TERAPIA GENICA Y

CELULAS MADRES

Una clula madre es una clula que tiene

capacidad de autorrenovarse mediante
divisiones mitticas o bien de continuar
la va de diferenciacin para la que est
programada y, por lo tanto, producir
clulas de uno o ms tejidos maduros,
funcionales y plenamente diferenciados
en
funcin
de
su
grado
de
multipotencialidad

Clula madre totipotente

puede crecer y formar un organismo completo, tanto los componentes
embrionarios (como por ejemplo, las tres capas embrionarias, el linaje
germinal y los tejidos que darn lugar al saco vitelino), como los
extraembrionarios (como la placenta). Es decir, pueden formar todo los
tipos celulares.
Clula madre pluripotente
no puede formar un organismo completo, pero puede formar
cualquier otro tipo de clula proveniente de los tres linajes
embrionarios (endodermo, ectodermo y mesodermo), as como
el germinal y el saco vitelino. Pueden, por tanto, formar linajes
celulares.

Clulas madre multipotentes

Son aquellas que slo pueden generar clulas de su

propia capa o linaje embrionario de origen (por ejemplo:
una clula madre mesenquimal de mdula sea, al
tener naturaleza mesodrmica, dar origen a clulas de
esa capa como miocitos, adipocitos u osteocitos, entre
otras).
Clulas madre unipotentes

Pueden formar nicamente un tipo de clula

particular.

La clula madre por

excelencia es el cigoto,
formado cuando un vulo
es fecundado por un
espermatozoide.
El cigoto es totipotente,
es decir, puede dar lugar
a todas las clulas del feto
y a la parte embrionaria
de la placenta.

Conforme el embrin se va desarrollando, sus clulas van

perdiendo esta propiedad (totipotencia) de forma progresiva,
llegando a la fase de blstula o blastocisto en la que contiene
clulas pluripotentes (clulas madre embrionarias) capaces de
diferenciarse en cualquier clula del organismo salvo las de la
parte embrionaria de la placenta. Conforme avanza el desarrollo
embrionario se forman diferentes poblaciones de clulas madre
con una potencialidad de regenerar tejidos cada vez ms
restringida y que en la edad adulta se encuentran en "nichos"
en algunos tejidos del organismo.

Clulas totipotentes

Clulas pluripotentes

EN LA ACTUALIDAD

Se rechaza la creacin de embriones humanos con

otro fin que no sea el reproductivo
En investigacin se utilizarn nicamente
embriones sobrantes de clnicas FIV
Se regula la cantidad de vulos a implantar en
estas clnicas FIV con la finalidad de evitar, en lo
posible, futuros embriones sobrantes.

APLICACIONES CLNICAS DE LAS

CLULAS MADRE
Terapia

celular:

Clonacin

teraputica:

Clonacin-

transgenizacin:

FUNCIN DE LAS CLULAS

ES:

Clulas

pluripotenciales procedentes de la Masa Celular

Interna de la blstula. Formar el embrin

Capacidad

de diferenciarse a prcticamente cualquier

tipo de tejido

No

pueden dar lugar, por s solas, a un recin nacido. Se

necesitan los tejidos extraembrinicos para el proceso
de gestacin

En

la prctica, se obtienen de embriones sobrantes de

clnicas de FIV y con ms de 5 aos de congelacin

Funcin de las clulas

AS:

Presentes en muchos tejidos adultos

Implicadas en regeneracin de tejido daado

Tienen gran plasticidad (capacidad de producir

tejidos de distinto linaje), pero
No son pluripotentes, sino MULTIPOTENTES

OTROS TIPOS DE
CLULAS MADRE

Clulas madre fetales, menos pluripotentes

que las clulas ES
Clulas de cordn
nacimiento

umbilical,

tras

el

Clulas
germinales
embrionarias,
procedentes de la lnea de produccin de
espermatozoides y vulos

JAL-CBMSO-UAM-CSIC

OBTENCIN DE CLULAS MADRE

Hacia

la semana del desarrollo

embrionario se forma la blstula, de
cuya MCI se pueden obtener las clulas
ES

Una

clula ES es capaz de originar ms

de 200 tipos celulares diferentes
JAL-CBMSO-UAM-CSIC

ALGUNOS DE LOS TEJIDOS

OBTENIDOS A PARTIR DE
Endotelial y hematopoytico:
CLULAS
ES:
Se seleccionan

por la
presencia del receptor 2 del factor de crecimiento
vascular-endotelial.

