
delgadas que las clulas de cultivo antiguo.

FUNDAMENTO DE LA
COLORACION GRAM

El cristal violeta acta como un colorante primario, que se une a la pared


celular bacteriana luego de un tratamiento con una solucin dbil de iodo
(Mordiente).
Algunas bacterias debido a su naturaleza qumica de sus paredes celulares,
poseen la capacidad de retener el cristal violeta, aun luego del tratamiento con
un decolorante orgnico, tal como una mezcla de alcohol y acetona. Tales
bacterias se denominan Grampositivas.
Las bacterias Gramnegativas debido a su mayor contenido lipdico en su pared
celular, pierden la coloracin primaria del cristal violeta cuando son tratadas
con el decolorante. El colorante secundario o de contraste utilizado es la
safranina. Las bacterias Gramnegativas que han perdido el cristal violeta,
aparecen rojas o rosadas vistas al microscopio, habiendo fijado la safranina
como contracolor a sus paredes celulares.
Las bacterias aparecen de color violeta, aunque el grado de absorcin del
colorante por los diferentes microorganismos es variable, y algunas estructuras
como las esporas absorben el colorante con dificultad son as fcilmente
diferenciables.

PROCEDIMIENTO DE LA
COLORACION GRAM

Coloque una asada de caldo nutritivo que contiene una


mezcla de bacterias Grampositivas y Gramnegativas sobre
una lmina portaobjeto limpia.
Deje secar a temperatura ambiente o pasando por la llama
suavemente para obtener la fijacin del frotis, con la finalidad
de que el material no sea arrastrado durante el proceso de
tincin.
Colocar el preparado sobre un soporte de tincin y cubrir la
superficie con solucin de cristal violeta por 1 minuto. Lavar
bien con agua de cao.
Cubrir el preparado con Iodo de Gram durante 1 minuto.
Lavar con agua.

PROCEDIMIENTO DE LA
COLORACION GRAM

Sostener el portaobjeto entre el pulgar y el ndice y baar


la superficie con unas gotas del decolorante acetonaalcohol hasta no arrastrar ms colorante violeta. Se
requiere unos 10 segundos ms o menos.

Cubrir la superficie con la safranina durante 1 minuto.


Lavar con agua de cao.
Secar al aire, a temperatura ambiente.

Observar al microscopio con lente de inmersin. (100X) y


con aceite de inmersin.

COLORACION DE
ZIEHL-NEELSEN

FUNDAMENTO DE LA COLORACION
DE ZIEHL-NEELSEN

Las micobacterias poseen una cpsula gruesa y


cerosa, y una pared celular compuesta por cidos
micolicos y cidos grasos de cadena larga resistente
a la tincin, sin embargo una vez teida, esta cpsula
resiste la decoloracin cuando es tratada con
potentes solventes orgnicos tales como el alcoholcido. Por esta razn los microorganismos que
tienen esta propiedad se llaman cidorresistentes.
A fin de que el colorante primario, la carbolfucsina,
penetre a travs de las cpsulas cerosas de los
bacilos cidorresistentes, se requiere de cierto tipo
de tratamiento fsico, se emplea calor. El fenol
parece ayudar a la penetracin del colorante a travs
de los lpidos. Se emplea el azul de metileno como
colorante de contraste.
Esta coloracin se emplea principalmente para el
diagnstico de la tuberculosis y la lepra.

REACTIVOS
1. FUCSINA FENICADA DE ZIEHL-NEELSEN
Fucsina Bsica 0.5 g
Fenol 2.5 g
Alcohol 95
5 ml.
Agua destilada csp
100 ml
2. SOLUCION DECOLORANTE ALCOHOL-ACIDO
Etanol
97 ml.
Acido clorhdrico cc.
3 ml
3. SOLUCION DE AZUL DE METILENO
Azul de metileno
0.5 g.
Agua destilada 100 ml.

