Fosfatasa cida

TCNICA DE ORIENTACIN

SEMEN
El primer antecedente que se tiene de la existencia
de clulas espermticas data del siglo XVII,
cuando Luis de Hamm, tuvo la idea de coloca al
microscopio una gota de semen en la que pudo
observar a una multitud de espermatozoides.
Comunico su descubrimiento a su maestro Anton
Van Leeuwenhok, quien se encargara de
estudiarlos de una manera sistemtica.

El francs Albert Florence descubri una de las

primeras tcnicas para reconocer las huellas de
lquido seminal, a travs de un tratamiento de este
con una concentracin de yodo alcalino,
producindose cristales rmbicos.

Al descubrir los rayos ultravioleta por Kirchhoff y

Busen se observo que las manchas de semen
adquiran bajo esta radiacin una fluorescencia
azulada.
En 1953 Fishman y Lerner dan a conocer su
mtodo para estimar fosfatasa cida de origen
prosttico.

CARACTERSTICAS
El semen total es un lquido muy viscoso y opalescente,
de color blanco grisceo.
El volumen promedio normal por eyaculacin es de 2.5
a 3.5 ml.
Contiene hormonas, fructosa, fosfatasa cida y alcalina,
espermita, colina, ergotionena, cido ctrico, lpidos,
protenas, hilauronidasa, prostglandina, ribosa, inositol,
sorbitol, flavinas, aminas, albmina, alfa, gamma y beta
globulinas, lecitina, cidos grasos, fosforilcolina, zinc,
calcio y antgeno soluble de grupo sanguneo.

La fosfatasa cida esta presente tanto en vegetales

como animales; comprende un conjunto
de enzimas ampliamente repartidas en el
organismo: eritrocitos, suero, plaquetas,
leucocitos, bazo, hgado, osteoclastos y en epitelios
glandulares de prstata, mama, estmago y colon.
Se ha demostrado que en el semen la fosfatasa
cida se encuentra en concentraciones de 20 a
400 veces mas que en otros fluidos.

Por lo anterior, es necesario ajustar los reactivos

para que slo detecten concentraciones mayores a
20 unidades.
Su deteccin se basa en una reaccin cromtica de
la multicitada enzima, la cual reacciona con el
reactivo 1-naftilfosfato de calcio y queda libre de
alfa naftol; este reacciona con sulfato de
dianisiltetrazonio y forma un colorante azoico
violeta intenso.

PREPARACION DEL REACTIVO

Solucin 1:
23 g de NaCl + 2 g de Acetato de Na H2O + 0.5 ml de cido
actico glacial + 90 ml de agua destilada.
Solucin 2:
50 g de 1-naftil fosfato de calcio + 30 g de sulfato de dianisil
tetrasonio + 1 ml de solucin acuosa al 10% de laurel sulfato
de sodio.
Mezclar ambas soluciones, filtrar y envasar en frasco mbar
refrigerado a 4 C. esta solucin se conserva durante un
ao. Debido a que actualmente ya no se fabrica el sulfato

Debido a que actualmente ya no se fabrica el sulfato de

dianisiltetrazonio, se ha sustituido por:
Solucin 1:
1 g de orto dianilsidina tetrazotizada + 20 g de acetato
de sodio + 10 ml de cido actico + 100 ml de agua
destilada.
Solucin 2:
0.8 g de alfa naftil fosfato de sodio + 10 ml de agua
destilada.
Mezclar 10 ml de solucin 1, 89 ml de agua destilada y
1 ml de solucin 2. Refrigerar en frasco mbar.

PROCEDIMIENTO
Se tiene la mancha problema o el hisopo con el
cual se tom la muestra se colocan entre dos
hojas de papel filtro.
. Lo mismo se hace con material igual no
manchado para prueba en blanco y con otro que
est maculado con semen, como control.

 Se colocan sobre una lmina de vidrio en la que

previamente se habr rotulado. (1:CONTROL,
2:BLANCO).
Inmediatamente, con una pipeta, se agregan 10
gotas de reactivo a cada una de las muestras.

INTERPRETACIN DE LOS RESULTADOS

La aparicin de un color violeta intenso en la
muestra problema dentro de un tiempo no mayor
a 5 minutos, indicar la presencia de fosfatasa
cida en cantidades mayores a 20, y por lo tanto,
la muy probable presencia de semen.
En el control siempre aparecer el color sealado,
tonalidad que no debe aparecer en el blanco.