VALIDACIN DE MTODOS

ANALTICOS

Buenas Prcticas para Laboratorios

Nacionales de Control Farmacutico

1 de 83
 Validacin
Objetivos

Introducir los del

Desarrollo conceptos de :
protocolo
Calificacin de instrumento
Procedimiento analtico

Extensin de la validacin
Transferencia de mtodos

Validacin de ensayos fsicos,

qumicos, biolgicos y
microbiolgicos

2 de 83
 Qu es validacin?
La validacin de un mtodo analtico es
el proceso por el cual se establece,
mediante estudios de laboratorio, que las
caractersticas de desempeo del mtodo
cumplen con los requisitos para las
aplicaciones analticas previstas.

USP 31NF 26, Captulo General <1225>

Validacin de mtodos farmacopicos

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La validacin de mtodos, es el
proceso por el cual se demuestra
que los procedimientos analticos
son aptos para el uso indicado.

FDA draft guidance Analytical

Procedures and Methods Validation

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 Cul es el objetivo
de la validacin?
El objetivo de la validacin de
un procedimientoanaltico es
demostrar que es apto para el
propsito indicado.
ICH Guideline Q2A
Text on Validation of Analytical
Procedures

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 ICH Q2(R1)
Validation of Analytical Procedures: Text and Methodology
Documento principal (parmetros de validacin necesarios,
caractersticas que deben ser consideradas): etapa 5, Oct
94
UE: Adoptado por CPMP, publicado como
CPMP/ICH/381/95.
de marzo,
FDA: Registro Federal, volumen 60, N. 40, 1
1995, pginas 11260-11262
Addendum (datos experimentales requeridos,
interpretacin estadstica): etapa 5, Nov 1995
UE: Adoptado por CPMP, publicado como
CPMP/ICH/281/95
19 de mayo,
FDA: Registro Federal, volumen 62, N. 96,
1997, pginas 27463-27467
http://www.ich.org/cache/compo/276-254-1.html

6 de 83
 Caractersticas Analticas
tpicas en la validacin

Linealidad
Especificidad
Limite de Deteccin

Lmite de cuantificacin

Precisin

Exactitud

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 Componentes de calidad de datos
analticos
Verificacin del CC (calibracin, Calificacin de los
materiales de referencia)` instrumentos
analticos

Pruebas de aptitud Validacin de los

del sistema mtodos analticos

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 Componentes del Proceso de
validacin
Analista, equipo instrumental y mtodo
Calificacin del Calificacin de Calificacin de Calificacin
diseo y desarrollo La instalacin la operacin del
del mtodo desempeo
(DQ) (IQ) (OQ)

Fase Fase IQ/OQ Fase PQ

DQ (IQ) (OQ/PV)
Etapa de calificacin
Definir Disear Instalar Preparar Funcionar Operar
Ciclo de vida del
equipo Instrumento Mtodo
Necesidad de Soporte tcnico
validacin

Papel y Usuario del mtodo

responsabilidad

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 Validacin
Por qu es necesaria
la validacin analtica?

Cul es el propsito Mtodos confiables

de la validacin
analtica?

Mtodos reproducibles

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 Etapas de Validacin
Sitio Sitio de Sitio de
del Uso Uso
Suplid Funcion Calibracin
or Cualificac
al ,
Validaci in Pruebas
Mantenimi
n IQ OQ PQ deento
ISO
Estructu Ejecuto
9000
ral y ria
Software
Antes de Antes Usa Durante
Comprar de r Uso

11 de 83
 Cundo Validar ?

El mtodo analtico debe estar

normalizado
antes de iniciar el proceso

de validacin

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 Etapas para desarrollar
un mtodo
analtico
2
1 2 DEFINIR LAS CONDICIONES
El equipo 4 VALIDAR
Los reactivos
El muestreo

3 EStANDARIZAR EL METODO
3 Prctico : tiempo, recursos
Encontrar las Idneo: preciso, exacto
condiciones ptimas

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 Validacin

de

Instrumentos calificados mtodos

y calibrados

Mtodos documentados
analticos
Patrones de referencia confiables
Analistas calificados

Integridad de la muestra
Documentados
La validacin de procedimientos analticos
requiere:
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 Plan maestro de validacin debe
incluir:
Calibracin

Calificacin de Personal
Mantenimient
o
Validacin de Mtodos
Analticos
Calificacin de Proveedores

Inspecciones Internas

Monitoreo
Microbiolgico y Fsico-
Qumico
Buenas Prcticas de
15 de 83
Laboratorio
 Validacin de
mtodos
analticos
Protocolo de validacin para mtodo
El propsito y el alcance
analtico debe especificar:

del
Responsabilidades y competencias
equipo de trabajo
no
Mtodo de ensayo normalizado y
documentado (los pasos del mtodo
pueden ser modificados durante la
validacin)

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 Protocolos de validacin
Lista de materiales y equipos
Las caractersticas de desempeo que se

evaluarn (especificidad, linealidad, etc)

y el Procedimiento para evaluarlas.
experimentos para cada parmetro)
Anlisis estadstico o frmulas

Criterio de aceptacin para cada parmetro de

desempeo (los criterios de aceptacin no
pueden ser cambiados para ajustarse a los
datos)
17 de 83
 Validacin de mtodos
analticos

Calificacin del instrumento

Marca, modelo y manual del fabricante

Modificaciones
Calificacin de la instalacin y de la

operacin

Programas de calibracin

Cronogramas de mantenimiento

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 Diferentes clases de ensayos
analticos
Clase A: Para establecer identidad

