Microbiologa del

Agua

Agua para uso y consumo humano: Aquella que no contiene

contaminantes objetables, ya sean qumicos o agentes infecciosos y que no
causa efectos nocivos para la salud. Tambin se le denomina Agua Potable.

NORMA OFICIAL MEXICANA NOM-127-SSA1-1994

 Qu hace al agua inadecuada para su consumo?

La contaminacin

Proceso de
alteracin o de
modificacin de los
equilibrios fsicos,
qumicos o
biolgicos del agua

responsables de su
calidad y que la
hacen inadecuada
para sus
numerosos usos y
aplicaciones.

Gases disueltos
Slidos disueltos
Materia orgnica no
ionizada.
Material particulado
(como coloides).
Microorganismos.

La calidad del agua

La calidad microbiolgica del agua esta

determinada por la diversidad, y el nmero, de
poblaciones de microorganismos presentes y
est perdurablemente ligada al uso a que esta
est destinada.
La garanta de esta calidad se basa en el
control de la presencia y multiplicacin de los
microorganismos.

Engeneral,lanormativaestablecequeelaguaesaptabacteriolgicamenteparaconsumosi
seencuentraexentademicroorganismospatgenosdeorigenentricoyparasitariointestinal.

NORMA OFICIAL
127-SSA1-1994

MEXICANA

NOM-

Inocuidad:
Que no contenga patgenos

Objetivos del control

microbiolgico del agua

Aceptabilidad:
Que no contenga niveles de
microorganismos suficientes para
convertirlo en alterado desde el
punto de vista organolptico.

Estabilidad:
Que tenga una calidad constante.

Componentes de un
anlisis microbiolgico

Muestreo: Se debe
realizar de forma adecuada
siguiendo protocolos
establecidos. Obteniendo
muestras estadsticamente
significativas.
Norma Oficial Mexicana
NOM-230-SSA1-2002

Mtodo analtico: Se
pueden emplear diversos
mtodos analticos,
eligiendo el ms sensible
para detectar lo que se
quiere.
Norma Oficial Mexicana
NOM-112-SSA1-1994

Interpretacin de
resultados: Para ello se
debe saber el significado
de los microorganismos.

Bacteria
s

Hongos

Virus

Microbiolog
a

Algas

Parsito
s

(Geldreich,

BACTERIAS

CAMPYLOBACTER SP
Datos bsicos

LasinfeccionesporCampylobactersuelenserleves,peropuedensermortalesen
niosmuypequeos,personasdeedadeindividuosinmunodeprimidos.
Lasbacteriashabitaneneltractointestinaldeanimalesdesangrecalientecomo
avesdecorralyganado

Sntomas

Diarrea,dolorabdominal,fiebre,dolordecabeza,nuseasy/ovmitos

Fuente y
transmisin

La va principal de transmisin son los alimentos. El agua o el hielo contaminados

son tambin una fuente de infeccin. Algunos casos ocurren tras el contacto con
aguacontaminadaduranteactividadesrecreativas.

(OMS,
2011)

scherichia sp., Salmonella sp. Y Shigella sp.

Datos bsicos

Son bacterias que se encuentra normalmente en el intestino del

ser humano y de los animales de sangre caliente.

Sntomas

Calambresabdominalesyladiarrea,quepuedeprogresarenalgunoscasosadiarrea
sanguinolenta(colitishemorrgica),fiebreyvmitos

Fuente y
transmisin

El reservorio el ganado bovino, ovejas, cabras y ciervos, (cerdos, caballos,

conejos, perros, gatos) y aves (pollos y pavos)
se ha aislado en masas de agua (estanques, arroyos), pozos y abrevaderos,
puede sobrevivir durante meses en el estircol y en los sedimentos de
recipientes de agua.

(OMS,
2011)

Vibrio Cholerae
Datos bsicos

El clera es una infeccin intestinal aguda causada por la

ingestin de alimentos o agua contaminados por la bacteria

Sntomas

Diarrea copiosa, indolora y acuosa que puede conducir con rapidez a una
deshidratacingrave

Fuente y
transmisin

Lavaprincipaldetransmisinsonlosalimentos.Elaguacontaminada

(OMS,
2011)

Los controles rutinarios de la totalidad de los microorganismos hdricos, potencialmente riesgosos para
la salud, resultan difciles de llevar a cabo debido a:

la gran variedad de bacterias patgenas cultivables

la complejidad de los ensayos de aislamientos

Por esta razn, los anlisis bacteriolgicos apuntan a la bsqueda de microorganismos indicadores de
contaminacin fecal .

