Universidad Jos Antonio Pez

Direccin de Estudios Bsicos Generales

Asignatura: Biologa

OBSERVACIN CELULAR

INTRODUCCIN
Microbiologa: Ciencia que estudia los organismos y agentes no
visibles por el ojo humano (< 1mm).

ABIOGNESIS
Aristteles autoridad intelectual y escritores clsicos como Galeno,
Plinio y Lucrecio crean en la generacin espontnea, es decir, la idea de
que algunos seres vivos podan originarse a partir de materia
inanimada, o bien a partir del aire o de materiales en putrefaccin .

PRIMER PERIODO
(ANTIGEDAD HASTA
PRIMEROS MICROSCOPISTAS)

Propone
que
las
enfermedades son producidas
por organismos
Invisibles.
Fracastoro
1478- 1553

QUIN FUE EL CREADOR DEL

MICROSCOPIO?
El invento delmicroscopiose atribuye
aZacharias Janssen, un fabricante holands
que, posiblemente con la colaboracin de su
hermano y de su padre, desarroll el
microscopio compuesto (con dos lentes) en el
ao 1590. Otras fuentes sealan que el
inventor fue Galileo, en 1610, y se sabe que
incluso ya en laantigua Roma hubo avances
al respecto

MICROSCOPIO DE HOOKE (1670)

Robert Hook en 1665,
cientfico ingls, mejor
el microscopio
compuesto.
El observ finos cortes
de corcho y lo que vio le
record celdas
pequeas, de all el
nombre de clulas.
A pesar que Hook no
observ clulas
vivientes, se le
considera la primera
persona que observ e
identific las clulas.

SEGUNDO PERIODO
(1675- HASTA LA MITAD DEL SIGLO
XIX)
- En 1675 descubri que en una gota de
agua de estanque pululaba una asombrosa
variedad de pequeas
criaturas a las que denomin "animlculos".
- En 1683 descubre las bacterias, por lo que
se considera el "padre de la
Microbiologa".
Leeuwenhoek
(1632-1723

TERCER PERIODO
HASTA FINALES DEL SIGLO XIX
En 1860 entreg un informe a la Academia
de Ciencias de Paris dando un golpe
definitivo a favor de la teora Biognica.

Louis Pasteur
(1822-1895)

TERCER PERIODO
HASTA FINALES DEL SIGLO XIX
- En 1857 demostr que los agentes de la
fermentacin lctica eran microorganismos
Identific
distintos
microorganismos
responsables de diferentes clases de procesos
fermentativos.
Louis Pasteur
(1822-1895)

En
1860
adscribe
inequvocamente
fermentacin alcohlica a ciertos tipos de
Levaduras.
- Se inaugura la Microbiologa aplicada

la

TERCER PERIODO
HASTA FINALES DEL SIGLO XIX
Descubre las esporas bacterianas

Ferdinand Cohn
(1828-1898)

 QUE ES LA MICROSCOPA?
Es el conjunto de tcnicas y mtodos destinados a hacer visible los objetos de estudio que por su
pequeez estn fuera del rango de resolucin del ojo normal.
Si bien el microscopio es el elemento central de la microscopa, el uso del mismo se requiere
para producir las imgenes adecuadas, de todo un conjunto de mtodos y tcnicas afines pero
extrnsecas al aparato. Algunas de ellas son, tcnicas de preparacin y manejo de los objetos de
estudio, tcnicas de salida, procesamiento, interpretacin y registro de imgenes, entre otras.

DEFINICIN DE MICROSCOPIO
El microscopio es un instrumento que permite observar
objetos que son demasiado pequeos para ser
observados a simple vista.

TIPOS

DE MICROSCOPIO

MICROSCOPIO PTICO

Microscopio
Microscopio
Microscopio
Microscopio
Microscopio
Microscopio
Microscopio
Microscopio
Microscopio

simple.
en campo oscuro
en campo Luminoso
de campo claro compuesto
de fluorescencia
de contraste de fase
de luz polarizada
ptico especial
digital

MICROSCOPIOS ELECTRNICOS

Microscopio electrnico de barrido

Microscopio electrnico de transmisin

PARTES DEL MICROSCOPIO

PTICO (BINOCULAR)

CABEZAL
El cabezal es la base del
extremo superior que contiene
los lentes de conversin y los
oculares los cuales permitirn
la observacin y trasformacin
de la imagen , en algunos
microscopios
que
poseen
cmaras
integradas
(accesorios)
podremos
encontrarlos en esta parte
esencial del mismo.