PROCEDIMIENTO

Hacer

un frotis con la muestra de esputo y fijar la preparacin por

calor.
Vierta unas gotas de solucin de fucsina fenicada hasta cubrir la
preparacin.
Calentar suavemente hasta que se desprenda vapor por tres veces
consecutivas, evitando la ebullicin.
Elimine el colorante y lave la preparacin con agua corriente.
Cubrir el portaobjetos con la solucin decolorante durante 1 minuto,
hay que asegurarse que no desprenda coloracin roja; si es
necesario, se pueden aadir unas gotas ms del decolorante.
Lavar con agua con la finalidad de eliminar el exceso.
Aadir el colorante de contraste azul de metileno y se deja actuar
por un minuto.
Lavar con agua, eliminando el exceso.
Secar al aire, a temperatura ambiente.
Observar al microscopio con lente de inmersin. (100X) y con
aceite de inmersin

ULTRAESTRUCTURA
BACTERIANA
FLAGELOS
FILAMENTOS AXIALES
MICOFIBRILLAS, FIMBRIAS, Y PILIS
(PELOS SEXUALES)

FLAGELOS

FLAGELOS
Los flagelos bacterianos son largos
apndices filiformes compuestos en su
totalidad por protena, miden de 12 a 30
nm de dimetro. Son los rganos de
locomocin para las formas que lo
poseen.
Un flagelo bacteriano est hecho de una
sola clase de subunidad protenica,
denominada FLAGELINA; el flagelo
est formado por la agregacin de
subunidads que forman una estructura
cilindrica hueca.
Los flagelos pueden variar desde unos
pocos (E. coli) hasta varios cientos
(Proteus).

Partes del Flagelo


Esta compuesto de tres partes:
1. EL FILAMENTO Es
externo con respecto a la
clula y se une al gancho en la
superficie
celular.
Est
constituido
por
varias
membranas protenicas que
forman una hlice con un
centro hueco.
2. EL GANCHO Esta fijado
al cuerpo basal, que a su vez
esta anclado en la membrana
plasmtica.

Partes del Flagelo


3. CUERPO BASAL Esta
constituido de un cilindro y
dos o ms juegos de anillos
contiguos a la membrana
plasmtica, el glicopptido y
en el caso de las bacterias
Gramnegativas, la membrana
externa de la envoltura
celular.
El anillo M est integrado por
la membrana celular.
El anillo S en la capa de
peptidoglicanos.
Los anillos P y L en la
membrana externa.

DISPOSICION DE LOS FLAGELOS


Los flagelos se diferencian por su nmero y disposicin en la clula.

MONOTRICA, un solo flagelo en un extremo

LOFOTRICA, dos o ms flagelos en un polo


ANFITRICA, un flagelo en cado polo
ANFILOFOTRICA, dos o ms flagelos en uno o ambos polos
PERITRICA, flagelos sobre toda la superficie celular

volteretas

carrera

Los flagelos permiten que las bacterias encuentren medios favorables y eviten los
desfavorables. Aunque pudiera parecerlo, el movimiento no se produce al azar.
Cuando una bacteria nada hacia un nutriente o alejndose de un compuesto txico,
aumenta la duracin de las CARRERAS y disminuye la frecuencia de las
VOLTERETAS

Tincin de Flagelos
Es muy difcil observar flagelos en una preparacin teida, debido a que
se retraen muy fcilmente y se adhieren a la pared celular.
Ej: Spirillum volutans, Escherichia coli. Proteus, Pseudomona .
CONSIDERACIONES PARA REALIZAR LA TINCION
Se debe partir de cultivos jvenes, de entre 6- 12 sembrado en agar
nutritivo blando.
Debe emplearse portaobjetos nuevos, perfectamente limpios, tratados con
mezcla sulfocrmica, perfectamente aclarados con agua destilada y
secados en estufa.
Preparar una suspensin del germen en agua destilada, mezclando
suavemente hasta obtener una suspensin lechosa.
Colocar el portaobjeto ligeramente inclinado y se depositan sobre l un
par de gotas de la suspensin.
Dejar secar al aire sin aplicar calor.

