Identificacin y definicin del problema

Diseo del procedimiento experimental

Ejecucin del experimento y recopilacin de datos
Anlisis de los datos experimentales
Propuesta de solucin al problema

Concentracin de paracetamol en un
comprimido de Kitadol
Propiedades Mtodos instrumentales
Emisin de radiacin Espectroscopa de emisin (rayos X,
UV, Visible) fluorescencia,
fosforescencia.

Absorcin de Espectrofotometra, fotometra,

radiacin resonancia magntica nuclear

Dispersin de Turbidimetra, nefelometra

radiacin
Refraccin de Refractometra, interferometra
radiacin
Potencial elctrico Potenciometra,
cronopotenciometra
Carga elctrica Culombimetra
El instrumento transforma la informacin relacionada con
las propiedades fsicas o qumicas del analito en
informacin factible de ser manipulada e interpretada.
Lo primero a realizar es definir con claridad la
naturaleza del problema analtico, para ello se debe
contestar:

I. Qu exactitud se requiere?
II. De cuanta muestra se dispone?
III. En qu intervalos de concentraciones est el
analito?
IV. Qu componentes de la muestra interfieren?
V. Cules son las propiedades fsicas y qumicas de
la matriz?
VI. Cuntas muestras hay que analizar?
Los criterios cuantitativos de funcionamiento de los
instrumentos que se deben considerar para decidir
si un determinado mtodo instrumental es o no
adecuado, son los siguientes:
I. Precisin
II. Exactitud
III. Sensibilidad
IV. Lmite de deteccin
V. Intervalo de
concentracin
VI. Selectividad
VII. Robustez
 10 L 1 mL 1 mL

3 mL

Cmo saber si se ha
Replicas o
cometido algn error?
repeticiones
Cualquier error por el que una medicin o resultado es
siempre demasiado alto o demasiado bajo, los
resultados errneos son siempre en el mismo sentido.
Su origen se puede identificar (afecta a la exactitud).

Cualquier error por el cual algunas mediciones o

resultados son muy altos o bajos , caen a ambos lados
del valor medio (afecta a la precisin).
Se manifiestan cuando un sistema de medicin se utiliza
a su mxima sensibilidad. Se debe a numerosas
variables no controladas que son parte inevitable de
toda medicin fsica o qumica, no se pueden identificar
o medir con certeza.
La frecuencia de distribucin que presenta una curva
gaussiana tiene las siguientes caractersticas:

-El resultado que se observa con mayor frecuencia es la

media del conjunto de los datos
-Los resultados se agrupan de forma simtrica alrededor
del valor medio
-Es ms frecuente encontrar pequeas divergencias
respecto al valor medio central que grandes
divergencias
-En ausencia de errores sistemticos, la media de un
conjunto de datos grandes se aproxima al valor
Los errores sistemticos son de tres tipos:
INSTRUMENTALES, PERSONALES Y DEL MTODO

INSTRUMENTALES:
-Deriva en los circuitos
elctricos
-Fugas en sistemas de vaco
-Efecto de la temperatura en
detector
-Errores de calibracin en los
medidores, pesas y equipos
Correccin mediante calibracin peridica
volumtricos de los equipos
PERSONALES: se introducen en una medida como
consecuencia de los criterios que debe adoptar el analista

-Color de una disolucin en el punto final de una valoracin

-La intensidad relativa de dos haces de luz
-Leer un indicador alto de forma persistente
-Ceguera al color, etc

MTODO: aparecen como consecuencia del

comportamiento qumico o fsico no ideal de los reactivos y
de las reacciones en las que se basa un anlisis

-Reacciones lentas e incompletas

-Prdidas por volatilidad, adsorcin del analito sobre
VALIDACIN DEL MTODO
slidos, etc
 E = Xi -
Xt
Donde xi es el valor aceptado como real y xt el valor
medido. El signo + o se mantiene para expresar si el
valor medido es mayor o menor al real.

