Anticuerpos irregulares clnicamente

significativos y su deteccin pre

transfusional
Dra Fabiana Bastos
Divisin Inmunohematologa
Departamento de Hemoterapia e
Inmunohematologa
Hospital de Clnicas Jos de San Martn
Universidad de Buenos Aires
cbastos@fmed.uba.ar

ANTICUERPOSc
REGULARES o ESPERADOS

=
IRREGULARES o INESPERADOS

ANTICUERPOS
IRREGULARES o INESPERADOS
Aloanticuerpos INMUNES: en respuesta
al estmulo con glbulos rojos
Transfusin
Embarazo
Trasplante

ANTICUERPOS
IRREGULARES o INESPERADOS
Aloanticuerpos ocurrencia NATURAL: en
respuesta a estmulos ambientales
Polen
Hongos
Bacterias

ORIGEN DE ANTICUERPOS
INMUNES
Antecedentes

Porcentaje individuos
sensibilizados

Femenino solo
embarazada

1 %

Femenino embarazada y
transfundida

2.8 %

Masculino y Femenino
solo transfundido

1.4%

Masculino y Femenino
sin antecedentes

0.4%

Deteccin de anticuerpos
irregulares
Juega un papel fundamental en la
medicina Transfusional
Es un proceso clave en las pruebas de
compatibilidad pre-transfusin
El objetivo de los mtodos de
deteccin es el hallazgo de los
anticuerpos irregulares o inesperados
Presentes en 0.2 - 2 % de la poblacin
general

ANTICUEPOS CLINICAMENTE
SIGNIFICAIVOS
Capaces de iniciar la destruccin acelerada
de los glbulos rojos portadores del antgeno
ISBT >300 antgenos 30 sistemas de grupo
sanguneo
Especificidades asociadas con:
EHFN
RHPT
Acortamiento de la sobrevida de los GR
transfundidos
AHAI

Destruccin de GR
alognicos transfundidos

Reaccin
hemoltica
postransfusional

Destruccin de GR
autlogos

Anemia Hemoltica
Autoinmune

Destruccin de GR
fetales

Enfermedad Hemoltica
Feto Neonatal

Dao tejidos
trasplantados

Rechazo del injerto

RHP Intravascular
Sntomas
Fiebre
Escalofros
Shock
Hipotensin
Hemoglobinemia
Hemoglobinuria
IRA
CID

RHP Intravascular
Hemlisis rpida 10 min
IgM, fija C
10% desenlace fatal

Anticuerpos implicados:
ABO
PP1PK
Vel
Lewis
Kidd

RHP Extravascular
IgG (IgG1 o IgG3)
Inmediata: durante o dentro de pocas
horas:
Ac serolgicamente detectable

Hiperbilirrubinemia
Anticuerpo implicados:
Kidd
Rh
Duffy

RHP Extravascular Tarda

Pacientes previamente inmunizados

Ac presente
Serolgicamente indetectable
Transfusin inicia respuesta
anamnsica
5-7 das postransfusin (2-23 das)
Fiebre, Hto/Hb, ictericia,
hemoglobinuria

Factores que determinan la

importancia clnica

Especificidad del anticuerpo.

La concentracin y la avidez de los anticuerpos.
Rango trmico
Clase y subclase de inmunoglobulina
Actividad del sistema mononuclear fagoctico.
Movilidad y densidad de sitios antignicos en la
membrana.
Volumen de glbulos rojos administrados.
Presencia de sustancias solubles del grupo
sanguneo

Factores que determinan la

importancia clnica
Algunas especificidades tienen un
comportamiento variable
No siempre podemos distinguir entre un Ac
clnicamente significativo y uno benigno
No contamos con informacin inequvoca
del comportamiento de algunos
especificidades poco comunes
A veces no podemos precisar la
especificidad de un Ac determinado

Importancia clnica
Clnicamente
significativos

Significativos
si reaccionan
a 37C

Significativos
algunas veces

Clnicamente
benignos

ABO

Lea

Yta

Chido/Rodgers

Rh

M, N

JMH

Kell

P1

Gya

Knops

Duffy

Lutheran

Hy

Bg

Kidd

A1

Ata

Xg

SsU

Sda

Colton

Csa

Vel

AnWj

Cromer

Yka

PP1Pk

Dombrock

McCa

H (Oh)