Las bacterias coliformes

Comprende los bacilos aerobios o

anaerobios facultativos, no esporulados
que fermentan la lactosa de 35C a
37C con produccin de gas y acido en
un periodo de 24-48 horas.

Los gneros que componen

este grupo son: Escherichia, Klebsiella,
Enterobacter, Serratia, Citrobacter y
Edwardsiella.

coliformes
fecales (termotolerantes)
(trmino que designa a los coliformes de origen
exclusivamente intestinal) con capacidad de fermentar
lactosa 44C 1C con produccin de gas y acido en un
periodo de 24 horas. habitan normalmente en el intestino
humano y de otros animales de sangre caliente.
denominados termotolerantes por su capacidad de
soportar temperaturas ms elevadas. Esta es la
caracterstica que diferencia a Coliformes Totales y

Escherichia coli

Bacteria descubierta por el bacterilogo alemn Theodor von Escherich en

1860, quien lo denomino baterium coli (bacteria del intestino). Bacilo
Gram negativo, Aerobio o anaerobio facultativo no esporulado que se
caracteriza por poseer la enzima beta-galactosidasa, se desarrolla a 44C
1C, fermenta la lactosa y el manitol produciendo gas y acido, produce indol
a partir de triptfano, es oxidasa negativo y no hidroliza la urea.

NORMA OFICIAL MEXICANA, "SALUD

AMBIENTAL, AGUA PARA USO Y CONSUMO
HUMANO-LIMITES PERMISIBLES DE CALIDAD
Y TRATAMIENTOS A QUE DEBE SOMETERSE EL
AGUA PARA SU POTABILIZACION".

MESOFILOS AEROBIOS
Microorganismos cuya temperatura optima de
crecimiento flucta generalmente entre los 25-40;
en este grupo se encuentran la mayora de los
contaminantes y patgenos para el hombre.
Estos microrganismos se desarrollan por:
la exposicin de la muestra a la contaminacin
en general
la existencia de condiciones favorables para la
multiplicacin de microorganismos
la presencia de materia orgnica
La determinacin de bacterias mesfilas aerobias
tambin es rutinaria en el anlisis bacteriolgico
del agua.
NOM-127-SSA1-1994
limite
Mesoflicos aerobios UFC/ml 100

permisible

NORMAS
El anlisis cuantitativo de bacterias indicadoras de contaminacin en una muestra de agua puede
realizarse por dos metodologas diferentes:
NMX-AA-042-SCFI-2005
DETERMINACION
DEL NUMERO MAS PROBABLE (NMP) DE
COLIFORMES
TOTALES,COLIFORMES
FECALES
(TERMOTOLERANTES)
Y
Escherichia coli PRESUNTIVA.

NORMA OFICIAL MEXICANA NOM-112-SSA11994, BIENES Y SERVICIOS. DETERMINACIN

DE BACTERIAS COLIFORMES. TCNICA DEL
NMERO MS PROBABLE.

OBJETIVO

El nmero de organismos se establece mediante la cuenta de unidades formadoras de colonias

(UFC) o el uso de la tcnica del nmero ms probable (NMP)

PRINCIPIO DEL MTODO

El mtodo se basa en la inoculacin de alcuotas
de la muestra diluida o sin diluir, en una serie de
tubos de un medio de cultivo lquido conteniendo
lactosa.

Los tubos se examinan a las 24 y 48 horas de

incubacin ya sea a 35 a- 37C.

Se lleva a cabo la incubacin de estos medios

selectivos hasta por 48 horas a 35 - 37 C para la
deteccin de organismos coliformes y por 24 horas
a 44.0 1 C para organismos coliformes fecales
(termotolerantes) y E. coli.

NORMA OFICIAL MEXICANA NOM-092-SSA11994, MTODO PARA LA CUENTA DE

BACTERIAS AEROBIAS EN PLACA.

NORMA OFICIAL MEXICANA NOM-113-SSA11994, MTODO PARA LA CUENTA DE

MICROORGANISMOS COLIFORMES TOTALES
EN PLACA.

FUNDAMENT
O

El mtodo permite determinar el nmero de microorganismos coliformes presentes en una

muestra, utilizando un medio selectivo (agar rojo violeta bilis) en el que se desarrollan bacterias a
35C en aproximadamente 24 h, dando como resultado la produccin de gas y cidos orgnicos,
los cuales viran el indicador de pH y precipitan las sales biliares.