E = xi - X t / X t x
100
 Para conocer la exactitud de los resultados obtenidos es
necesario realizar anlisis de estndares.
Para medir el nivel de interferencia de la matriz, es
necesario analizar un blanco.
Problemtica: Determinar el contenido de
mercurio en el agua
Decidir cmo obtener una muestra para su
anlisis depende de:
- Tamao del lote del que se ha de tomar la
muestra
- El estado fsico de la fraccin de muestra que se
ha
Lade analizar
toma de la muestra va ligado directamente al
- Las caractersticas
mtodo de anlisis qumicas del material que se
ha de analizar
 Si la muestra no es representativa los resultados del
anlisis no reflejaran con exactitud su contenido en la
muestra.
La mayora de los materiales de los cuales se toman
muestras son heterogneos.
El muestreo debe ser a tiempos regulares y fijo en
forma y mtodo

Apilar y dividir en
cuartos
Muestreo en etapas: permite conocer mejor las
caractersticas de distribucin del analito en la
matriz. Muestreo jerrquico
mltiple
el establecimiento de la evidencia documental de
que un procedimiento analtico conducir, con un
alto grado de seguridad, a la obtencin de
resultados precisos y exactos, dentro de las
especificaciones y los atributos de calidad
previamente establecidos.

El proceso de validacin contempla varias fases

que se deben llevar a cabo para conocer las
caractersticas de fiabilidad del mtodo, que son
las que demuestran la capacidad de un mtodo
analtico para mantener a lo largo del tiempo los
criterios fundamentales de validacin
Los mtodos analticos estn sometidos a
interferencias qumicas y fsicas que contribuyen a la
incertidumbre del anlisis.
Cuando el mtodo est libre de estas interferencias
se puede decir que es robusto.
La robustez de un mtodo garantiza que este pueda
ser utilizado en distintas condiciones en diversas
matrices.
Variable Bajo Alto ptimo
% ACN* en la fase 4.0 6.0 6.0
mvil (v/v)
Flujo (mL min-1) 0.6 1.0 0.7
pH 2.2 26 2.6
Identificar cuales son los factores que tienen mayor
influencia
Mtodo ultravioleta para determinar fosforo en suero

Fosfato + ion molibdato = complejo inorgnico

molibdato fosfrico
= 340 nm Almacenamiento
Tcnica manual o automa

Tiempo y
temperatura
de reaccin
Analistas
Mtodo ultravioleta para determinar melatonina en
cpsulas

Mediciones a 307 nm, solucin de 30 g/mL

Soluciones de pH 3-
5

50C 4C
La precisin es la medida de la dispersin de los
datos entorno a un valor central y puede expresarse
como rango, desviacin estndar o varianza.
Por lo general se divide en dos categoras:
repetibilidad y reproducibilidad.
i. Repetibilidad: precisin de un anlisis en el que
la nica fuente de variacin es el anlisis de
muestras repetidas
ii. Reproducibilidad: precisin obtenida cuando se
comparan los resultados de distintas muestras,
distintos anlisis o distintos mtodos.
 Instrument
al
Repetibilidad

Del
mtodo
Precisi Precisin
n intermedia

Reproducibilidad
La precisin se ve afectada por los errores
aleatorios, como se distribuyen aleatoriamente en
torno al valor central, los errores positivos y
negativos tienden a compensarse, siempre que el
nmero de mediciones sea suficientemente grande.
 N de rea (mvolts*
inyeccin seg)

