Replicacin del ADN

El significado gentico de la replicacin es

el
de
conservar
la
informacin
gentica. La estructura del ADN en doble
hlice permite comprender como dicha
molcula puede dar lugar a copias sin
perder su conformacin

Replicacin del ADN

La estructura del DNA es una doble hlice,

formada por cadenas orientadas en
direcciones opuestas (antiparalelas). La
estructura se mantiene gracias a enlaces
de hidrgeno entre las bases nitrogenadas
que se encuentran orientadas hacia el
interior de las cadenas

Es esencial a la relacin ntima

entre estructura molecular y
funcin gentica del ADN, y por
tanto el concepto de molde.

La complementariedad de las
bases nitrogenadas permite que
la secuencia de una cadena
sencilla de DNA acte como un
molde para la formacin de una
copia complementaria de ADN
(replicacin)
o
de
mARN
(transcripcin)

Posibles modelos de replicacin

Replicacin del ADN

Semiconservativa: una cadena sirve de molde
para una nueva cadena
El experimento de M. Meselson y F. Stahl (1958)
demuestra que la replicacin es
semiconservativa
En gradiente de cloruro de cesio

Mathew Meselson

Frank Stahl

La enzima que lleva a cabo la

replicacin del ADN es la ADN
polimerasa, esta enzima tiene unos
requerimientos
especficos
para
trabajar,
que
le
imponen
1.
Slo aade nucletidos en la direccin 5 3.
restricciones:
2. Necesita para poder empezar a copiar y unir
nucletidos un molde de ADN.
3. Necesita un pequeo trocito de ARN al cual unir los
nucletidos, ya que ella no puede empezar a unir los
nucletidos sin tener una pequea cadena ya formada.
4. Utiliza nucletidos trifosfato.

Las polimerasas
conocidas
aaden
nucletidos
solamente en la
direccin 5
3

Enzimas que sintetizan (replican) el ADN

E. coli
DNA polimerasa I (rellena huecos y
repara)
DNA polimerasa II y III (funcin
principal en la sntesis)
Aade bases en ambas cadenas
en la direccin 5 3
Requiere un 3 OH final

Dadas las necesidades de esta

enzima y sabiendo que la molcula
de ADN est formada por dos
hebras antiparalelas, se plantea un
problema en la cadena de ADN que
va en la direccin 5 3, porque
aqu la enzima estara trabajando en
la
direccin
contraria,
y
sin
embargo, se observa que las dos
hebras se van replicando.

La
solucin
al
dilema
la
dio
el
descubrimiento, en 1968, por Okazaki de
unos fragmentos constituidos por unos 50
nucletidos de ARN y entre 1.000 y 2.000
nucletidos
de
ADN,
denominados
fragmentos de Okazaki. As se poda
explicar como se copia esta cadena, siendo
de forma discontinua en la direccin 5 3
y la otra cadena de forma continua.
Tambin quedaba solucionado el problema
de que la enzima necesitara una cadena de
ARN a la cual unir los nucletidos

Por qu el cebador es RNA?

El cebador es ms proclive al error,

por lo que debera eliminarse y el
RNA puede detectarse y eliminarse
fcilmente por la DNApol I

Proceso de la replicacin
- Existe una secuencia de nucletidos en el ADN llamada origen
de replicacin que acta como seal de iniciacin.
- Las cadenas de ADN estn unidas por puentes de hidrgeno,
que debemos romper para facilitar la separacin de las cadenas
para ser copiadas, esta separacin la lleva a cabo las enzimas
helicasas.
- Como el desenrollamiento de la doble hlice da lugar a
superenrollamientos en el resto de la molcula, capaces de
detener el proceso, se hace preciso la presencia de las enzimas
topoisomerasas que eliminen las tensiones en la fibra.
- A continuacin, para evitar que las dos hebras vuelvan a
reunirse y formar los puentes de hidrgeno se colocan unas
protenas llamadas SSB (Single-Strand DNA Binding proteins),

El proceso es bidireccional, es decir, hay una

helicasa trabajando en un sentido y otra trabajando
en sentido opuesto. Se forman pues las llamadas
burbujas u ojos de replicacin.

Como
ninguna
ADN-polimerasa
puede
actuar
sin
cebador,
interviene
primero
una
ARN
polimerasa (primasa) que si lo
puede hacer, sintetiza un corto
fragmento de ARN de unos 10
nucletidos denominado primer
que acta como cebador

Despus interviene la ADN polimerasa

III, que a partir de este cebador comienza
a sintetizar en direccin 5 3 una hebra
de ADN partir de nucletidos trifosfato. La
energa necesaria para el proceso es
aportada por los propios nucletidos que
pierden dos de sus fsforos. Esta nueva
hebra se sintetiza en el sentido que se
abre la horquilla de replicacin, es de
crecimiento continuo y se denomina
hebra conductora.

