LABORATORIUM ANFISKO II

INSTRUMEN KCKT/HPLC
PENETAPAN KADAR CAPSAICIN

KELOMPOK 1
RAJKANNAH POONGAN 260110132002
SHADISH KUMAR SUBRAMANIAM
260110132002

JIMMY CHAN WEI KIT

260110132003

VIKNESWARAN MUTAYAH

260110132004

MAHALACIMY SELVARAJ 260110132005

Pengenalan
Capsicum annuum merupakan tanaman penghasil

alkaloid dari jenis capsaicinoid yang diproduksi

sebagai senyawa metabolit sekunder dari cabai.

Prinsip dasar dari HPLC adalah pemisahan analit-

analit berdasarkan kepolarannya atau sesuai dengan

perbedaan afinitasnya.

Analisa kuantitatif pada KCKT dilakukan dengan

cara membandingkan luas puncak standar senyawa

murni dengan sampel, sedangkan analisa kualitatif
pada KCKT dilakukan dengan cara mencari
kesamaan komponen capsaicin sampel dengan
standar

Alat dan bahan

Alatan yang digunakan
Kckt
Vortex
Tabung eppendorf
Pipet mikro
Bahan
Saos cabai
Kloroform
Metanol
10/18/16

Metode
Proseduralnya dilakukan dengan:
Sebanyak 100 mg sampel saos cabai ditambah 5001000 L kloroform dalam tabung Eppendorf 1,5 mL,
kapsaisin diekstraksi dengan cara di-vorteks selama 5
menit.
Dilakukan sentrifugasi pada 2000rpm selama 5menit
Supernatan dipisahkan dan dikisatkan
Residue dilarutkan dengan 1000l metanol
Larutan disaring dan disuntik dalam KCKT

10/18/16

0.010

3Desember2015 indo R kel jimmy 70MeOH_30AIR_1.0mLmenit

Area
Retention Time

0.014

Detector A - 2 (281nm)
3Des2015
3Desember2015 Belibis kel jimmy 70MeOH_30AIR_1.0mLmenit

