Antivenenos y

Faboterapia
M. En F. Lorena Uribe Toledo
T.L.I.F Monserrat Hernndez Morales
T.L.I.C.C Luis Alberto Hernndez Nava

QUE SON LOS VENOS?

Son mezclas de protenas con alto peso
molecular y enzimas con multiplicidad de
efectos

(Valledor)

Ques un Antiveneno?

Son preparaciones de inmunoglobulinas

purificadas a partir del plasma de
animales.

(IBT UNAM)

SUEROS ANTIOFDICOS
Son especficos solo para venenos
antignicamente relacionados con los
venenos empleados en la inmunizacin.

(Clodomiro)

 los envenenamientos ofdicos (mordeduras

de serpiente) deben ser tratados con
antivenenos especficos,

(Clodomiro)

PARA ESTO SE DEBE

DEMOSTRAR:
eficacia validada en la neutralizacin de efectos:

(Clodomiro)

 Tienen que cumplir con esta eficacia en

estudios preclnicos como en estudios
clnicos.

(Clodomiro)

Clasificacin:
Monovalente: cuando es eficaz contra una
determinada especie de veneno
Polivalente: cuando es eficaz contra una amplia gama
de especies, o varias especies diferentes

(Bergillos)

SE BASA EN LAS VACUNAS PERO:

No inducen inmunidad en el paciente directamente
la inducen en un animal anfitrin y el suero
hiperinmunizado estransfundido al paciente.

(Bergillos)

El suero
antiofdico se
obtiene del
veneno de las
vboras
Se inocula en
equinos y ovinos
en pequeas
dosis
Se extrae la
sangre del
modelo para la
preparacin del
suero

Dato curioso:
Es muy posible inmunizar a una persona
directamente con pequeas dosis de
veneno de un animal. De acuerdo con
lahistoria griega, el reyMithridateshizo
esto con el fin de protegerse contra los
intentos deintoxicacin, por lo tanto, este
procedimiento es a menudo
llamadoMitridatismo.

M.laticollaris

UPSTREAM

Cepas
bacterianas,
enzimas y
plsmidos

E. coliXL1-Blue
se aplic para
la propagacin
del plsmido.

E.colicepas
M15 y Origami
se utilizaron
para la
expresin de las
protenas de
toxinas

plsmidos TOPO
2.1, pQE30 se
emplearon para
la clonacin y
produccin de
las protenas de
fusin

Las enzimas de
restriccin
BamHI,
PstI,Taqpolime
rasa, factor Xa
y ligasa de ADN
T4

Los clones
positivos con
el inserto
esperado se
cultivaron en
caldo LuriaBertani (LB)
supplemetado
con ampicilina
y kanamicina.

Los plsmidos
de las colonias
positivas se
purificaron
utilizando el
Alto Pure Kit
de aislamiento
de plsmidos

E. colicepa
M15 o cepa
Origami
expresando el
plsmido
pQE30XaMlat1
se cultiv en
medio LB.

Las clulas se
recogieron por
centrifugacin
(8000 rpm
durante 20
min a 4 C)

se recuper y
se lisaron con
un
BugBusterre
activo de
extraccin de
protena

Este material se
centrifug de
nuevo (8000
rpm durante 20
min a 4 C) y el
sobrenadante y
la fraccin
insoluble
(cuerpos de
inclusin) se
recuper

El sobrenadante
se disolvi en un
tampn Tris-base
0,05 pH 8,0, y
los cuerpos de
inclusin se
disolvieron en 6
M GndHCl en un
tampn Tris-base
0,05 pH 8,0.

purificacin del
HisrMlat1, ya
sea de
sobrenadante o
de inclusin
cuerpos, usando
Ni-NTA
cromatografa de
columna de
afinidad

el producto
recombinante se
eluy con sus
respectivos
tampones que
contienen
imidazol

El imidazol se
elimina por una
segunda etapa de
purificacin bajo el
sistema de HPLC de
fase inversa (HPLCFI) utilizando una
analtica
C18columna de
HPLC en fase
inversa

El HisrMlat1 eluida
se sec al vaco

La identidad de la
toxina se confirm
por tanto la
degradacin y
espectrometra de
masas

BIOCONVERSION

Se utilizaron Conejos para la

inmunizacin con HisrMlat1,
por va subcutnea a partir
de 2 g y terminando con 60
g de pptido

La primera inmunizacin se
llev a cabo en 500 ml de
PBS ms 500 ml de
adyuvante completo de
Freund (CFA).

Los conejos fueron reinmunizados a los 7, 14, 21,

28, 35, 42, 49, 56, 63, 70 y
77 das ms tarde, con 2, 5,
10, 10, 20, 50, 50, 50, 50, 50
y 50 mg de
HisrMlat1,respectivamente,
con adyuvante incompleto
de Freund (IFA) y luego
alternando IFA e hidrxido de
aluminio (Alum) hasta que la
ltima inmunizacin

DOWNSTREAM

Los conejos se
sangraron en el
primer da (preinmune) y despus
de la inmunizacin.

Cada suero inmune

se ensay mediante
ELISA la presencia de
anticuerpos contra
Mlat1 nativo.

FABOTERAPIA
Es de aplicacin reciente y se basa en la administracin
de la regin Fab de los Ac.
Estos fragmentos actan como los Ac completos
reconociendo a los Ag por lo que son tiles como
agentes neutralizantes

 Se caracteriza por separar el fragmento de

la inmunoglobulina que se encarga de
neutralizar a los anticuerpos

 se les ha obtenido, por digestin enzimtica,

desde los Ac de caballos inmunizados con
las toxinas
Se les considera antivenenos de tercera
generacin y se les emplea en Mxico para
la neutralizacin de toxinas de alacranes y
araas ponzoosas

 Por la gran cantidad de casos por picadura

de alacrn en Mxico, su aplicacin es
exitosa a travs de una formulacin
farmacutica conocida como Alacramyn y,
recientemente, se le ha aprobado por la FDA
para su empleo en los Estados Unidos de
Norteamrica

 Su vida media es corta en el torrente

circulatorio por lo que es necesario controlar
sus dosis para neutralizar efectivamente a
las toxinas, se les administra fcilmente por
que los fragmentos son solubles y por su
estabilidad a temperatura ambiente

 Sus efectos adversos son moderados

Bibliografa:
Envenenamientos por animales : animales
venenosos y urticantes del mundo, Arturo
Valledor de Lozoya, Madrid : Daz de Santos,
1994
Ins. Clodomiro Picado, 2010. Qu son los
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http://www.icp.ucr.ac.cr/index.php?option=
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Antivenenos Dr Alejandro Alagon Cano,
Instituto de Biotecnologia- UNAM 2012
http://ofidismo.biol.com.ar/descargas/Tarjeton
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Bergillos, Fernando (2013).Toxinologa
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