Transformaciones matemticas a

la ecuacin M-M
Grfico Lineweaver y
Burck (L-B)
Eje X
1/[S]
Eje Y
1/V

Grfico Hanes Woolf

(H-W)
Eje X
[S]
Eje Y
S/V

Grfico Eadie
Scatchard (E-Scat)
Eje X
V
Eje Y
V/S

Grfico WoolfAugustinson- Hofstee

Eje X
V/S
Eje Y
V

GRAFICO DE LINEWEAVER Y
BURCK
Llamado tambin Grfico de dobles
recprocas.
Su deduccin se inicia tomando la inversa de
la ecuacin de MM
V

= Vm [S]
Km + [S]
1
V

1
V

= Km
+
Vm . [S]

= Km . 1
Vm
[S]

[S]
Vm. [S]

1 .
Vm

Grfico L-B
Es un mtodo exacto pero deben tenerse
algunas consideraciones:
1) Las concentraciones elegidas deben estar
cercanas al Km
- Si son muy altas con respecto al Km la
recta tiende a ser horizontal
- Si son muy bajas con respecto al Km la
interseccin de la recta estar muy cerca al
origen

Ej : [S] >> Km
Km = 0.5 mM (1 / Km = 2)
[S1] =

10 20 -30 mM

1 /[S1] = 0.1 0.05 0.03

-2

-1

-1

Ej : [S] >> Km
Km = 2 mM (1 / Km = 0.5)
[S1] =

0.10 0.2 -0.3 mM

1 /[S1] = 10 5 03 mM-1
-0.5

10

Grfico L-B- Objeciones

Incrementos equivalentes en la [S] no rinden

puntos equivalentemente distanciados

[S] = 1,2,3..10
1/[S] = 1, 0.5, 0.3..0.1
los pocos puntos terminales son los que

determinan el trazado
Pequeos errores en la determinacin de la
velocidad magnifican la recproca, pueden
introducir errores significativos en la pendiente

Grfico L-B- Recomendaciones

Se recomienda trabajar con [S] que rindan

incrementos equivalentes en su recproca
[S] = 1-1.11 1.25 1.43 1.67 -2 ..10
1/[S] = 1 - 0.9 - 0.8 0.7 0.6...0.1

Utilizar otras transformaciones matemticas

combinndolas en las determinaciones para
estimar Vm y Km ms fiablemente

Grfico L-B- Objeciones

Si hay sospecha de error en la estimacin de
Vm trabajar con grficos WAH o E-Scat
[S] = 1-1.11 1.25 1.43 1.67 -2 ..10
1/[S] = 1 - 0.9 - 0.8 0.7 0.6...0.1
Si se dispone de incrementos equivalentes de
[S] trabajar con H-W

Grfico de Hanes Woolf

Deduccin realizada a partir de la ecuacin
de L-B
1/V = Km/Vm . 1/[S] + 1/ Vm
Multiplicando ambos lados por [S] :
1/V. [S] = Km/Vm . 1/[S]. [S] + 1/ Vm .[S]
[S]/V = Km/Vm + [S]/ Vm

Grfico de Hanes Woolf

Simplificando y arreglando para la expresin de una
lnea recta :

m .

[S]/V = 1/Vm . [S] + Km/ Vm

Y calculando intercepto para y=0 :
X = - b/ m

X = - Km

Grfico de Hanes Woolf

[S]/V

m = 1/Vm

Km/Vm

- Km

[S]

Grfico de Hanes Woolf

Puede utilizarse prospectivamente con consideraciones semejantes

a L-B

Permite el trabajo con concentraciones directas,

ascendentes y que pueden planificarse en forma
equidistante

Al igual que L-B las concentraciones elegidas deben

estar cercanas al Km
- Si son muy altas con respecto al Km la recta tiende a
ser horizontal
- Si son muy bajas con respecto al Km la interseccin
de la recta estar muy cerca al origen

Grfico de Woolf-Augustinson
Hofstee

Deduccin realizada a partir de la ecuacin de M-M

V = Vm . [S]
Km + [S]
Dividiendo numerador y denominador entre [S] :
V = Vm . [S] / [S]
(Km + [S])/ [S]

Grfico de Woolf-Augustinson
Hofstee
Simplificando y operando :
Operando y despejando V;

V=

Vm
Km/[S] + 1

V (Km/[S] + 1) =

Vm

Arreglando para expresin de una lnea recta :

V = -Km . V/[S] + Vm

Grfico de Woolf-Augustinson
Hofstee
Y calculando intercepto para y=0 :
X = - b/ m
V

