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PRODUO DE VACINAS
Aline Richter, Gabriella Ricarte e Mariana Pisani
Apontamento histrico
Sculo XVIII:
variolizao (chineses)
As tcnicas diferiam:
algodo, com p de crostas
ou pus inserido no nariz,
vestir roupas ntimas de
doentes, incrustar crostas
em arranhes, picar a pele
com agulhas contaminadas,
fazer um corte na pele e
colocar um fio de linha
infectado ou uma gota de
pus.
Apontamento histrico
Edward Jenner
(1796)
Cowpox
O mito das ordenhadoras
imunes
Imunizao de James
Phipps pelas pstulas de
uma ordenhadora que
possua cowpox.
Inoculao com o pus
varioloso.
Descoberta da vacina.
vacalizao
Apontamento histrico
Louis Pasteur
(1885)
Vacina anti-rbica
Imunizao com as
clulas da medula de
um coelho infectado.
Desenvolveu
imunizantes contra a
clera das galinhas e
o carbnculo do gado.
Emile Roux e
Alexander Yersin
(1888)
Descobriram que o
bacilo da difteria
produzia uma toxina
poderosa, responsvel
pelos sintomas da
doena.
Em 1891, Emil Behring injetava doses subletais
desta toxina, provocando o aparecimento de
molculas antitxicas (anatoxinas), capazes de
proteger contra a infeco e de ser transferidas
para outros animais, imunizando-os.
Apontamento histrico
E. Loewenstein e
Alexander
Glenny(1904)
Louis Sauer,
Pearl Kendrick
e Grace
Eldering
(1942)
Apontamento histrico
Jonas Salk(1949)
Vacina a partir de vrus
inativados (mortos). Foi
o primeiro imunizante
no mundo a ser
produzido em cultura de
tecidos (clulas de rim
de macaco) e reunir
mais de uma subespcie
de vrus (poliovrus I, II e
III).
Albert Sabin(1954)
Vacina atenuada contra a
plio, a primeira a ser
aplicada por via oral. Por
mimetizar o mecanismo
de infeco do vrus
selvagem, com a excreo
do microorganismo
atenuado no ambiente, a
vacina Sabin facilita a
obteno de altos nveis
de imunidade coletiva.
Produo de vacinas
Produo de vacinas
Fase farmacutica
Produo de vacinas
Transporte e distribuio
Cadeia de frio: Assegurar a estabilidade
da vacina em todas as etapas.
Temperatura: 2C a 8C
Produo de vacinas
Os principais tipos de
vacinas:
Os principais tipos de
vacinas:
Vacinas inativadas
Vacina viva:
A primeira injeco permite ao
vrus multiplicar-se rapidamente,
desencadeando uma resposta
imunitria em larga escala com
produo de anticorpos e resposta
de linfcitos T.
Prs e contras:Apenas
necessria uma dose mas existe
um risco mnimo de
desenvolvimento da doena.
Vacina morta:
Uma vacina morta no pode
multiplicar-se e a resposta dos
anticorpos limitada. Duas
injeces adicionais administradas
posteriormente asseguram uma
produo suficiente de anticorpos.
Prs e contras:No existe risco
Os principais tipos de
vacinas:
Vacinas de subunidades:
Vacinas de toxides:
Os principais tipos de
vacinas:
Vacinas recombinantes:
HEPATITE B
Metodologia tradicional de
atenuao
Metodologia para
produo de vacinas
recombinantes
Associao em leveduras:
Vacinas Vetorizadas:
Vacinas Bacterianas
Vacinas Bacterianas
Vacinas Virais
Vacinas Virais
Cultivo esttico:
Clulas crescem sem agitao at que
toda a superfcie do meio fique coberta
Inoculao do vrus
Propagao
Separao, purificao, inativao ou
atenuao do vrus
Desvantagem: Maior risco de
contaminao
Retira-se o
lquido que foi
formado
Testes
Limpeza e
tratamento
Vacinas Virais
Cultivo submerso:
Em biorreatores
Agitao constante do
meio
Condies
homogneas
Problemas:
Clulas no se
multiplicam livremente
Acmulo de
subprodutos
Vacinas Virais
Vacinas Virais
Objetivo
Materiais e Mtodos
Clulas
Materiais e Mtodos
Vrus
Materiais e Mtodos
Sistema rotativo de cultura e Frascos T
As clulas foram descongeladas diretamente no frsco T-75
contendo DMEM com 5% de FBS.
Depois de 3 dias uma parte foi transferida para frascos T150 (50ml) e foram cultivadas a 37C em uma incubadora
de 5% C02
Em um sistema rotativo (850cm2) culturas foram
inoculadas com 2.5x10^7 clulas e cresceram por 3 dias
Quando havia 1,0-1,2x10^8 clulas, foi adicionado o
DMEM sumplementado com 2.5 um/mL de TPCK-treated
tripsina
A ao da tripsina foi parada com um volume equivalente
de DMEM com 5% de FBS
A suspenso de clulas foi usada para inocular a cultura de
ACPB.
Materiais e Mtodos
Mini-Biorreator
Materiais e Mtodos
Mini-Biorreator
mini-bioreator
6x10^6 clulas incubadas em 30ml de meio
completo
T=37C com 5% de CO2
Velocidade mantida a 45rpm
O meio no mini-bioreator era trocado
diariamente
2 vasos eram removidos por dia para
determinar densidade celular e concentrao
de glicose
Materiais e Mtodos
Mini-Biorreator
Materiais e Mtodos
Tripsina
(m/mL)
2,5
2,5
2,5
2,5
1,0
2,5
5,0
10,0
MOI
0,5
0,1
0,05
0,01
0,05
0,05
0,05
0,05
Cada
Materiais e Mtodos
Cultura no ACPB
Materiais e Mtodos
Cultura no ACPB
de rotao= 55rpm
pH=7,4 dissolvendo CO2 e 7,5% NaHCO3
A taxa de circulao = 150mL/min
O2 dissolvido foi mantido a 40% da saturao
do ar, dissolvendo ar e N2
Materiais e Mtodos
Cultura no ACPB
Depois
Materiais e Mtodos
Amostras e Anlises
Resultados
Resultados
Resultados
Resultados
Resultados
Resultados
Cultura no ACPB
Densidade
celular
2,2x10^8g/
Resultados
Cultura no ACPB
TCID50(ma
x)=
7.3x10^7/
mL em 96h
Resultados
Cultura no ACPB
Os resultados foram
semelhantes em
outros experimentos
Discusso
Discusso