OCULARES
Los microscopios pticos poseen tres tipos de lentes:
Los Oculares
Los Objetivos
El Condensador
Los Oculares se encuentran al frente en la parte superior,
poseen diversos aumentos tales como 10x 16x 18x 20x

estos

REVOLVER Y
OBJETIVOS

OBJETIVO: Lente situada cerca de la

preparacin. Ampla la imagen de
sta. Podemos encontrar objetivos de

4x - 10x - 40x - 100x

El Cabezal: Contiene los sistemas de lentes objetivos. Permite, al girar, cambiar los objetivos.

PLATINA - PINZAS CARRO

Las pinzas son las que

sujetaran la lamina porta
objetos la cual posee un
extremo
fijo
y
otro
mecnicamente mvil.

El carro permite deslizar la

preparacin
de
forma
ortogonal de arriba abajo y de
derecha a izquierda con la
ayuda
del
tornillo
de
desplazamiento

La lamina porta objetos debe

colocarse al extremo fijo de la
pinza ya que ese es el extremo
de la identificacin de la
misma.

CONDENSADOR, DIAFRAGMA
Y FILTRO
EL CONDENSADOR Lente que concentra los rayos luminosos que provienen del foco sobre la
preparacin.
EL DIAFRAGMA permitir regular la intensidad de luz que incidir sobre la preparacin.
EL FILTRO PTICO es un medio que slo permite el paso a travs de l de luz con ciertas
propiedades, suprimiendo o atenuando la luz restante

Condensador
Filtros

Diafragma

TORNILLOS DE AJUSTE

Macromtrico enfoque
Grueso directo pero
Gradual

Micromtrico
enfoque Fino y
detallado Gradual

Tornillo De
Graduacin
Condensad
or

Los dos tornillos de ajuste de imagen (enfoque) se encuentra a los extremos en la parte inferior
posterior del microscopio donde existirn dos tipos de tornillos como lo es el Macroscpico y el
microscpico estos permitirn el ajuste de la imagen que converger con la luz, enfocando de
manera inmediata y gradual.

BRAZO Y BASE

BASE. Sujecin de todo el microscopio. Permite

el sostn o soporte correcto del mismo en este se
encontrara la parte elctrica el foco de energa y
regulador de intensidad de luz

BRAZO : Es una pieza metlica de forma curvada

que puede girar; sostiene por su extremo superior
al Tubo ptico y en el inferior lleva varias piezas
importantes.

PROPIEDADES DEL MICROSCOPIO

Poder separador: tambin llamando poder de resolucin, es una
cualidad del microscopio, y se define como la distancia mnima
entre dos puntos prximos que pueden verse separados.
El ojo normal no puede ver separados dos puntos cuando su
distancia es menos a una dcima de milmetro.
El microscopio ptico puede conseguir un poder de resolucin de
0.2 dcimas de micra y el microscopio electrnico hasta 10
ngstrom.

PROPIEDADES DEL MICROSCOPIO

PROPIEDADES DEL MICROSCOPIO

Poder de definicin: se refiere a la nitidez de las imgenes
obtenidas, sobre todo respecto a sus contornos. Esta propiedad
depende de la calidad y correccin de las aberraciones de las
lentes usadas.

PROPIEDADES DEL MICROSCOPIO

Aumento del microscopio: se define como la relacin entre el
dimetro aparente de la imagen y el dimetro o longitud del
objetivo, es decir:
AUMENTO= imagen
Objetivo
Para calcular el aumento de un microscopio basta con multiplicar
el ocular por el aumento del objetivo.

CMO CALCULAR LA AMPLIFICACIN TOTAL?