0.012

Hasil Kelompok 1
0.030

0.008

Area
Retention Time

0.012

0
0.010

it

0.025

0.007

0.008
4.733

4.767

98459

Volts

0.005

0.006

4.867

6.817

702

3.467
2398

3349 7.617

3.167
2983
2532

0.000

9.667

19718219
6.9178.800 17725

7.467

70653 4.800 24808

8.850

5.400

0.000

0.001

0.002

12321 5.233

5157 8.800

0.000

224 3.983

305

4335 7.617

222 9.533
5881
5528 3.133

0.002

0.002

0.004

0.003

978

7.583

3.900

3.133
3699 0.533

0.000

4688

3.967
169

0.005

33154

0.004
27415 6.883

3.150

0.533

6.850

Volts

0.004

0.010

14298

0.002

0.006

8001

Volts

0.533

0.015

8074

0.004

0.008

111421

0.020

0.006

Volts

124777 4.800

0.006

389 3.967

0.000

126671

Volts

0.010

0
4

1 3

Minutes

24

53

Minutes

Sasa
ABC
AUC
AUC 1114214.767
1247774.80
0

05

8 1
10

92

75

310

Minutes

Minutes

Delmonte
AUC 984594.733

Belibis

8 4

AUC 706534.800

75

Minutes

Indofood
AUC
177254.8
67

68

10

0.035

0.030

0.025

Hasil Kelompok 2

0.0175

0.017

0.012

0.030

0.025

0.0150

0.015

0.020

0.0000

Volts

5.050
4.583

0.000

9.067

8.467

7.250

0.005

1889

3501

0.002

1707

278 8.467

38839

4.567

5.517

7.367

4008

42211

4386

791

0.005

3011

3.233

3.900

5.100

0.533

25904

3467
7.267

0.010

0.002

4861

0.000

261 8.917

517 8.317

69 8.000
676 3.900

0.000

0.004

0.005
343 5.533

278 3.867

764 3.150

488 3.833

0.0025

0.005

3412
17037.250
0.517

4.567

6837

118007

0.533

0.0050

0.007

72532

0.010

0.010

4.617

0.010

0.015

177087

0.006

0.0075

0.000

0.000

-0.005

-0.0025
4

Volts

0.015

928 9.300

145037

0.0100

0.012

0.008

0.015

4.600

Volts

0.020

0.020

524 9.583

Volts

0.0125

0.010

Volts

0.025

1 3

Minutes

ABC
AUC 1450374.600

24

-0.00

0 7

53

Minutes

Sasa
AUC
1180074.56
7

8 6 4

2
0

97

5
Minutes

8 10

Indofood
AUC 725324.617

7 5
3
Minutes

10

86

79

8 10
6

Minutes

Delita

Belibis

AUC 422114.583

AUC
388394.567
6

0.025
0.014

200

Hasil Kelompok 3

0.035

0.020

175

0.012

Volts

0.030

Volts

150

0.010

0.025

0.015

125
0.008

Volts

278 8.467

3011 7.367

0.002

0.000

000

524 9.583

928 9.300

4008 5.517

0.004

38839 4.567

0.006

4861 7.267
42211 4.583

261 8.917

4386 3.900

0.000

0.000

25904 5.100

025

676 3.900

488 3.833

1391 3.217

0.005

278 3.867

1703
0.517
764
3.150

6837 0.533

050

0.005

517 8.317

0.010

69 8.000

075

791 3.233 72532 4.617

0.010

343 5.533
3412
7.250

0.015

118007 4.567
3467 0.533

100

177087 5.050

145037 4.600

0.020

-0.005

025
2
0

04

3
1

5 1
Minutes

ABC
AUC
1450374.60
0

4
2

2
3

Minutes

3
4

28

4
5

93
6

810
7

Minutes

Minutes

Sasa
AUC
1180074.567

Indofood
AUC
725324.6
17

Delita
AUC
422114.58
3

6 9
8

Minutes

Belibis
AUC
388394.567
7

1Desember2015 Thenmoli K4 Delmonte 70MeOH_30AIR_1.0mLmenit

a
ention Time

Hasil Kelompok 4

0.00200

Retention Time

49856 7.500

Detector A - 2 (281nm)
1Des2015
Detector A - 2 (281nm)
0.0035
1Desember2015 Ara K4 Mymo 70MeOH_30AIR_1.0mLmenit
1Des2015
0.0035
Area
1Desember2015 Shaki K4 Indofood 70MeOH_30AIR_1.0mLmenit

0.0045

mLmenit

0.00225

Area
Retention T ime

33766 4.783

0.0040

0.0030

0.00175

0.0030

0.0035

0.00150

0.0025

Volts
16267 8.050

Volt s

2140 4. 983

-0.00025

-0.0005

06

Minutes

ABC
AUC 104980.4967

4 1

25

Minutes

8
0

DELMONTE
AUC 337664.783

9
1

10

5
Minutes

MYMO
AUC 128284.817

7
4

10

7343 5.533

0.00000

0.0000

0.0000

657 9.567

340 9.650

44 3. 883

1050 8.800
155 3.583

826 8.083

185 8.950

302 9.817

0.0005

0.00025

128284 4.817

0.0000

0.00050

0.0010

3433 3.067

1180 8.417

12286 7.717

0.0005

0.0005

0.00075

882 7.333

0.0015

0.0010

141 3.883

0.0010

0.00100

0.0015

6433 6.833

V olt s

0.0020

25121 7.117

Volts

0.0020

0.0015

104986 4.967

19443 6.983

0.0020

0.0025

1624 3.400

0.00125

0.0025

0.0030

Minutes

INDOFOOD
AUC 21404.583

Detector A - 2 (281nm)
0.005
1Des2015
1Desember2015 Saus Extra0.0012
Pedas 70MeOH_30AIR_1.0mLmenit