Sobre la otra hebra (hebra discontinua

o retardada) la ARN polimerasa
sintetiza unos 40 nucletidos de ARN en
un punto que dista unos 1.000
nucletidos de la seal de iniciacin. A
partir de ellos la ADN polimerasa III
sintetiza unos 1.000 nucletidos de ADN,
formndose un fragmento de Okazaki.
Este proceso se va repitiendo a medida
que se van separando las dos hebras
patrn.

A continuacin interviene la ADN

polimerasa I, que, primero, gracias a
su funcin exonucleasa, retira los
segmentos de ARN, y que luego,
gracias a su funcin polimerasa,
rellena los huecos con nuceltidos de
ADN

Finalmente la ADN ligasa unir los dos

extremos, tanto en la cadena continua
como los sucesivos fragmentos de Okazaki
que se van formando en la cadena
discontinua.

Cuando se observa como se produce

la replicacin se ve que la cadena
continua va ms rpida que la
discontinua, esto es debido a que
cada vez que se forma un fragmento
de Okazaki hay que realizar todo
este proceso como si se comenzara
la sntesis de nuevo, formando el
primer y el resto de pasos, sin
embargo, en la continua solo se
realizar una vez.

Replicacin del ADN

Eucariotas
5 polimerasas
y principal en replicacin
, y exonucleasas
Correccin de pruebas: actividad 3 5
exonucleotdica. Sustituye bases mal
emparejadas (10-5) por correctas (10-7);
mecanismos de reparacin adicionales la reducen hasta
10-10

Es similar a la de los procariontes, es

decir,
semiconservativa
y
bidireccional.
Existe
una
hebra
conductora que sintetiza de manera
continua y la retardada de forma
discontinua
con
fragmentos
de
Okazaki.

Sin embargo, la replicacin en eucariotas

presenta ciertas peculiaridades:

El ADN de los eucariontes est

fuertemente asociado a los octmeros
de histonas, en forma de nucleosomas,
por lo que adems de replicarse el ADN,
deben duplicarse tambin las histonas. Al
parecer, tanto los nuevos nucleosomas
como los antiguos se reparten de manera
aleatoria entre las dos nuevas hebras hijas:
en la retardada y en la conductora.

La longitud del ADN de un cromosoma

eucaritico es mucho mayor que el ADN
bacteriano, de ah que no haya un nico origen de
replicacin. Para que el proceso sea ms rpido,
existen numerosas burbujas de replicacin a
lo largo de cada cromosoma.

Por qu no hay una enzima

que polimerice en la direccin
3-> 5?
No funcionara la correccin de
errores por falta de un trifosfato que
suministre la energa de enlace
covalente azcar-fosfato.

Por tanto la adicin de

nucletidos siempre es en
direccin

53

OH

PP
OH

PP

P
P

OH

OH

P P + H2O

OH

OH

Que pasara?
Si la adicin de nucletidos
fuera en el sentido de 35
(hipottica)

OH

OH

OH

OH

3
5

P P + H2 O

Correccin de errores

OH

PP

OH

P
P
P

OH

P P + H2O

P
3

OH

OH

Adicin 53

P
P
P

OH

OH

OH

Adicin 35
(hipottica)

Replicacin del DNA (2)

Replicacin: continua (cadena adelantada,
cebador slo inicio) y discontinua (cadena
retrasada)
Discontinua
Cebador (pequeo RNA 2-60 nucletidos
aadido por enzima primasa o RNA pol
que provee 3 OH.
Fragmento de Okazaki por DNA pol III
(1500 bp en procariotas y 150 en
eucariotas)
Pol I elimina cebador 3 -> 5 y llena

Replicacin del DNA (3)

El replisoma: complejo enzimtico de la
replicacin que coordina la sntesis de las
dos cadenas, maquinaria molecular
Dmero de la DNA pol III (ncleos
catalticos)
Primosoma: formado por dos enzimas
Primasa
Helicasa (desenrolla el DNA)
Protena de unin a cadena sencilla, ssb
(Unin Y, estabiliza el DNA de cadena
sencilla)
Topoisomerasas tipo I (rotura una cadena)
y II (rotura de dos cadenas) junto a DNA
ligasa -> Relajacin del

replisoma: una maquinaria de replicacin extraordina

Topoisomerasas

Replicacin del DNA (4)

Origen de replicacin:
Secuencia reconocida (Ori C en E. coli) por
protenas iniciadoras. Varios orgenes en
eucariotas
La replicacin es bidireccional

Horquilla
replicacin

En el DNA nuclear de eucariotas hay muchos

orgenes de replicacin (~500 en levaduras y 60000
en mamferos). Cada unidad de replicacin es un
replicn. La replicacin es bidireccional

En el DNA nuclear de eucariotas hay muchos

orgenes de replicacin (~500 en levaduras y 60000
en mamferos). Cada unidad de replicacin es un
replicn. La replicacin es bidireccional