Indian
Jra
Lan

Suelen producir RHPT

Anticuerpos

Comentarios

ABO, H

RTHI intravascular graves

Rh(D,C,c,E,e)

RTH inmediatas y retardadas

K,k,Ku / resto

RTH inmediatas / retardadas

Fya, Fyb, Fy3

RTH inmediatas y retardadas

Jka, Jkb, Jk3

RTH inmediatas y retardadas

1/3 de RTH retardadas son por
anti-Jka

S,s,U,Mur*,Mia*,Vw,Far,Ena

RTH inmediatas y retardadas

*Frecuentes en Sudeste Asitico

Doa, Dob

RTH inmediatas y retardadas

P, PP1Pk (Tja)

RTH inmediatas graves

Raramente producen RHPT

Anticuerpos

Excepciones

A1, Lewis, P1, LKE, I

Suelen ser IgM no activos
>25C

P1, A1, Lea, Leb : RTH

Inmediatas y Retardadas

Lua, Lub

Algunas RTHR moderadas

Sistema Diego

Wra es la excepcin

Yta, Scianna, LW, Ch/Rg, Ge,

Cr, Kn, In, Er, COST, Xga,
MER2, JMH, GIL, LKE, Sda, Lan,
Ata, Jra, Emm

Yta, Tca(Cro2), Inb, Lan, Ata, Jra:

RTH grave
1 caso de RTHI por anti-JMH

Oka, GIL, PEL, MAM

No hay referencias, pero son

Habitualmente producen
EHFN
Anticuerpos

Comentarios

Rh(D), c
C, E, e, G
Ce(f), Ce, Cw, Ew, Hro, Hr, Rh29,, Goa, Rh32,
Bea, Evans, Tar, Sec, JAL, MAR-like

EHRN grave y frecuente

EHRN ocasional

K
K, Kpa, Jsa, Jsb, Ula, Ku, K22

Anemia aplsica > Anemia hemoltica

EHRN leve

ABO

EHRN poco frecuente

S,s,U
M
Ena, Mia, Vw, Mur, Hut, Hil, Mta, Mv, Far, sD, Or,
Mut, Mur

EHRN grave
EHRN excepcionalmente grave
EHRN ocasionalmente grave

Fya,Fyb

EHRN leve, grave. 1 caso por anti-Fyb

Jka, Jkb

No suelen producir EHRN. 1 caso grave

Coa, Cob

EHRN grave

Dia, Dib, Wra, ELO, Bow

Pocos casos. EHRN grave

Raramente producen EHFN

Anticuerpos

Comentarios

Anti-PP1Pk (fenotipo p)

Se asocian a abortos recurrentes 1er

trimestre.

Lua, Lub

Ags poco desarrollados en el feto.

Acs adsorbidos por la placenta.

Lea, Leb

No activos a 37C.
No se expresan en el feto.

Acs de los sistemas: Yt, Do, LW, Ch/Rg, Cr,

Kn, In
Acs: Cost, Er, Sc1, Sc2, Sc3, Xga, Oka,
MER2, JMH, GIL, Emm, AnWj, Sda, Duclos,
PEL, ABTI, HLA

No se han descrito casos de EHRN grave.

Vel

Slo formas leves.

1 caso por anti-Duclos.

IgM. Poco expresado en el feto.

Lan, Ata, Jra

Slo formas leves.

1 caso reciente grave por anti-Jra.

Anticuerpos poco comunes

Conocer la etnia del paciente
Conocer la historia clnica del
paciente
Conocer hallazgos serolgicos
previos
Conocer medios ptimos de reaccin,
temperatura, etc

Especificidades relacionadas con la

etnia
En un paciente de raza blanca, los Ac
contra Ag de alta frecuencia se dirigen
con mayor frecuencia contra: k, Kpb,
Yta, Vel, Coa y Lub.
En individuos de raza negra los
fenotipos S-s-U-Js(b-) y hrs son
exclusivos, y los fenotipos Fy(a-b-), Le(ab-), Cr(a-) y Lu(b-) son ms comunes

Especificidades relacionadas con la

etnia
El fenotipo In(b-) es exclusivo de la
raza asitica, y los fenotipos Gy(a-),
Jr(a-) y Di(a+b-) son mucho ms
frecuentes
En latinoamericanos: Di(a+b-), Ge:2,3 y
Ge:-2,-3.
En el este de Europa es ms comn
el fenotipo Gy(a-).