1 54493
2 55358
3 55401
4 55447
5 56001
6 55691
Promedio 55399

DE 505
 5 extractos a un nivel de sobrecarga de
0,8 ppm

Extracto Extracto Extracto Extracto Extracto S CV%

1 2 3 4 5
rea 2488,8 2203,1 2413,5 2137,3 2203,4 152,6 6,67
promedio

tr 12,185 12,185 12,183 12,182 12,182 0,0015 0,012

 5 extractos a un nivel de sobrecarga de 0,8 ppm en dos das
distintos

Da 1 Da 2

Promedio 2289,2 2624,3

S 152,6 191,8
CV% 6,67 7,31

CV% 6,98
La exactitud es una medida de la proximidad entre la
medida de tendencia central y la verdad o el valor
esperado.
Los errores que afectan a la exactitud de un anlisis
se llaman sistemticos y se caracterizan por una
desviacin sistemtica en relacin con el valor
verdadero, es decir, todas las medidas individuales
son demasiado pequeas
Sobrecarga o demasiado
g Recuperacin grandes.
DER%
mL-1 %
300 94 4.24 4.51
600 85 0.71 0.84
900 90 0.71 0.79
Es la medida de la
capacidad para
diferenciar pequeas
variaciones en la
concentracin del analito.
La definicin cuantitativa
de sensibilidad para la
IUPAC es sensibilidad de
calibrado, es decir la
pendiente de la curva de
calibracin a la
S = mc
concentracin en estudio.
+ Sbl
 Sensibilidad Pendiente
de de la curva
calibracin

Sensibilid
ad

Sensibilidad LD y LC
analtica
Se define como la mnima masa de analito que se
puede detectar para un nivel de confianza dado.
Este lmite depende de la relacin entre la magnitud
de la seal analtica y el valor de las fluctuaciones
estadsticas de la seal del blanco.
Segn IUPAC es la menor concentracin o cantidad
absoluta de un analito que produce una seal
significativamente mayor que la que se obtiene con
un blanco.
I. Mtodo del error tpico
II. Mtodo de la inspeccin
visual
III. Mtodo de la desv. St.
del blanco
Se define como la menor concentracin de analito
que puede determinarse con precisin y exactitud
razonables en las condiciones establecidas y se
expresa en unidades de concentracin.

Lmite de deteccin (LOD): 3

* Sbl / m

Lmite de cuantificacin (LOQ):

10 * Sbl / m
Se define como el
intervalo desde la
concentracin ms
pequea a la que se
puede realizar una
medida cuantitativa
hasta la
concentracin a la
que la curva de
calibrado se desva
de la linealidad.
Independiente de la apariencia lineal de la recta es
conveniente evaluar los estimadores de regresin es
un intervalo de confianza dado:

Del coeficiente de regresin (r) : se determina para

evaluar el ajuste al modelo lineal propuesto

De la pendiente (m): se determina como parmetro

de sensibilidad

De la ordenada en el origen (b): para evaluar la

proporcionalidad de la funcin analtica, que la recta
pase por el origen y que cualquier desviacin pueda
adjudicarse nicamente a un error aleatorio.
Este parmetro se refiere a la propiedad del mtodo
de producir una seal medible debida solo a la
presencia del analito, libre de interferencias de otros
componentes, en la matriz de la muestra.

Indica el grado de ausencia de interferencias con

otras especies que contiene la matriz de la muestra.

Estos compuestos pueden ser excipientes de un

frmaco, productos de degradacin, subproductos o
productos laterales de sntesis de una droga,
metabolitos del mismo analito en un fluido biolgico,
etc.
Blanco de matriz de
trigo

DON
Muestra de trigo naturalmente contaminada con
deoxinivalenol

DON
Muestra de trigo con tres toxinas de Fusarium DON, HT-
2 y T-2

DON

HT-2

T-2
En productos farmacuticos se evalan las rutas de
degradacin con el fin de realizar un ensayo de
degradacin artificial:

Termlisis (por calentamiento de la droga a una t

fija)
Hidrlisis (por calentamiento a reflujo con agua
durante 1 hora)
Hidrlisis alcalina (por calentamiento a reflujo con
NaOH 1 N por 1 hora)
Hidrlisis cida (por calentamiento a reflujo con HCl
1 N por 1 hora)
Fotlisis (por exposicin de la droga y una solucin
de ella a radiacin UV +
o luz directa)
pureza
Oxidacin (calentamiento a bao maria de una
 Alimento extruido Ascorbil 2-monofosfato

4
mAU

200 210 220 230 240 250 260 270 280 290 300
nm
Consiste en una disminucin o aumento de la respuesta
instrumental del analito debido a la presencia de otros
componentes.
El efecto matriz provoca un error sistemtico
proporcional, es decir, dependiente de la concentracin
de analito en la muestra.
Adems de los parmetros de calidad se deben
considerar las siguientes caractersticas:

1.- Velocidad
2.- Facilidad y comodidad
3.- Habilidad del operador
4.- Costo y disponibilidad del equipo
5.- Costo por muestra.
La exactitud de la estandarizacin depende de la
calidad de los reactivos y del material de vidrio que se
utilicen para preparar los estndares.