METODO DE LEIFSON
Fundamento:
Los flagelos son estructuras demasiado finas para ser visible al
microscopio ptico, en presencia de cido tnico puede
evidenciarse su presencia y disposicin en las clulas, por medio
de un precipitado grueso que se deposita sobre la pared celular y
flagelos. En esta forma el dimetro aumenta de tal modo que con
la tincin de fucsina se les hace visibles al microscopio ptico.
Los flagelos se pueden teir con soluciones alcohlicas de
colorantes de anilina, que forman un precipitado al evaporarse el
alcohol en el proceso de tincin. La fucsina bsica es el colorante
primario y el cido tnico aadido a la solucin acta como un
mordiente.
Se puede usar un contracolor como el azul de metileno, para
visualizar mejor la bacteria en los casos en que el colorante
primario es dbil o no reacciona del todo con la pared celular
bacteriana.

METODO DE LEIFSON
Reactivos:
Colorante de Leifson (Fucsina bsica, alcohol
Acido tnico, cloruro de sodio)
Solucin acuosa de sulfato de cobre 2%.
Tcnica:
Se cubre la preparacin con el colorante de
Leifson
Se deja actuar por unos 10 a 15 minutos, hasta
que el
alcohol se evapore.
Se lava con agua, sin volcar el colorante.
Se seca a temperatura ambiente. Observar a
100X.
Observacin
Los flagelos se observan de color rojo oscuro
a azul negruzco.

METODO DE RHODES
Reactivos:
Mordiente de Rhodes (contiene una solucin
acuosa de tanino, alumbre potsico, aceite de
anilina y cloruro frrico).
Nitrato de plata amoniacal.
Tcnica:
Se cubre la preparacin con el mordiente de
Rhodes durante 3 a 5 minutos.
Se lava cuidadosamente con agua, mejor por
inmersin.
Se cubre con la solucin de nitrato de plata
amoniacal, calentndolo hasta casi ebullicin y
dejndolo actuar por 3 a 5 minutos.
Se lava con agua destilada.
Se seca a temperatura ambiente.
Observar a 100X.

Observacin
Los flagelos se observan
por el precipitado de
nitrato de plata que se ha
depositado en torno suyo.

METODO DE TRIBONDEAU
Reactivos:
Mordiente de Tribondeau.(contiene solucin alumbre
potsico y tanino).
Solucin de cristal violeta.
Tcnica:
Se fija el frotis con alcohol.
Se cubre la preparacin con la mezcla formada por 5
ml del mordiente y 0.5 ml de cristal violeta
previamente sometida a ebullicin.
Se deja actuar la mezcla unos veinte segundos.
Se lava rapidamente con agua, sin volcar previamente
el colorante para evitar que se forme una pelcula sobre
la preparacin.
Se seca a temperatura ambiente.
Observar a 100X.

Observacin
Los flagelos se
observan de color rojo
oscuro a azul negruzco

FILAMENTOS AXIALES
Las Espiroquetas, Treponemas, Leptospiras, Borrelias; son clulas con
motilidad y se mueven desplazndose por una onda helicoidal, tipo de
movimiento que le permite la penetracin en medios viscosos.
Estas bacterias producen filamentos axiales semejantes a flagelos, en torno
de los cuales se arrolla la clula.
Estos filamentos estn ubicados en el espacio periplsmico entre las
membranas interna y externa de la clula. El Treponema microdentium
produce dos filamentos por clula, el T. reiteri produce 6 a 8.

FIMBRIAS
Las fimbrias y los pili presentan una estructura similar a la de los flagelos pero
no participan en la motilidad.
Las fimbrias son bastante ms cortas que los flagelos y mucho ms numerosas.
Pero tambin son de naturaleza protica.
No todos los microorganismos poseen fimbrias y la capacidad para fabricarlas
es un rasgo hereditario.
No se conoce con certeza la funcin de las fimbrias en todos los casos, pero
parece evidente que favorecen, en algunos organismos, su fijacin a las
superficies como los tejidos animales, en el caso de algunas bacterias
patgenas, o la formacin de pelculas o la fijacin a las superficies lquidas.

PILIS

Los pili (pelos) son estructuralmente similares a las


fimbrias, pero por lo general son ms largos y solamente
existe uno o unos pocos pili sobre la superficie, en una
proporcin de 1 a 4 pili por 100 a 200 fimbrias.
Los pili pueden verse con el microscopio electrnico al
funcionar como receptores especficos para determinadas
partculas vricas, por lo que pueden observarse con
facilidad cuando estn recubiertos con virus.
Los pili son proyecciones tipo fibroso de las clulas.
Estn relacionados con la conjugacin sexual y otros
permiten la adherencia de la bacteria a las superficies
epiteliales del husped que infecta.