REACTIVOS GLOBULARES
Cada frasco contiene suspensin
globular (0.8-6%) de un individuo
Deben estar tipificados al menos
para los antgenos
D, C, E, c, e, P1, Lea, Leb, K, k, Fya,
Fyb, Jka, Jkb, M, N, S, s
Cada lote se manufactura con
donantes diferentes
Cada lote se mantiene por 45 das

TECNICA
Colocar una gota de suspensin globular
en un tubo
Colocar dos gotas de suero en estudio
Centrifugar y leer
Incubar a 37C 30 minutos
Centrifugar y leer
Lavar tres veces con solucin fisiolgica
Agregar dos gotas de suero de Coombs
Centrifugar y leer
En los negativos agregar Control Coombs

INTERPRETACION
En que fase ocurri la reaccin?
cul es el resultado del control autlogo?
Cuntas clulas reaccionan?
Reaccionan con la misma fuerza y en la
misma fase?
Hay hemlisis o campo mixto?
Estn realmente aglutinados los GR o se
debe a fenmeno de rouleaux?

INTERPRETACION
En que fase ocurri la reaccin?
IgG reacciona mejor en fase antiglobulnica.
Pueden ser aglutinantes a 37C.
IgM reacciona mejor a baja temperatura y es
capaz de aglutinar GR suspendidos en solucin
fisiolgica a temperatura ambiente.
Hay IgM que pueden reaccionar en SAGH
debido a la fijacin de complemento.

INTERPRETACION

TA

37 C

SAG

+
o
+
+
o
+

o
o
+
o
+
+

o
+
o
+
+
+

C L A S E D E Ig IN V O L U C R A D A

1)
2)
3)
4)
6)
3,

Ig M
Ig G
Ig M (a lto r a n g o t r m ic o ), (r a r a ).
Ig M q u e fija C o 5 ) Ig M + Ig G
Ig G a g lu tin a n te
4, 5, o 6

INTERPRETACION
Cul es el resultado del control autlogo?
Se realiza enfrentando el suero del paciente
con sus propios GR de la misma forma que se
enfrenta a clulas del panel celular.
Control autlogo negativo en presencia de una
deteccin de anticuerpos irregulares positiva
indica la presencia de un Aloanticuerpo.
Control autlogo positivo indica la presencia
de autoanticuerpos, anticuerpos inducidos por
drogas.

INTERPRETACION
Cul es el resultado del control autlogo?
Si el paciente ha sido recientemente
transfundido el control autlogo positivo
puede deberse a la presencia de una
aloanticuerpo unido a los GR transfundidos.
La evaluacin de muestras con control
autlogo positivo o PCD positiva resulta en un
problema complejo de resolver que necesita
de la experiencia del operador.
El control autlogo puede omitirse durante la
DAI pero debe realizarse en la identificacin.

INTERPRETACION
Cuntas clulas reaccionan? Reaccionan
con la misma fuerza y en la misma fase?
Presencia de un nico anticuerpo dirigido
contra un antgeno presente en ambas clulas
del panel:
Todas las clulas reaccionan en la misma fase y con
la misma intensidad

Presencia de mltiples anticuerpos.

Las clulas reaccionan con diferente intensidad o en
diferentes medios

Presencia de autoanticuerpos.
Autocontrol positivo

INTERPRETACION
Hay hemlisis o campo mixto?
Anti-Lea, anti-Leb, anti-Vel y anti-PP1Pk
producen hemlisis in vitro
Anti-Sda, Lua y Lub producen reacciones en
campo mixto.

INTERPRETACION
Estn realmente aglutinados los GR o se
debe a fenmeno de rouleaux?
Se observa en todas las pruebas que contengan
suero del paciente (autocontrol, inversa ABO)
Pacientes con relacin albmina-globulinas
alterada (por ej. mieloma mltiple)
Pacientes que recibieron expansores
plasmticos (por ej. Dextran)
No interfiere con la fase aniglobulnica de las
pruebas de deteccin e identificacin de
anticuerpos irregulares

EFECTO DOSIS
Fya Fyb

HETEROCIGOTA
El panel ideal tiene G.R.
con expresin homocigota
para
la mayor cantidad de Ags
posibles.
(que expresen efecto de
dosis).