PROCEDIMIENTO
METODO NMP

COLIFORMES TOTALES Y FECALES:

Limpiar perfectamente toda el rea de trabajo y desinfectar
con alcohol de 96
Homogenizar la muestra (esta deber estar a temperatura
ambiente)
Tomar un volumen de 100 ml

GALERA DE DILUCIN
Preparar una serie de 10 tubos con tapa rosca de bakelita de 10 ml (perfectamente limpios y
estriles)

Adicionar a cada tubo 9 ml de caldo lactosado a pH=7 estril y colocar una campana Durham
invertida ( debe asegurarse de sacar todas las burbujas de aire de la campana).Esterilizar.
Poner a temperatura ambiente

Tomar 1 ml de muestra e inocular al primer tubo, agitar con el fin de homogenizar

Tomar 1ml del primer tubo e inocular el segundo tubo, cerrar el primero.
As sucesivamente con toda la serie de 10 tubos (serie de dilucin 10 -1 a 10-10)
Incubar por 24 horas a 35-37C

Dnde:
Tubos positivos. Aquellos que presenten turbiedad o formacin de gas en la campana
Tubos negativos. Aquellos que no presentan turbiedad o formacin de gas en la campana.
Transcurridas las 24 horas observar la turbiedad o formacin de gas en la campana

RUEBA PRESUNTIVA: COLIFORMES TOTALES:

Preparar una serie de 3 tubos con tapa rosca de bakelita de 15-20 ml (perfectamente limpios y
estriles)
Prepara dos serie de 3 tubos con tapa rosca bakelita de 10ml (perfectamente limpios y estriles)

Adicionar a cada serie caldo lactosado a pH6.9 +- 2 estril como sigue:

Serie 1 Adicionar a cada tubo 10ml
Serie 2 Adicionar a cada tubo 9ml
Serie 3 Adicionar a cada tubo 9.9ml
Colocar un campana Durham invertida en cada tubo (debe asegurase de sacar todas las
burbujas de aire de la campana).esterilizar. Poner a temperatura ambiente

Serie 1 Tomar 5 ml de muestra e inocular el primer tubo, agitar con el fin de homogenizar, cerrar,
As sucesivamente con toda la serie de 3 tubos

Serie 2 Tomar 1 ml de muestra e inocular el primer tubo, agitar con el fin de homogenizar, cerrar,
As sucesivamente con toda la serie de 3 tubos

Serie 3 Tomar 0.1 ml de muestra e inocular el primer tubo, agitar con el fin de homogenizar, cerrar,
As sucesivamente con toda la serie de 3 tubos

Revisar cada tubo y sacar todas las burbujas de aire de la campana

Incubar por 48 horas a 35C (registrar hora de inicio del conteo total de horas)
Transcurridas la 48hrs observar la turbiedad o formacin de gas en la campana
Registrar tubos positivos y negativos.
Reportar el ndice del NMP/100 ml

UEBA CONFIRMATIVA: COLIFORMES FECALES

Preparar 3 series de 3 tubos con tapa rosca de bakelita de 10 ml (perfectamente limpios y
estriles) por cada tubo positivo resultante de la prueba presuntiva.
Adicionar a cada serie caldo verde brillante a pH=7.2 estril como se indica:
Serie 1 Adicionar a cada tubo 10ml
Serie 2 Adicionar a cada tubo 9ml
Serie 3 Adicionar a cada tubo 9.9ml

Colocar una campana Durham invertida en cada tubo (debe asegurarse de sacar todas la burbujas de
aire de la campana).Esterilizar. Poner a temperatura ambiente

Tomar 0.1ml del tubo positivo resultante de la prueba presuntiva e inocular el primer tubo, agitar
con el fin de homogenizar, cerrar. As sucesivamente en todas las 3 series de 3 tubos
Revisar cada tubo y sacar todas las burbujas de aire de la campana.
Incubar por 24hrs a 44C (registrar hora de inicio del conteo total de horas)

Transcurridas las 24 horas observar la turbiedad o formacin de gas en la campana

Registrar tubos positivos y negativos
Reportar el ndice del NMP/100 ml

ESCHERICHIA COLI
Prepara 3 series de 3 tubos con tapa rosca de bakelita de 10ml (perfectamente limpios y estriles) por
cada tubo positivo resultante de la prueba presuntiva.
Adicionar a cada serie (agua de triptona + L o DL triptfano) a pH=7.5 estril como se indica:
Serie 1 Adicionar a cada tubo 5ml
Serie 2 Adicionar a cada tubo 4ml
Serie 3 Adicionar a cada tubo 4.9ml

Colocar una campana Durham invertida en cada tubo (debe asegurarse de sacar todas la
burbujas de aire de la campana).Esterilizar. Poner a temperatura ambiente

Tomar 0.1ml del tubo positivo resultante de la prueba presuntiva e inocular el primer tubo,
agitar con el fin de homogenizar, cerrar. As sucesivamente con todas las 3 series de 3tubos.

