UTILIZACIÓN DE

CARBOHIDRATOS Y ÁCIDOS
ORGÁNICOS
Introducción

 CARBOHIDRATOS
Grupo de compuestos formado por carbono (C), hidrógeno (H) y
oxígeno (O).

- Monosacáridos (1 a 6 carbonos)
- Polisacáridos (2 monosacáridos)
- Alcoholes polihídricos (reducción de monosacárido)
Metabolismo

Suma de todos los procesos químicos que ocurren

dentro de un individuo.
 ANABOLISMO.- Encargada de la síntesis de moléculas
orgánicas más complejas a partir de otras más sencillas
requiriendo para ello energía.

 CATABOLISMO.- Transformación de moléculas

orgánicas o biomoléculas complejas en moléculas
sencillas utilizando energía.
Metabolismo

 Fermentación.

 Respiración

 Fotosíntesis
Fermentación

 Proceso metabólico de oxidación-reducción anaeróbica,

en la cual un sustrato orgánico sirve como aceptor de
electrones en lugar del oxígeno.
 La fermentación de sustratos orgánicos como los
carbohidratos dan tanto productos finales reducidos
como oxidados.
Tipo de fermentación Productos principales Ejemplos
Alcohólica Etanol y CO2 Algunas levaduras y
Zimomonas

Homoláctica Acido láctico Lactobacillus,

Streptococcus

Heteroláctica Acido láctico, etanol y CO2 Lactobacillus, leuconostoc

Acida mixta 2,3- Enterobacterias:Shigella

butanodiol,butanol,succinato, sp.
lactato, acetato, formiato,H2O Salmonella sp., Klebsiella
y CO2 sp. Escherichia coli.

Butírica butirato, acetato y CO2 Clostridium butiricum.

Propiónica Propianato, acetato y CO2 Propionibacterium,

Clostridium propionicum

acética Acetato Clostridium aceticum.

METODOLOGÍA
1. Fermentación de carbohidratos en tubos de Durham

Incubar los tubos

a 37°C por 24 h
Inocular los tubos
con una asada de
microorganismos

2. Fermentación de carbohidratos en medio Kligler

Inocular por picadura y en Incubar los tubos

la superficie de los tubos a 37°C por 24 h
de Kligler de cada sepa
3. Fermentación de carbohidratos. Pruebas de rojo de metilo y de
Voges Proskauer

Incubar los tubos

Inocular las cepas en dos a 37°C por 24 h
tubos de caldo glucosado
(etiquetados como MR y
VP respectivamente)

MR: VP:
Añadir 5 gotas de rojo Añadir 6 gotas de α-
de metilo naftol y 2 gotas de KOH-
creatina (dejarlo reposar
de 20 a 30 min)
 4. Utilización de ácidos orgánicos

Sembrar el tubo con

agar – citrato de
Simmons por estría
abierta en la superficie

Incubar a
37°C por 24 h

Sembrar el tubo
con caldo
malonato con una
asada
INTERPRETACIÓN DE
RESULTADOS
 Fermentación de carbohidratos en tubos de Durham

Principio

 Determina la capacidad de un microorganismo para fermentar un

carbohidrato específico incorporado en un medio basal y producir un
ácido o ácido con gas visible.

 Diferenciación de enterobacterias.
Composición

 Extracto de carne 1 g
 Proteosa peptona No. 3 10 g
 Cloruro de sodio 5g
 Rojo fenol 0.018g
 Agua 1000 ml
 pH a 7.4
 Fermentación de carbohidratos en tubos de Durham

 Positivo (+):
a) Producción de ácido: color
amarillo, pH= 6.8
b) Producción de gas: burbuja de
gas presente en el tubo de
Durham

 Negativo (-):
a) Producción de ácido: el
indicador no vira. Color rosa
rojizo
b) Producción de gas: ausencia de
burbuja
2. Fermentación de carbohidratos en medio de Kligler

Principio
 Kligler Iron Agar (KIA), ademas de caseina y peptonas de carne, contiene lactosa y dextrosa, que permiten la
diferenciacion de las especies de bacilos entericos según el cambio de color del indicador de pH rojo fenol
como respuesta al acido producido durante la fermentacion de estos azucares.

Galactosidasa
 Lactosa ————————> Glucosa + galactosa

Ciclo de Krebs
 Glucosa o galactosa ———————> CO 2 + H2O + energía

Vía de Embden-Meyerhof-Pamas ácidos orgánicos

 Glucosa ——————————————> aldehídos
anaerobia alcoholes CO2 + H2
energía
2. Fermentación de carbohidratos en medio de Kligler

Composición
 Extracto de carne (de vaca)
 Extracto de levadura.
 Peptona
 Peptona proteosa
 Lactosa
 Glucosa (dextrosa)
 Sulfato ferroso, FeSO4 • 7H2
Citrato de amonio férrico (50/50)
O Citrato férrico, FeC6H5O7
Citrato de amonio [(NH4)3C6H5O7]
 Cloruro de sodio, NaCl
 Tiosulfato de sodio, Na 2S2O3 • 5H2O
 Rojo fenol
 Agar
 Agua desionizada
2. Fermentación de carbohidratos en medio de Kligler