ENVOLTURA CELULAR
CAPSULA Y MUCUS O GLICOCALIX
MEMBRANA CITOPLASMATICA
PARED CELULAR

CAPSULA, GLICOCALIX

Muchas bacterias son capaces de acumular material en el exterior para


recubrir su superficie.
LA CAPSULA, es una estructura rgida, bien definida que rodea a la
clula y que se une firmemente a la superficie bacteriana.. Ej: Bacillus
megaterium.1
EL GLICOCALIX, es flexible y se une de forma laxa, es cuando el
polmero forma una maraa de fibras que se extiende fuera de la
clula.. Ej: Klebsiella

CAPSULA, GLICOCALIX

La formacin de estas estructuras extracelulares depende


del sistema de secrecin bacteriano.
Este sistema transfiere protenas desde el citoplasma al
periplasma o al espacio que rodea a la clula. Los sistemas
de secrecin son esenciales para la virulencia de los
patgenos

Capsula Glicocalix

Biopelicula

CAPSULAS
El material capsular pueden ser polmeros de un nico monosacrido (glucosa,
dextrano, levano) o heteropolisacridos que contienen tanto hexosas como
pentosas, ms ribitol, glicerol u otros alcoholes azcar. Los fosfatos con
frecuencia tambin estn presentes.
En Bacillus es de naturaleza polipeptdica. La cpsula es sintetizada a nivel de
la membrana celular, sus componentes son sintetizados y exportados fuera de
la clula por un sistema transportador para lpidos isoprenoides, en el cual los
componentes se unen a un material capsular
Bacteria que presentan cpsula:
Streptococus pneumoniae,
Haemophilus influenzae, Klebsiella
pneumoniae,y Neisseria meningitidis,
Cryptococcus neoformans.

FUNCIONES
Protege

a la clula de la desecacin y de materiales txicos del medio


ambiente (metales pesados y radicales libres) y promueve la concentracin
de nutrientes en la superficie de la bacteria debido a su naturaleza
polianinica.
La cpsula tambin tiene participacin en la adherencia de las bacterias a las
clulas y mucosas superficiales.
Esta adherencia permite que los microorganismos establezcan infecciones
en los huspedes adecuados y permite la formacin de biopelculas,
La cpsula ofrece resistencia a la accin bactericida del complemento y de
los anticuerpos sricos.
Estas estructuras protegen a las bacterias y evita que sean fagocitadas por
los macrfagos
Actun como antgenos y estar implicadas en el reconocimiento bacteriano

TINCION DE CAPSULA
La cpsula es una capa mucosa, ms o
menos gruesa, que envuelve la pared
celular de algunas bacterias.
Est
compuesta
de
polisacridos,
mucopolisacridos o polipptidos.
A consecuencia de su elevado contenido en
agua, se tien dbilmente por los
colorantes.
Algunas tcnicas colorean el fondo de la
preparacin, destacando sobre l las
cpsulas sin teir.
Nota:
Preparacin de los frotis: debe realizarse un
frotis espeso a partir de una suspensin de
los grmenes en suero sanguneo a 1/3 en
suero fisiolgico.

METODO DE HISS
Reactivos:
Solucin acuosa de cristal violeta 1%.
Solucin acusoa de sulfato de cobre 2%.
Tcnica:
Se fija el frotis al calor.
Se cubre la preparacin con cristal violeta y
se calienta a vapor fluente durante 1 minuto.
Se lava con sulfato de cobre.
Se seca a temperatura ambiente.
Observar a 100X.
Las cpsulas se habrn coloreado de azul
plido, las bacterias de color prpura y el
fondo de color claro.

TINTA CHINA
Reactivos:
Solucin de fucsina diluida.
Nigrosina o tinta china
Tcnica:
Se fija el frotis al calor.
Agregar la fucsina diluida durante 2 minuto.
Se lava con agua destilada
Se seca a temperatura ambiente.
Se coloca, en un extremo del portaobjeto dos gotas
de nigrosina o tinta china y se hace una extensin
por el mtodo de los dos portaobjetos.
Se seca.
Observar a 100X.
Al haber hecho la extensin con la nigrosina, el
fondo aparecer negro, las bacterias teidas de rojo
por la fucsina y la cpsula ser un halo blanco que
las envuelve.