- Elevada pureza
- Composicin conocida
- Estable a temperatura ambiente
- Ser posible de secar en estufa

Solucin de
concentracin
conocida
Pesar X g
- reactivo cuya pureza hay que establecer por
comparacin con un patrn primario
- Aquella estandarizacin que utiliza un solo patrn con una
cantidad conocida de analito

K = S ref
Cs

- Cualquier incertidumbre del valor de K aumenta la

incertidumbre de la concentracin del analito
- Se prefiere la estandarizacin con varios puntos
La mayora de los mtodos instrumentales requieren
de una calibracin, proceso que implica relacionar la
seal analtica medida con la concentracin del
analito. Los tres mtodos ms utilizados son:

I. Curvas de calibrado
II. Mtodo de la adicin
estndar
III. Mtodo del patrn
interno
 Se requieren varios estndares de concentraciones
conocidas del analito de inters.
Se requiere un blanco que contenga los componentes de
la muestra original excepto el analito.
Se representa una grfica de respuesta del instrumento
v/s concentracin del analito.
Este mtodo se utiliza para muestras complejas en las
cuales la matriz puede interferir de manera
importante.
Se adicionan diferentes volmenes de una disolucin
patrn a varias alcuotas de la muestra del mismo
tamao.
El valor del volumen en la interseccin de la lnea
recta con el eje x es el volumen del reactivo estndar
equivalente a la cantidad de analito en la muestra.
 Un patrn interno es una sustancia que se aade a
todas las muestras, blancos y patrones de

rea analito/rea st.int.

calibrado en una cantidad fija.

Est ausente en la
muestra
Se aade en
concentracin fija y
conocida
Este mtodo sirve para
compensar algunos
errores aleatorios o
sistemticos.

Concentracin analito/Cst.int.
 Si el estndar interno y el analito responden
proporcionalmente a los errores instrumentales y
fluctuaciones del mtodo, la razn entre las seales es
independiente de las fluctuaciones.
La mayor dificultad es encontrar un estndar interno
adecuado, con seal reproducible y que genere una
seal similar a la del analito.
 Dgitos de una cantidad medida, incluyendo todos los
dgitos conocidos y un dgito cuya magnitud no se
conoce con seguridad.

Son importantes ya que reflejan la incertidumbre de

la medida.

Repasar las reglas para realizar redondeos de cifras

significativas en los clculos
Las cifras significativas indican el error con el cual
se midi una determinada magnitud.

Todas las cifras distintas de cero son significativas

Los ceros a la derecha o entre dos cifras distintas de
cero son significativos
Los ceros a la izquierda NO son significativos
 Cuando la cifra siguiente a la que se va a conservar es
menor a 5, la cifra que se conserva queda inalterada.

23,4533 23,45

Cuando la cifra siguiente a la que se va a conservar es

5 o mayor a 5, la cifra que se conserva se debe
aumentar en una unidad.
23,4567 23,46
Cuando un problema tiene varios datos el resultado final
debe expresarse con la misma cantidad de cifras
significativas del dato que tenga menor cantidad de
cifras significativas.
Si se obtienen resultados parciales, en los mismos se
debe dejar por lo menos una cifra significativa ms de las
que se necesita tener en el resultado final.
16.00 El resultado de una
1.007 adicin/sustraccin no puede
1.007 tener ms dgitos
18.014 18.0 significativos a la derecha del
1 punto decimal que el trmino
que menos contenga.

3 El resultado de una
[(0.958)x 1 x (6.0221367 multiplicacin/
divisin tiene tantas cifras
x 1022(18.0
] 8 significativas como el
1)4 factor que
menos tenga