Fya Fya

HOMOCIGOTA

S
A
G
F
y
a
F
y
b
++2
+

+
o
4
+
ooo

Si el resultado fuera anti-Fya

Qu antgenos del panel

celular NO expresan
EFECTO DE DOSIS con
sus respectivos
anticuerpos?
I, i, Lea, Leb,
P1

LIMITACIONES
Relacin suero-clulas
Exceso de anticuerpos
Exceso de antgenos
Puede aumentarse la relacin a 4 gotas
de suero para detectar anticuerpos
dbiles sin agregar potenciadores.

Temperatura
Tiempo de incubacin
pH

LIMITACIONES
Tiempo de incubacin
Reacciones Ag-Ac estn en equilibrio
dinmico
El rango de tiempo es entre 30-60
minutos para sistemas preparados en
solucin salina
Los medios potenciadores pueden
disminuir este tiempo a 10 minutos

LIMITACIONES
pH
Mayora de los anticuerpos reaccionan
entre 6.8 y 7.2
Hay ejemplos de anti-M que reaccionan
mejor a 6.5

METODO PARA INTERPRETAR RESULTADOS DE

IDENTIFICACION

Control antlogo
Exclusin
Inclusin
Tipificacin GR del paciente
Calculo de error

METODO PARA INTERPRETAR RESULTADOS DE

IDENTIFICACION

Exclusin
Excluir aquellas especificidades que no
son responsables de la reactividad
observada
Examinar las clulas con resultados
negativos en todas las fases
Los antgenos presentes en las clulas
que no reaccionaron no son el blanco
del anticuerpo presente en el suero
EFECTO DE DOSIS

METODO PARA INTERPRETAR RESULTADOS DE

IDENTIFICACION

Evaluar los resultados

Inclusin: evaluar los resultados
obtenidos y comparar con la clave para
cada especificidad

Tipificar GR del paciente

Debe estar ausente el antgeno hacia el
cual est dirigido el/los anticuerpos.

Calculo de error

METODO PARA INTERPRETAR

RESULTADOS DE IDENTIFICACION
Calculo de error
Tablas de 2 x 2 para calcular niveles de
probabilidad (Fisher)
REACCION DEL
SUERO

POSITIVO
NEGATIVO
TOTAL

GLBULOS ROJOS
ANTIGENO
PRESENTE

ANTIGENO
AUSENTE

3
0

0
3

TOTAL

METODO PARA INTERPRETAR

RESULTADOS DE IDENTIFICACION
Pensar en mas de una especificidad
La claveobservada NO se ajusta a la
de un slo anticuerpo
Se observan reacciones de intensidad variable,
que NO se explican por efecto de dosis.
Diferentes hemates reaccionan en distintas
fases
Al intentar confirmar la especificidad de un
nico Ac, se obtienen resultados inesperados.

lote

1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
AC

Cw

Fya

Fyb

Jka

Jkb

P1

Lea

Leb

TA

37

SAG

ENZ

3+

4+

1+

4+

METODO para interpretar los resultados

CONTROL AUTOLOGO ?
NEGATIVO

ALO ANTICUERPO

EXCLUSION
Qu Ag siguen implicados luego de la exclusin

TIPIFICACION GR PACIENTE
Ag ausente en membrana del GR

INCLUSION
La clave obtenida coincide con alguna prevista
en el panel?

CONFIRMAR PROBABILIDAD DE ERROR

lote

1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
AC

Cw

Fya

Fyb

Jka

Jkb

P1

Lea

Leb

TA

37

SAG

ENZ

3+

4+

2+

4+

2+

4+

2+

4+

2+

4+

2+

4+

2+

4+

2+

4+

2+

4+

METODO PARA INTERPRETAR RESULTADOS DE

IDENTIFICACION

NO excluidos
c
E
Lea

NO excluidos por heterocigota

M
S

METODO PARA INTERPRETAR RESULTADOS DE

IDENTIFICACION

Inclusin: la clave obtenida coincide

con alguna especificidad del panel?
c

Tipificacin GR del paciente

R1R1

TECNICA EN GEL

TECNICA EN GEL

TECNICA EN GEL

TECNICA EN GEL

TECNICA EN GEL

TECNICA EN GEL

TECNICA EN GEL

TECNICA EN GEL

TECNICA EN GEL

Aglutinacin

Gel

Muchas Gracias