X = Vm/Km

Vm

m = - Km
Vm/Km
V/ [S]

Grfico de Eadie Scatchard

E-Scat
Deduccin realizada a partir de la ecuacin
de M-M
V = Vm . [S]
Km + [S]

Dividiendo numerador y denominador entre [S] :

V = Vm . [S] / [S]
(Km + [S])/ [S]

Grfico de Eadie Scatchard

E. Scat
Simplificando y dividiendo ambos lados entre Km :
V=

Vm
Km/[S] + 1

V (Km/[S] + 1) =

Vm

V (Km/[S] + 1) =
Km

Vm/Km

Arreglando para expresin de una lnea recta :

V/[S] = -1/Km . V + Vm/Km

Grfico de Eadie Scatchard

E. Scat
V/[S] = -1/Km . V + Vm/Km

V/ [S]

Vm/Km

m = - 1/Km
Vm

Y calculando intercepto
para y=0 :

X = Vm

Grficos WAH y E-Scat

Son grficos que se recomiendan trabajar tambin con

concentraciones de [S] cercanas al Km

Tiene la ventaja de tener un eje con lectura directa de

velocidad de reaccin , til en casos que no se dispone
de seguridad en la estimacin de velocidad de reaccin
(Estudios preliminares)

La prdida de linearidad en la recta puede ser indicio de

un proceso de purificacin pobre o de la presencia de
ms de una enzima que acta sobre el mismo sustrato

Grficos WAH y E-Scat

En casos de prdida de linearidad se
recomienda repetir los grficos pero
ampliando el rango de [S] para
visualizar mejor las tendencias y
aplicar WAH con preferencia

Grficos WAH y E-Scat

V/ [S]

E1+ E2
E1

E2

INHIBIDORES
Inhibicin competitiva

Clsica

Excluyente

Mutuamente excluyente
Enlace compartido
Por sobreposicin
Cambio en la configuracin

 Inhibicin competitiva Clsica

Parte de la premisa
de semejanza
estructural con el
sustrato
Conocida tambin
como Inhibicin
por anlogo de
sustrato

Inhibidor
y Sustrato
compiten
por alcanzar
el centro activo
de la enzima

 Inhibicin competitiva Excluyente

a) Mutuamente Excluyente

La semejanza
estructural no es un
condicionante
La unin de uno
impide la
insercin o
alcance del otro al

Inhibidor
y Sustrato
Son excluyentes por
generarse un
impedimento
estrico

 Inhibicin competitiva Excluyente

b) Por enlace compartido

I
S

La unin de uno
impide la
insercin del otro
al centro activo

Inhibidor
y Sustrato
Son excluyentes por
compartir un enlace
Comn sobre la enzima
(como en el aminocido
de unin)

 Inhibicin competitiva Excluyente

c) Por sobreposicin

I
S

La unin de uno
impide la
insercin del otro
al centro activo

No tienen
necesariamente
los mismos sitios
de unin, pero stos
se solapan

 Inhibicin competitiva Excluyente

c) Por sobreposicin

I
S

La unin de uno
impide la
insercin del otro
al centro activo

No tienen
necesariamente
los mismos sitios
de unin, pero stos
se solapan

 Inhibicin competitiva Excluyente

d) Por cambio conformacional

I
S
S
La unin de uno
dificulta la
insercin del otro
al centro activo

I
Cada uno tiene un sitio
de unin diferente, pero la unin
de uno, origina cambio conformacional

 Inhibicin competitiva Excluyente

Mecanismo de accin

E + S

Ks

E-S

+
I
Ki
E-I

Ki = [E] [I]
[E-I]

Kp

E + P

Deduccin de la Ec. M-M

para una Inhibicin competitiva
Acepciones

Hiptesis del steady state

1. Sistema unireactante influenciado por Ks y Kp

2. Condiciones catalticas de reaccin
3. Velocidad en todo momento es dependiente de la
disociacin del complejo E-S (v = Kp.[E-S] )
4. La Vm es representada por la expresin
( Vm = Kp . [Et] )

Acepciones
6. Distribucin de [ET] esta repartida en :

[Et] = [E]+ [E-S] + [E-I]

Y adems
[ E-S] = [E] [S]
Km

Por tanto :

V =

Kp . [E-S]

[Et]

[E] + [E-S] + [E-I]

V =

Vm . [ S ]
Km (1 +[I])+ [ S

]
Ki
Ecuacin de M_M para determinar velocidad
de reaccin Inhibida competitivamente