PCR:

DIAGNSTICO DE DOENAS

Integrantes

Luiz Claudio
Nereu Campos
Juliana Santos
Beatriz
Leticia Campos
Paloma
Camila
Aberione
Geane
Gisele

HISTRICO
1987- O processo de reao em Cadeia
de Polimerase(PCR, do ingls
Polymerase Chain Reaction) foi
descrito por Kary Mullis;
1989 - A Hoffman La Roche & PerkinElmes Corporation patenteou este
processo;
1983- K.Mullis recebeu o Prmio Nobel
da Qumica pelo seu trabalho

O QUE A REAO EM CADEIA PELA DNA

POLIMERASE?
.

OBJETIVO DA PCR
O objetivo da PCR a obteno de muitas cpias
de uma sequncia especfica de cido nuclico, a
partir de uma fita molde, ou seja, consiste na
reproduo de DNA, in vitro.

COMO FEITO?
Primeiramente o material gentico (DNA) ou outro
material a ser estudado extrado da clula.

COMPONENTES DA PCR

REAGENTES PARA A REAO

DNA-POLIMERASE : A mais usada a taqpolimerase; a catalisadora da extenso dos
primers; O aumento na sua concentrao pode
resultar na diminuio da sua especificidade;

SOLUO TAMPO: Basicamente esta soluo

contm ons diversos (Na, Cl, k entre outros) que
otimizam as condies da reao;

REAGENTES PARA A REAO

MgCL2: Doador muito estvel de ons MGg2+,
que so cofatores indispensveis para a atividade
da enzima;

dNTP: Desequilbrio da mistura de dNTP reduz a

fidelidade da Taq. O dNTP reduz o Mg2+ livre,
interferindo assim com a atividade da polimerase
e diminuindo o anelamento do primer.

PRIMER/INICIADOR

Sintetizados quimicamente;
15 a 25 bases;
Define limites alvo a amplificar;
Serve como ponto de incio para a replicao;
Permite a cpia das 2 cadeias simultaneamente
nas duas direes (para frente e para trs);
Banco de Dados Internacional Nucleotide
Sequence Database (www.insdc.org);
GenBank (NCBI,NIH) European Molecular
Biology Laborstory (EMBL) DNA DataBank of
Japan (DDBJ);

COMO FEITO?
Coloca-se o microtubo
de ensaio em uma
mquina
termocicladora que
possui como funo
fazer ciclos de
temperaturas prestabelecidos com
tempos exatos
especficos para as
reaes seguintes da
anlise.

ETAPAS DO CICLO
1-DESNATURAO: muito importante para
que a fita do DNA molde alvo se separem;
Inicialmente o termociclador ir elevar a
temperatura da mistura de 92 a 96c o que ir
promover a separao da fita dupla de DNA em
duas fitas simples atravs da quebra das pontes de
hidrognio.

ETAPAS DO CICLO
2-ANELAMENTO: Cada fita simples do DNA que
foi desnaturado serve de molda para a sntese de
novas cadeias complementares. Para isso resfriase a 54c onde os primes se anelam as duas fitas
simples, servindo de iniciadores para a enzima
polimerase.

ETAPAS DO CICLO
3-EXTENSO: Aquece-se novamente o tubo a
72c (temperatura ideal de funcionamento da Taq
polimerase) para a duplicao da fita. A Taq
polimerase inicia, aps o final do primer, a colocar
os nucleotdeos livres na fita de DNA ligando-os
por complementaridade, formando assim uma
nova fita dupla.

PRODUTO FINAL

PRODUTOS DA PCR

DETECO DOS PRODUTOS DE PCR

Finalizada a PCR o prximo passo detectar a
presena de produtos amplificados; Em geral isso
realizado pela eletroforese em gel de agarose ou
acrilamida.

VANTAGENS DA TCNICA
Capacidade de amplificar uma sequncia precisa
de DNA;
Rpida;
De baixo custo;

LIMITAES
Necessidade de conhecer a sequncia de DNA a
amplificar para que possa ser sintetizados
primers especficos;
Facilidade de contaminao da amostra;
Extenso limitada da sequncia a se amplificar;
Limitada extenso da sequncia;
Incorporao errnea de bases durante a
replicao

APLICAES
DIAGNSTICOS;
PROGNSTICOS;
DETERMINAO DA TERAPIA A SER
UTILIZADA;
AVALIAO DE SUSCEPTIBILIDADE A
DOENAS;
DETECO DE POLIMORFISMOS;
MUTAES PONTUAIS E INFEO POR
MICROORGANISMOS BACTERIANOS OU
VIRAIS;

APLICAES
DETECO DO SIDA;
UTILIZAO NO DIAGNOSTICO PREIMPLANTATRIO E PRE NATAL;
ANORMALIDADES CROMOSSOMICAS
ETC.;

REFERNCIAS

Obrigada pela ateno!!