Osteoclastos

Adipocitos

Muscular: Los ES obtenidos con el mtodo de gota

colgante se pasa a cultivo con una base de tejido
gelatinoso.
Neuronal: Mediante un medio denominado medio basal
para clulas madre neuroepiteliales.
Epidrmico: Se busca la Queratina como marcador.

ALGUNOS DE LOS TEJIDOS

OBTENIDOS A PARTIR DE
CLULAS
Alternativa FETALES:
a las clulas embrionarias.

obtiene de fetos abortados de forma natural.

Se

Son

clulas con menos potencialidad que las

ES, pero estn dando resultados muy
esperanzadores

En

algunos casos se utiliza un oncogn (v-myc)

para inmortalizarlas en cultivo.

Pueden

derivarse hacia fibroblastos, clulas

neuronales, epiteliales o musculares

ALGUNOS DE LOS TEJIDOS

OBTENIDOS A PARTIR DE OTRAS
CLULAS
Del cordn MADRE:
umbilical se pueden obtener
clulas hematopoyticas que se pueden
utilizar para trasplantes autlogos

Clulas AS mantienen la viabilidad de los

tejidos sometidos a un esfuerzo constante
(piel, sangre). Estas clulas pueden
diferenciarse hacia tejido seo, cardaco,
neuronal

Dentro

de las clulas AS, las denominadas

JAL-CBMSO-UAM-CSIC
HS son las ms prometedoras

DIFERENCIACIN DE CLULAS
HS

LAS CLULAS AS SON EL GRAN

PRESENTE. NO GENERAN NINGN
RECELO TICO-LEGAL Y ESTN
PROPORCIONANDO GRANDES
LOGROS.
SIN EMBARGO TIENEN MENOS
POTENCIAL QUE LAS ES Y, ADEMS

SUS
APLICACIONES

TERAPIAS BASADAS EN CLULAS

MADRE

Se pretende conseguir:
Proliferacin

extensa de las clulas elegidas

Dirigirlas hacia el tejido necesitado
Insercin en el tejido daado
Supervivencia del inserto
Integracin con el tejido circundante
Conseguir el correcto funcionamiento
Impedir dao en el tejido receptor
Impedir la transformacin celular

TERAPIAS CELULARES CON

CLULAS ES
Diferenciacin

a
clulas
betapancreticas
productoras de insulina e implantacin en ratones
adultos.

Diferenciacin

hacia lneas neuronales productoras

de dopamina o serotonina, o para reparar lesiones
medulares en modelos animales.

Diferenciacin

piel

Produccin

hacia lneas epiteliales y creacin de

de clulas ciliadas del odo interno

TERAPIAS BASADAS EN CLULAS

DISTINTAS
A de
LAS
ES HS a tejido cardaco
Diferenciacin
clulas
humanos.
Espaa

Varias

intervenciones

realizadas

en
en

Clulas madre de mdula sea, tanto HS,

mesenquimales, as como del bulbo olfatorio estn
siendo investigadas para terapias
Clulas madre obtenidas en un diente de leche
capaz de diferenciarse a tejido neuronal, seo o
dental (Dr. S. Shi. EEUU)
Con trozos de coral como estructura base, se
intenta obtener tejidos tridimensionales

TERAPIAS BASADAS EN CLULAS

DISTINTAS A LAS ES

AS del mesencfalo capaces de producir

dopamina para tratar ratas parkinsonianas
AS de pncreas y generacin de islotes de
Langerhans productoras de insulina
HS diferenciadas a clulas epiteliales de
intestinos, piel o pulmn (ratn)
AS neuronales han
Esclerosis Mltiple

curado

ratones

con

Y ADEMS
Estudios

recientes
revelan
que
algunas clulas madre podran curar
por fusin celular en vez de por
diferenciacin
propia
(Manuel
lvarez Dolado y cols. 2003. Nature)

Varios

grupos
han
publicado
recientemente la obtencin de vulos
y espermatozoides a partir de clulas
madre embrionarias Problemas de
infertilidad masculina podran tener
solucin entre otras ventajas

CONCLUSIONES

 Las

clulas madre pueden diferenciarse a

distintos linajes celulares

ES

tienen
plasticidad

Todava
Posible

ms

potencialidad

queda mucho por controlar

tumoracin de implantes con

clulas madre

LA TERAPIA
GNICA

DEFINICION
La Terapia Gnica se define
como una tcnica teraputica
mediante la cual se inserta un
gen funcional en las clulas de
un paciente humano para
corregir un defecto gentico o
para dotar a las clulas de una
nueva funcin.