ESTRUCTURAS
CITOPLASMATICAS
CUERPO NUCLEAR
RIBOSOMAS
POLIAMINAS Y PROTEINAS
SIMILHISTONAS
GRANULOS CITOPLASMATICOS

ENDOSPORAS BACTERIANAS

CUERPO NUCLEAR
El ADN bacteriano puede ser detectado
como nucleiodes o cuerpos de cromatina con
microscopio ptico empleando la coloracin de
Feilgen, es difcil demostrar los cuerpos de
cromatina debido a la alta concentracin de ARN.

El tratamiento previo con ribonucleasa elimina casi todo al ARN, y los cuerpos
de cromatina pueden verse.
Con microscopio electrnico se observa material nuclear como una red
irregular, delgada, fibrilar de ADN, que corre paralela al eje de la clula.
El ADN bacteriano representa un 2 a 3% del peso celular, ocupa el 10% del
volumen de la clula, esta difusin permite una rpida difusin de los
materiales solubles hacia todas las partes de la estructura nuclear.

RIBOSOMAS
Los ribosomas estn compuestos por 30% de
protenas y de 70% de ARN.
La lisis suave de la clula en crecimiento hace que
aparezcan agregados polirribosomas y membrana,
que contienen todo el mecanismo de sntesis
protica: Los polirribosomas son cadenas de
ribosoma 70S manmeros, fijados al ARN
mensajero.
El nmero de ribosomas vara con las condiciones de crecimiento: Clulas de
crecimiento rpido en medios ricos contienen muchos ms ribosomas.
SUBUNIDADES, La estabilidad de los cromosomas depende de Mg+2 , con
bajas concentraciones de Magnesio, los ribosomas 70 S, se disocian en
monmeros ribosmicos 50S y 30S.

POLIAMINAS Y PROTEINAS SIMILHISTONAS


Las poliaminas se encuentran asociadas con ribosomas y
membranas.
Las principales son: Putrescina y Espermidina, ejercen un efecto
antimutagnico, impiden la disociacin de los ribosomas 70S en sus
componentes 30S y 50S y aumentan la resistencia de los protoplastos a la
lisis osmtica.
Protenas simil Histonas se ha encontrado en pequea cantidad en
asociacin con el ADN de E. coli

GRANULOS CITOPLASMATICOS
Los grnulos identificados por
procedimientos
de
tincin
adecuados indican la acumulacin
de
reservas
de
alimentos,
incluyendo polisacridos, lpidos o
polifosfatos.
El nmero y el tipo de grnulos de
almacenamiento vara con el
medio y el estado funcional de las
clulas.

GRANULOS CITOPLASMATICOS
El glucgeno es el principal material de almacenamiento de
las bacterias entricas y constituye el 40% del peso.
Mientras que algunas especies de Bacillus y Pseudomonas
acumulan un 30% como poli--hidroxibutarato
Los polmeros de alto peso molecular (polifosfatos) como el
polihexametafosfato
conocidos
como
granulos
metacromticos o volutina se producen en especies de
Corynebacterium, Yersinia pestis y especies de Mycobacteria.
Estos grnulos de volutina se ven rojo rosceo cuando se tien
con azul de metileno.

ENDOSPORAS BACTERIANAS
Las endosporas se forman en respuesta a la falta de nutrientes
dentro de la clula bacteriana vegetativa. Estas estructuras son altamente
resistentes a los efectos destructivos del calor, sequedad, presin y muchos
agentes desinfectantes. Se requiere de 120C por 15 a 20 minutos para matar
esporas. Se cree que la resistencia al calor de las endosporas se debe al
reducido contenido de agua en el centro propiamente dicho de la espora.
Las endosporas son estructuras esfricas u ovales formadas dentro
de ciertas especies bacterianas que representan un estado latente o de reposo
en el ciclo de crecimiento de esos microorganismos.
El proceso de germinacin ocurre en tres etapas

iniciacin
activacin

excrecencia

ENDOSPORAS BACTERIANAS
La formacin de endosporas es un rasgo distintivo de la familia
Bacillaceae, que incluye al gnero aerobio, Bacillus y el gnero anaerobio
Clostridium.
Entre las bacterias con importancia clnica , las endosporas slo se
presentan en 2 gneros. Las bacterias aerobias grampositivas formadoras de
endosporas pertenecientea al gnero Bacillus y los anaerobios obligados del
gnero Clostridium.