La amplificacin total del microscopio se puede determinar
multiplicando la magnificacin del objetivo por el ocular.
A= Oc x Ob
Objetivo

Magnificacin
objetivo

Magnificacin ocular

Magnificacin total

Rastreo

4X

10X

40X

Baja potencia

10X

10X

100X

Alta potencia

40X

10X

400X

TIPOS DE MICROSCOPIO

TIPOS DE MICROSCOPIO

Acaros en la almohada y la
cama; microscpicos

academic.uprm.edu/~jvelezg/microscopio.ppt

E.coli

Espermatozoide y ovulo

Corales

Ojo de una abeja

Flor: Hibiscus

PREPARACIN DE LA MUESTRA
Ya que los microorganismos son transparentes es difcil distinguirlos con este tipo de
microscopa y es por lo que se suelen teir.Para observar una muestra al microscopio
ptico podemos recurrir a:
Preparacin hmeda

Preparacin fijada

Se realiza colocando una

gota de la suspensin de
microorganismos entre un
porta y un cubreobjetos.
Se observa directamente.

Se coloca una suspensin

homognea
de
microorganismos
en
una
gota de agua sobre el
portaobjetos
y
se
fija
(mediante calor o agentes
qumicos) y despus se tien
mediante
diferentes
tcnicas.
Estas
preparaciones
se
observan sin cubreobjetos y,
habitualmente, con objetivos
de inmersin.

PREPARACIN DE LA MUESTRA

PREPARACIN DE LA MUESTRA

COLORANTES
Colorantes ionizables
cidos:
Tienen grupos cargados negativamente
-Ejem. Eosina, fuscinacida.
-Se unen a estructuras celulares cargadas positivamente.
Bsicos:
Tienen grupos cargados positivamente.
-Ejem. azul de metileno, cristal violeta, safranina, verde malaquita.
-Se unen a cidos nucleicos y a muchas protenas

TINCIN
Se usan colorantes que son sustancias qumicas que
poseen dos caractersticas:
a) Son cromforos,
poseen color
Colorantes
b) Pueden unirse a la
clula mediante enlaces
inicos, covalentes o
hidrofbicos.

TINCIONES
TINCIN SIMPLE

TINCIN DIFERENCIAL

-Utilizado para observar

el arreglo, tamao y
forma
-Se utiliza un solo tinte:
Tincin directa: se tie
a la bacteria
Tincin negativa: Se
tie el fondo pero no a
la bacteria

Se utiliza para separar y

clasificar
a
los
microorganismos
de
acuerdo
a
sus
caractersticas.
Se utiliza para visualizar
estructuras
como
flagelos,
cpsulas
y
esporas.
Debe usar un mnimo de
tres tintes

TINCIN DIFERENCIAL
Tincin cido-alcohol resistente
Las familias Mycobacteriae y Nocardiaceae son cido resistente.
Los microorganismos cido-resistente se caracterizan por tener
una pared celular gruesa de cera (lipoidal) que contiene cido
miclico.
Los organismos que son decolorizados por el alcohol cido no son
cido resistente.

TINCIN DE ESTRUCTURAS ESPECFICAS

Tincin negativa cpsulas
Tincin simple que revela la
presencia de cpsulas difusas
alrededor de muchas bacterias.
La tincin se logra mediante
una mezcla del tinte (tinta
china) y el cultivo de bacteria.
Las bacterias aparecen como
cuerpos mas claros en medio
de un fondo oscuro.

TINCIN DE ESTRUCTURAS ESPECFICAS

ESPORAS BACTERIANAS
(Schaeffer-Fulton)
Tinte primario: verde malaquita.
Requiere
de
calor
para
la
penetracin de este tinte.
Agente decolorante: agua, remueve
el exceso de tinte, decolora las
clulas vegetativas.
Colorante de contraste: Safranina.
Tie las clulas vegetativas.

TINCIN DE ESTRUCTURAS ESPECFICAS

TINCIN DE ESTRUCTURAS ESPECFICAS

FLAGELOS
Para observarlos con el
microscopio ptico se debe
aumentar su grosor con
mordientes (cido tnico y
alumbre de potasio) y
fuscina bsica (mtodo de
Gray).
La presencia y distribucin
de flagelos ofrece una
informacin
taxonmica
importante.