Transgn:

INTRODUCCIN DEL
TRANSGN

TRANSGEN:
Podramos definirlo como un conjunto de uno o ms genes y
secuencias reguladoras que controlan la expresin de
ste. Este transgn es el que tiene la funcin teraputica,
y es el que da la terapia gnica.
Sistemas Qumicos:

Transferencia con fosfato de calcio

Se empez a usar esta tcnica en los aos 60, pero

fue en los 70 cuando se empez a desarrollar
suficientemente para tener buenas eficacias de
transfeccin. Se basa en la precipitacin del DNA
exgeno y los iones de calcio, provocando que la
clula, mediante endocitosis, introduzca el DNA en
su interior. De calcio, provocando que la clula,
mediante endocitosis, introduzca el DNA en su

Sistemas Fsicos:

Microinyeccin
Consiste en colocar el DNA mediante una inyeccin en el
ncleo de las clulas. Al introducirlo directamente all,
evitamos la degradacin citoplasmtica y lisosomal. Se
realiza mediante un micromanipulador, microscopio
invertido que permite la visualizacin.
Electroporacin
Se introduce la construccin gnica mediante un choque
elctrico a las clulas que provoca la formacin de poros en
sus membranas , por donde entra el transgn. Est
especialmente indicado para clulas con una alta tasa de
proliferacin. Sin embargo, muchas clulas mueren al no
soportar el choque elctrico por lo que muchas veces no es la
forma ms indicada en algunos tipos celulares.

DNA desnudo

Consiste en la introduccin del DNA en una solucin salina o

srica, normalmente mediante inyeccin intramuscular, para
conseguir la expresin del transgn.
31

VECTORES GNICOS

Vectores No Virales:
Liposomas

En 1965 se descubri que los liposomas (bolsas rodeadas de una

membrana lipdica a semejanza de una clula eucariota animal) eran
capaces de hacer entrar DNA en la clula, pero hasta 1980 no se
consigui una eficacia de transfeccin adecuada. Existen dos tipos de
liposomas: liposomas catinicos y liposomas aninicos.

Liposomas

catinicos

Se encuentran cargados positivamente por lo que interaccionan con la

carga negativa del DNA. Existen muchos lpidos que se usan para
formar estos liposomas e incluso se estn probando mezclas de estos.
Son recomendables en transfecciones "in vitro".
32

 Biolstica

o Gene-gun

Consiste en el bombardeo de los tejidos con partculas de oro o

tungsteno que llevan adheridas a ellas el DNA. El bombardeo se
realiza mediante una descarga con helio como si fuera una pistola (de
all el nombre de la tcnica).

33

VECTORES GNICOS

Vectores Virales:
Retrovirus

Son virus ARN que tienen capacidad para integrar genes teraputicos
relativamente grandes (un mximo de 8 Kb). Necesitan de clulas
empaquetadoras para su obtencin. Se transfiere el DNA del virus
mediante la tcnica del fosfato de calcio a las clulas empaquetadoras.
Posteriormente se realiza una segunda transduccin en la cual
introducimos la construccin gnica de inters.

Adenovirus

Son una familia de virus ADN que causan infecciones en el tracto

respiratorio humano. Se pueden llegar a insertar en ellos hasta 7.5
Kb. de DNA exgeno. Normalmente en terapia gnica se utiliza el
serotipo 5, aunque existen hasta 42 serotipos diferentes que infectan a
humanos.
34

 Virus

adenoasociados (VAA)

Son parvovirus, contienen DNA como material gentico, y requieren

la coinfeccin con un adenovirus para multiplicarse. Son vectores que
combinan las ventajas de los retrovirales y los adenovirales. Su
capacidad de integrar DNA exgeno es pequea, slo de 5 Kb.

Herpesvirus

Son virus DNA cuyas clulas diana son las neuronas. Su complejidad
y lo poco que todava conocemos de esta familia de virus dificulta su
utilizacin.

35

TIPOS DE TERAPIA GNICA

Terapia

36

Gnica de Clulas Germinales, la

cual implica la transfeccin de un embrin, es
decir, la inyeccin de genes en cigotos. La
insercin de estos genes en el genoma del cigoto
provocar un cambio gentico en el embrin, el
cual ser transmitido a las generaciones
futuras. Este tipo de terapia gnica no ha sido
aplicada en seres humanos por cuestiones
ticas.