Area
Retention Time

Volts

Hasil Kelompok 5
0.0010

0.0030

0.0025

0.004

0.0025
0.0020

41604 5.000

Volts

0.0015

0.002

0.0004

7.683

0.0005

0.0000

2083

5336

4559

482 9.167

476 9.667

8226 7.700

7.150

308 3.417

800 8.783

0.000

1149 8.283

0.0000

1084

4.967

0.0005
209 9.683

3.050

5747

0.001

0.0010

10451

6.950

15078 7.167

0.0010

0.0002

1297 4.933

0.0015
Volts

0.0006

0.0020

8.283

4.850

0.003

46970

Volts

0.0008

0.0000

-0.0002

Minutes

ABC
AUC 469704.850

32

Minutes

10 5

Minutes

Sasa

Belibis

AUC 416045.000

AUC
104514.967

10

5
Minutes

Indofood
AUC 12974.933

Pembahasan
Pelarut yang digunakan dalam proses ekstraksi kapsaisin dari saus cabai

sampel adalah kloroform. Pelarut ini merupakan pelarut yang memiliki

kepolaran yang sama dengan senyawa target yaitu non polar sehingga
dapat diekstraksi. Teori ini disebut sebagai like dissolve like.
Proses vortex dilakukan adalah untuk menghomogenkan campuran
tersebut. Akibat proses ini, proses ekstraksi kapsaisin dapat
dipercepatkan dengan adanya gaya mekanik yang diwujudkan oleh
vortex.
Proses sentrifugasi dilakukan untuk memisahkan suatu campuran yang
tidak tercampur, sehingga saus yang tidak larut (memiliki bobot jenis
yang lebih rendah berbanding kloroform) berada di fase atas dan
kloroform di fase bawah.
Dalam supernatan (fase bawah) terdapat kapsaisin, karena sifat
kapsaisin yang suka akan pelarut non polar, maka akan tertarik oleh
kloroform yang merupakan pelarut non polar.

 Supernatan dikisatkan dan didapatkan kapsaisin dalam bentuk

serbuk yang berwarna merah.

Kemudian ditambahkan pelarut Methanol (fase gerak) yang
merupakan pelarut yang bersifat polar. Oleh itu, kapsaisin yang
bersifat non polar akan lebih lama tertahan pada kolom
(adsorpsi) sehingga terjadilah pemisahan di antara fase gerak
dan analit sampel.
Waktu retensi adalah waktu yang dibutuhkan oleh komponen
dari mulai diinjeksikan hingga sampel terbaca detektor.
Waktu retensi kapsaisin di dalam pengujian ini adalah sebanyak
4-5menit sehingga dapat ditemukan absorbansi di daerah itu
yang mana merupakan sampel kapsaisin (kualitatif).
Sedangkan pengukuran yang didasarkan secara kuantitatif dapat
dilihat dengan menggunakan Area Under Curve (AUC).
Dapat disimpulkan bahwa kadar capsaisin tertinggi merupakan
dari sampel saus cabe ABC.

Daftar
Pustaka
Hasrayanti. 2013. Studi Pembuatan Bumbu Inti Cabai (Capsicum sp.)

dalam Bentuk Bubuk. Tersedia online di:

http://repository.unhas.ac.id/bitstream/handle/123456789/5985/Studi
%20pembuatan%20Bumbu%20Inti%20Cabai.pdf?sequence=2
(diakses pada 15 November 2015).

Margaret, C. D., Mayer, W. L, Bosland P, W. 1995. Improved Method for

Quantifying Capsaicinoids in Capsicum Using High Performance
Liquid
Chromatography. Hort Science, 30, 137-139.

Musfiroh, I., Mutakin, dan Tressye Angelina. 2009. An Analysis of

Capsaicin
Level of Various Capsicum Fruits from Bandung
Indonesia. Tersedia
online di:
www.pustaka.unpad.ac.id/wpcontent/_analysis_of_capsaicin_level.pdf
(diakses pada 15 November
2015).

Yola, Rahmi, dkk. 2013. Penentuan Kandungan Kapsaisin pada

Berbagai Buah
Cabai (Capsicum) dengan Metode Kromatografi Cair
Kinerja Tinggi
(KCKT). Tersedia online di
http://jurnalsainunand.com/FilesJurnal/70775336418Rahmi
%20Yola.pdf
(diakses pada 15 November 2015).