A. Una superficie alcalina y un fondo ácido

(rojo/amarillo) indica fermentación solo de la
dextrosa.
B. Una superficie y fondo ácido
(amarillo/amarillo) indica la fermentación de
dextrosa y lactosa.
C. Una superficie y fondo alcalino (rojo/rojo)
indica que no hubo fermentación de ninguno
de los carbohidratos.
D. Una superficie acida y un fondo alcalino
(amarillo/rojo) indica fermentación solo de la
lactosa.
 La presencia de burbujas o fracturas en el
medio indica la producción de gas.
 La presencia de un precipitado negro indica la
producción de sulfuro de hidrógeno.
3. Fermentación de carbohidratos
Prueba rojo de metilo

Principio
 La prueba de rojo de metilo (MR) es una prueba cualitativa basada en el uso de
un indicador de pH, el rojo de metilo, para determinar la concentración de ion
hidrógeno (pH) cuando un microorganismo fer­menta la glucosa.
 La concentración de ion hidrógeno depende de la relación de gases (CO 2 y H2)
 Los diferentes patrones de fermentación se deben a las variaciones en las
enzimas re­lacionadas con el metabolismo del ácido pirúvico en el microorganismo

 2 Glucosa + H20 —>2 Ácido láctico + ácido acético + etanol + 2 CO2 + 2 H2

(Ácido fórmico —> H2 + CO2)

 Glucosa + H20 —>- 2,3-butanodiol + H20 + 2 C02

(Acetoína ----> 2,3-butanodiol)
3. Fermentación de carbohidratos
Prueba rojo de metilo

Composición
 Polipeptona o peptona de carne
tamponada
o digerido pancreático de caseína
y digerido péptico de tejidos
animales

 Glucosa (dextrosa)

 Buffer fosfato dipotásico (K2HPO4)

 Agua desionizada
3. Fermentación de carbohidratos
Prueba rojo de metilo

 MR positivo (+): el cultivo es

suficientemente ácido para
permitir que el reactivo rojo de
metilo per­manezca con un color
distintivo rojo brillante

 MR negativo (-): color amarillo

(pH 6) en la superficie del medio.
3. Fermentación de carbohidratos
Prueba de Voges-Proskauer

Principio
 La prueba de Voges-Proskauer (VP)
se basa en la detección de acetoína,
un producto final neutro deriva­do del
metabolismo de la glucosa. La glucosa
es metabolizada a ácido pirúvico, el
principal intermediario en la glucólisis.
A partir del ácido pirúvico, las
bacterias pueden seguir muchos
caminos metabólicos; la pro­ducción de
acetoína es una de las vías
metabólicas de la degradación de la
glucosa en las bacterias

 2 Piruvato —> Acetoína + 2 CO2

3. Fermentación de carbohidratos
Prueba de Voges-Proskauer

Composición
 Polipeptona o peptona de carne
tamponada
o digerido pancreático de caseína
y digerido péptico de tejidos
animales

 Glucosa (dextrosa)

 Buffer fosfato dipotásico (K2HPO4)

 Agua desionizada
 3. Fermentación de carbohidratos
Prueba de Voges-Proskauer

 VP positivo (+): color rosado-

rojo en la superficie del medio
(acetoína presente).

 VP negativo (-): color amarillo

en la superficie del medio
(igual color que el reactivo).
 Utilización de ácidos orgánicos
Citrato de Simmons

Principio

 La utilización del citrato como única fuente de carbono produce la

alcalinización en el medio.
 Ayuda a diferenciar entre géneros entre los miembros de la familia
Enterobacteriaceae.
Composición

 Sulfato de magnesio 0.2g

 Fosfato monoamónico 1g
 Fosfato dipotásico 1g
 Citrato de sodio 2g
 Cloruro de sodio 5g
 Agar 15g
 Azul de bromonitol 0.08g
 Agua 1000ml
 pH 6.8
 Utilización de ácidos orgánicos

Agar-citrato de Simmons

 Positivo (+):
Crecimiento con un intenso color azul
en el pico de flauta.
pH= 7.6

 Negativo (-):
Ausencia de crecimiento y ningún
cambio en el color (verde).
pH= 6.8
 Caldo Malonato

Principio

 Poner de manifiesto microorganismos capaces de usar el malonato como

única fuente de carbono.
 Diferenciar entre especies del género Entrtobacteriaceae.
 Composición

 Sulfato de amonio 2g
 Fosfato dipotásico 0.6g
 Fosfato monopotásico 0.4g
 Cloruro de sodio 2g
 Malonato de sodio 3g
 Agua 1000ml
 pH= 6.7
Caldo Malonato

 Positivo (+):
a) Reacción alcalina. pH 7.6
b) Color azul pálido a color azul
Prusia en todo el medio.

 Negativo (-): sin cambios de

color (verde) o amarillo (sólo
fermentación de glucosa)
RESULTADOS
 Staphylococcu
Klebsiella Escherichia Bacillus Salmonela Shigella Pseudomonas Proteus
Prueba pneumoniae coli subtilis typhi flexnieri
s
aeruginosa vulgaris
aureus

Ácido - + + + + + + +
Glucosa
Gas + + - + - - - -
Ácido - - + + - + - +
Sacarosa
Durham
Gas + + - + - - - -
Ácido - + - + + + - -
Manitol
Gas + - - + - - - -
Glucosa + - + + + + - +
Lactosa - - - - - + + +
Kligler
Gas + + - - - - - -
H2S - - - + + - - +
RM - + - + + + - +
VP + - + - - - - -
Otras
Citrato + - - + - - + +
Malonato + - - - - - + -