TIPOS DE TERAPIA
GNICA

37

Terapia Gnica de Clulas Somticas, que

busca introducir los genes a las clulas somticas, y
as eliminar las consecuencias clnicas de una
enfermedad gentica heredada o adquirida. Las
generaciones futuras no son afectadas porque el gen
insertado no pasa a ellas.
Esta tcnica se ha utilizado para el tratamiento de
cnceres o enfermedades sanguneas, hepticas o
pulmonares.

TIPOS DE TERAPIA GNICA

38

En estos casos se puede diferenciar 2 tcnicas de

introduccin de genes:
Terapia gnica in vivo: agrupa la tcnicas en
las que el material gentico se introduce
directamente en las clulas del organismo, sin
que se produzca su extraccin ni manipulacin in
vitro. Los genes teraputicos se hace llegar en
vectores adecuados a las clulas defectuosas a
corregir a travs del torrente circulatorio (por
ejemplo, por inyeccin intravenosa). La gran
ventaja de las tcnicas in vivo sobre la terapia
gnica in vitro es su mayor sencillez.

TCNICA EN VIVO
39

METODOS DE LA TERAPIA
IN VIVO:

Mtodos No Virales:

Mtodos Virales:

Retrovirus.
Adenovirus.
Virus adeno-asociados.
Herpes virus.

40

Inespecficos

DNA desnudo.

Complejo DNA-liposomas.
Especficos

Mediados por receptor.

Complejos DNA-protena.

Inmunoliposomas/liposomas destinados.

TIPOS DE TERAPIA GNICA

Terapia

41

gnica ex vivo: comprende todos

aquellos protocolos en los que las clulas a tratar
son extradas del paciente, aisladas, crecidas en
cultivo y sometidas al proceso de trans- ferencia in
vitro. Una vez que se han seleccionado las clulas
que han sido efectivamente transducidas, se
expanden en cultivo y se introducen de nuevo en el
paciente. Esta tcnica se utiliza para tratar, por
ejemplo, el sndrome de inmunodeficiencia
combinada severa producida por deficiencia de la
adenosina desaminasa, ADA, en los llamados
nios burbuja)

TCNICA EN VIVO
42

MTODOS DE LA TERAPIA
EX VIVO

Mtodos No Virales:
Qumicos: Fosfato clcico.

Fsicos:Electroporacin,Microinyeccin,Bombardeo de partculas.

Fusin: Complejos ADN-liposomas.

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Endocitosis mediada por receptor: Complejos ADN-protena,

Complejos
ADN-cpsida/
envoltura
viral
,
Inmunoliposomas/liposomas destinados.

Mtodos Virales:

Adenovirus.

Retrovirus.

Virus adeno-asociados.

Herpes virus.

COMPARACIN
44

UNA TERAPIA MUY

PROMETEDORA
Existen

45

muchas esperanzas depositadas en la

terapia gnica para la lucha contra un buen
nmero de enfermedades genticas, sin embargo
su desarrollo todava es pobre y sus logros,
escasos, as que de momento esta terapia curativa
no puede considerarse un remedio definitivo
contra todas estas enfermedades.

LIMITACIONES TICAS DE LA
TERAPIA GNICA

46

Las limitaciones ticas de la TG estn relacionadas en gran parte

con el desarrollo de la terapia de clulas germinales, la cual ha
originado grandes controversias, ya que al transmitirse los
cambios efectuados en ellas a las siguientes generaciones se afecta
el patrimonio gentico de la especie humana, y un error de juicio
y/o tecnolgico pudiera tener muy malas e imprevisibles
consecuencias. Por este motivo, este tipo de terapia ha sido
totalmente proscrita por diferentes organismos internacionales
(OMS, UNESCO y Consejo de Europa, entre otros).

PRIMER CASO

47

El 14 de septiembre de 1990, investigadores de los institutos nacionales

de salud de los E.E.U.U. realizaron el primer procedimiento aprobado de
terapia gnica en un paciente de cuatro aos, Ashanthi DeSilva, el cual
presentaba una enfermedad gentica rara denominada inmunodeficiencia
combinada severa (SCID), caracterizada por la ausencia de un sistema
inmune competente, por lo que era vulnerable a cualquier infeccin, de
tal manera que cualquier enfermedad comn en la vida infantil sera
peligrosa para su supervivencia. Ashanthi tena que estar aislado, ya que
deba evitar todo contacto con personas ajenas a su familia, mantener un
ambiente estril de su hogar, y combatir las infecciones con gran cantidad
de antibiticos.