ESPORAS
Bajo los estmulos de ciertas condiciones ambientales como el agotamiento
de nutrientes (glucosa, nitrgeno o fosfato) o la exposicin a temperaturas
o potenciales redox subptimos, el material nuclear se divide en dos
nucleoides, y uno se separa del otro por un septo membranoso.
El septo crece y el centro de la espora termina rodeado por una doble
membrana. Entre las dos membranas, una capa cortical se deposita sobre
ellas. Esta corteza consta principalmente de material peptidoglicano.
La capa cortical se endurece y acumula iones calcio debido a la actividad
quelante de una molcula singular llamada cido dipicolnico.

ESPORAS
El centro queda protegido por la alta concentracin de iones calcio que
entrecruzan fuertemente el material peptidoglicano y toda el agua
contenida en la espora es expulsada.
Varias capas de la cubierta de la espora (una sustancia de tipo queratina
que es rica en enlaces disulfuro) se depositan y la espora es liberada en
el momento en que muere y se lisa la clula madre vegetativa. Las
endoporas pueden permanecer por durante perodos prolongados.

ESPORAS
Cuando la endospora es colocada en condiciones ambientales favorables
en presencia de algn estmulo particular (presencia de una aminocido
particular, hidrato de carbono o agua) se produce su germinacin.
Bajo este estmulo las clulas son activadas, degradan la corteza de la
espora y lilberan material peptidoglicano, los iones calcio y el cido
dipicolnico. Comienza la sntesis del RNA, seguido por la sntesis de
protenas y, finalmente, la sntesis de DNA. El resultado es una nueva
clula vegetativa.

BACTERIAS

Segn su localizacin en la clula, se distinguen tres tipos de


esporas

Subterminales

Centrales

Terminales

POSICION DE LA ESPORA
El tamao, la forma y la localizacin de las esporas incipientes en clulas
en fase estacionaria de especies Clostridium y Bacillus es til para la
caracterizacin e identificacin de ciertas especies dentro de estos dos
gneros.
Las endosporas pueden ser esfricas u ovales; pueden diferir en su
localizacin dentro de la clula es decir, central, terminal o subterminal y
pueden o no hinchar la clula.
Las endosporas generalmente no se tien por el mtodo de Gram y
aparecen cuerpos refractarios, no teidos en los extendidos.

POSICION DE LA ESPORA
A. ENDOSPORAS CENTRALES
Estn situadas en el centro de la clula.
B. ENDOSPORAS SUBTERMINALES
Se encuentran prximas al extremo. Bacilos
grampositivos
sobrecoloreados
con
endosporas subterminales. Caracterstico del
Bacillus y Clostridium.
La diferencia se realiza en base a que el
Bacillus es aerobio o anaerobio facultativo y
el Clostridium es anaerobio obligado.
C. ENDOSPORAS TERMINALES
Se encuentran situadas en el extremo.
Clostridium tetani

MORFOLOGIA MICROSCOPICA Y
REACCIONES TINTORIALES
TINCION DE LAS ESPORAS
Las esporas son la forma de resistencia de las bacterias. Tienen
forma esfrica u oval. Al microscopio, las esporas sin teir se observan como
grnulos brillantes.
Se tien con verde malaquita o carbolfucsina y en suspensiones de
bacterias sin teir se observan como cuerpos refringentes intracelulares.
Ej: Clostridium

BACTERIAS
A. TINCION DE GRAM:
Las bacterias se tien de color
violeta, mientras que las esporas no se
colorean dejando espacios vacos.

B. TINCION DE WIRTZ CONKLIN


Las esporas se habrn teido de
verde y las clulas bacterias de color rojo.

BACTERIAS

C. TINCION DE MOELLER
Las esporas se habrn teido de rojo o
rosado y las bacterias azules.

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