Revisar cada tubo y sacar todas las burbujas de aire de la campana.

Incubar por 24 horas a 44C (registrar la hora de inicio del conteo total de horas)

Transcurridas las 24 horas observar la turbiedad o formacin de gas en la campana

Registrar tubos positivos y negativos

Reportar el ndice del NMP/100 ml

MESOFILOS
AEROBIOS
METODO EN PLACA

Preparar 1 placa o caja Petri (perfectamente limpia y estril) etiquetarla e incluir una caja in
inoculo como testigo de esterilidad.
Tomar 1ml de muestra y colocarlo en la caja, agregar de 12 a 15ml de agar nutritivo, y
homogenizar.

Colocar la tapa de la caja a medio abrir y dejar que se seque y solidifique

Una vez seca y solidificada tapar completamente

Incubar las cajas en posicin invertida (la tapa hacia abajo) por 24 horas a 35C (registrar la
hora de inicio del conteo total de horas)

Transcurridas las 24 horas contar todas las colonias desarrolladas (excepto las de mohos y
levaduras) incluyendo las colonias puntiformes.

Hacer uso del microscopio para resolver los casos en los que no se pueden distinguir las
colonias.
Reportar la cantidad de UFC resultantes como cantidad de UFC/100ml

Desinfeccin:
Para eliminar del agua los microorganismos dainos solemos usar desinfectantes. Algunos ejemplos
de desinfectantes son cloro, UV, ozono (O3) y dixido de cloro (ClO2).

CONCLUSION:
Determinar
el
tipo
de
microorganismos presentes y su
concentracin
proporciona
herramientas
indispensables
para
conocer la calidad del agua y para la
toma de decisiones en relacin al
control de Vertidos y tratamiento de
aguas.

GLOSARIO
Nmero Ms Probable (NMP): Expresin estadstica que se utiliza para estimar la cantidad de
bacterias coliformes presentes en un volumen de muestra determinado.
Inocuidad: Incapacidad para hacer dao
Aguas residuales: Las aguas de composicin variada provenientes de las descargas de usos
municipales, industriales, comerciales, agrcolas, pecuarias, domsticos y similares, as como la
mezcla de ellas.
Medio selectivo: Medio de cultivo slido - liquido que contiene sustancias qumicas especficas que
permite el desarrollo de un grupo de organismos especficos, inhibiendo al mismo tiempo el
desarrollo de otros.
Medios diferenciales
Medio de cultivo slido - liquido que contiene sustancias qumicas especficas que permiten al
observador diferenciar distintos tipos de organismos.
Fermentacin: Oxidacin aerobica-anaerobica de compuestos por la accin enzimtica de los
Microorganismo
Organismo aerobio: Organismo que requiere de oxgeno molecular para su desarrollo.
Organismo anaerobio: Organismo que se desarrolla en ausencia de oxgeno molecular.
Organismo Anaerobio facultativo: Organismo que se desarrolla tanto en condiciones aerbicas
como anaerbicas.
Fermentacin: Oxidacin aerobica-anaerobica de compuestos por la accin enzimtica de los
Microorganismo

Referencias:
http://www.salud.gob.mx/unidades/cdi/nom/127ssa14.html
http://www.lenntech.es/faq-microbiologia-del-agua.htm
http://tierra.rediris.es/hidrored/ebooks/ripda/pdfs/Capitulo_20.pdf
http://www.lenntech.es/glosario-agua.htm
Roger Y. Stanier John L. Ingraham Mark I. Wheelis Page R. Painter
Microbiologa segunda edicin Editorial: REVERT S.A
NORMA OFICIAL MEXICANA NOM-112-SSA1-1994, BIENES Y SERVICIOS. DETERMINACIN DE BACTERIAS
COLIFORMES. TCNICA DEL NMERO MS PROBABLE.
NMX-AA-042-SCFI-2005 DETERMINACION DEL NUMERO MAS PROBABLE (NMP) DE COLIFORMES
TOTALES,COLIFORMES FECALES (TERMOTOLERANTES) Y Escherichia coli PRESUNTIVA.
NORMA Oficial Mexicana NOM-092-SSA1-1994, Bienes y servicios. Mtodo para la cuenta
de bacterias aerobias en placa.
NORMA OFICIAL MEXICANA NOM-113-SSA1-1994, BIENES Y SERVICIOS. MTODO PARA LA CUENTA DE
MICROORGANISMOS COLIFORMES TOTALES EN PLACA.