NORMAS PARA EL USO DEL MICROSCOPIO OPTICO

1. Colocar el objetivo de menor aumento en posicin de empleo y bajar la platina completamente.
2. Colocar la preparacin sobre la platina sujetndola con las pinzas metlicas.
3. Comenzar la observacin con el objetivo de menor aumento (ya est en posicin) hasta llegar al
de 100 aumentos (100x) si la preparacin es de bacterias.
4. Para realizar el enfoque:
1.

2.

Acercar al mximo la lente del objetivo a la preparacin, empleando el tornillo macromtrico. Esto debe hacerse
mirando directamente y no a travs del ocular, ya que se corre el riesgo de incrustar el objetivo en la
preparacin pudindose daar alguno de ellos o ambos.
Mirando, ahora s, a travs de los oculares, ir separando lentamente el objetivo de la preparacin con el
macromtrico y, cuando se observe algo ntida la muestra, girar el micromtrico hasta obtener un enfoque fino.

5. Pasar al siguiente objetivo. Si al cambiar de objetivo se perdi por completo la imagen, es

preferible volver a enfocar con el objetivo anterior y repetir la operacin desde el paso 3. El
objetivo de 40x enfoca a muy poca distancia de la preparacin y por ello es fcil que ocurran dos
tipos de percances: incrustarlo en la preparacin si se descuidan las precauciones anteriores y
mancharlo con aceite de inmersin si se observa una preparacin que ya se enfoc con el
objetivo de inmersin.

NORMAS PARA EL USO DEL MICROSCOPIO OPTICO

6. Empleo del objetivo de inmersin:

Bajar totalmente la platina.

Subir totalmente el condensador para ver claramente el crculo de luz que nos indica la zona que se va a visualizar y donde habr
que echar el aceite.
Girar el revlver hacia el objetivo de inmersin dejndolo a medio camino entre ste y el de 40x.
Colocar una gota mnima de aceite de inmersin sobre el crculo de luz.
Terminar de girar suavemente el revlver hasta la posicin del objetivo de inmersin.
Mirando directamente al objetivo, subir la platina lentamente hasta que la lente toca la gota de aceite. En ese momento se nota
como si la gota ascendiera y se adosara a la lente.
Enfocar cuidadosamente con el micromtrico. La distancia de trabajo entre el objetivo de inmersin y la preparacin es mnima,
aun menor que con el de 40x por lo que el riesgo de accidente es muy grande.
Una vez se haya puesto aceite de inmersin sobre la preparacin, ya no se puede volver a usar el objetivo 40x sobre esa zona,
pues se manchara de aceite. Por tanto, si desea enfocar otro campo, hay que bajar la platina y repetir la operacin desde el paso
3.
Una vez finalizada la observacin de la preparacin se baja la platina y se coloca el objetivo de menor aumento girando el
revlver. En este momento ya se puede retirar la preparacin de la platina. Nunca se debe retirar con el objetivo de inmersin en
posicin de observacin.
Limpiar el objetivo de inmersin con cuidado.

MANTENIMIENTO Y PRECAUCIONES
1. Dejar puesto el objetivo de menor aumento en posicin
de observacin
2. NO tocar las lentes con las manos. limpiarlas muy
suavemente con un papel de ptica.
3. No dejar el portaobjetos puesto sobre la platina si no se
est utilizando el microscopio.

MANTENIMIENTO Y PRECAUCIONES
4. Despus de utilizar el objetivo de inmersin, hay que limpiar el
aceite que queda en el objetivo. En cualquier caso se pasar el
papel por la lente en un solo sentido y con suavidad. Si el aceite
ha llegado a secarse y pegarse en el objetivo, hay que limpiarlo
con una mezcla de alcohol-acetona (7:3) o xilol. No hay que
abusar de este tipo de limpieza, porque si se aplican estos
disolventes en exceso se pueden daar las lentes y su sujecin.
5. No forzar nunca los tornillos giratorios del microscopio.
6. Limpiar y revisar siempre los microscopios al finalizar la sesin
prctica.