Clase B: Para detectar y cuantificar

impurezas
Clase C: Para determinar
cuantitativamente la concentracin
Clase D: Para evaluar las
caractersticas, disolucin,

uniformidad de contenido
Clasificacin OMS (Inf. 32, Anexo 5 Validacin de
mtodos analticos)

19 de 83
 Parmetros requeridos para la
Validacin OMS
C
Caracterstica A B B Cuantit D
Identific lmite ativas lmite caracter
acin cuantitati sticas
cualitati product
va o
va
Exactitud X X
termina X*
do
X
Precisin X X
X XX
Robustez X X
X X X
Linealidad e
Especificidad selectividad X X X X X

Lmite de deteccin X X
intervalo
Lmite de cuantificacin
X
* Se puede permitir un grado de desviacin
Categoras A,B,C,D segn OMS, La USP las clasifica como categora I, II, III, IV

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 Parmetros requeridos para la Validacin
USP 31
Caractersticas de Categora I Categora II de valoracin Categora III de Categora IV
Desempeo analtico de valoracin de valoracin
valoracin (caractersticas (pruebas de
Prod.Termi. Prueba de Prueba de lmite de desempeo, identificacin)
Graneles, lmite Cualitativa disolucin)
conservante Cuantitativa (metales pesados,
(impurezas en etc.)
frmacos)

Exactitud SI SI * * NO
Precisin SI SI NO SI NO
Especificidad SI SI SI * SI
Lmite de deteccin NO NO SI * NO

Lmite de NO * NO
cuantificacin NO SI
NO * NO
Linealidad SI SI
* * NO
Intervalo SI SI

* Puede ser requerido dependiendo de la naturaleza de la prueba especfica

21 de 83
 Extensin de la validacin

Mtodos nuevos requieren validacin

completa
Mtodos de Farmacopea requieren
validacin parcial (o verificacin)
Cambios significativos implican
revalidacin
cambios deparcial
equipo

cambios de frmula
cambios de proveedores de
reactivos crticos

22 de 83
 Transferencia de mtodos
analticos
Protocolo y procedimiento del mtodo de

transferencia

precisin

exactitud
Mtodo cientfico escrito y aprobado
Robustez competencia
Verificacin de la por el nuevo
Aceptacin formal

laboratorio

23 de 83
 Caractersticas generales de
desempeo
Especificidad (USP 31 ) Selectividad
(ICH)
Linealidad Reproducibilidad

Intervalo Tolerancia, fortaleza

o resistencia. USP 31
Lmites de cuantificacin
Lmites de deteccin

Exactitu Robustez
d
Precisi
n Aptitud del sistema

24 de 83
 ESPECIFICIDAD y SELECTIVIDAD

ICH Q2A y USP 31 (United States Pharmacopeia):

La capacidad de evaluar en forma inequvoca al
analito en presencia de los componentes cuya
presencia cabra esperar, tales como impurezas,
productos de degradacin y componentes de la
matriz. La falta de especificidad de un
procedimiento analtico individual puede
compensarse mediante otros procedimientos
analticos de apoyo.

La IUPAC, AOAC prefieren el trmino

selectividad 25 de 83
 Especificidad y Selectividad
Se utiliza en :

Identificacin: garantizar la identidad del analito

Pruebas de pureza: declaracin exacta del contenido de

impurezas de un analito (sustancias relacionadas, metales
pesados, disolventes residuales, etc.)
Valoracin: un resultado exacto que permite la
declaracin exacta del contenido o potencia del analito en
la muestra
En anlisis cualitativos: Debe tener la capacidad de
distinguir compuestos de estructura estrechamente
relacionada (productos de degradacin)
USP 31

26 de 83
caso 1 Productos relacionados
Especificidad (USP 29 ) Selectividad (ICH)

Muestra del
frmaco XX

Enantimero
estndar

27 de 83
caso 1 Productos de degradacin
Especificidad (USP 31 )
Selectividad (ICH)

Muestra del
frmaco XX bajo
condiciones
forzadas

28 de 83
 En un procedimiento analtico para
impurezas, la especificidad se puede
establecer:
Si se dispone de impurezas la especificidad puede
establecerse por adicin.
Se agregan cantidades conocidas (del frmaco o
producto farmacutico) con niveles adecuados de
impurezas y/o excipientes
Comparacin con muestras sin agregado de cantidades
conocidas
El resultado de la valoracin no se ve afectado por la
presencia de estos materiales: un resultado exacto que
permite la declaracin exacta del contenido o la
potencia del analito en una muestra

(Mtodo compendial 1225 USP 31)

29 de 83
 Especificidad
Pruebas de valoracin y de
impurezas

Si no se dispone de impurezas o de los

productos de degradacin puede demostrarse
la especificidad:
Comparando los resultados de las pruebas de
muestras que contengan impurezas o
productos de degradacin con los de un
segundo procedimiento bien caracterizado.

(Mtodo compendial 1225 USP 31)

Degradaciones forzadas relevantes

30 de 83
 Condiciones Forzadas Relevantes
caso 2
Producto farmacutico
calor
luz
humedad (85%)
Hidrlisis cida y alcalina
Oxidacin
vlidas otras
En algunos casos, pueden ser
El tiempo de exposicin, la temperatura
condiciones
y
la concentracin pueden ajustarse para
muestra.
obtener una degradacin adecuada
Mtodo compendial de
1225 USP 31 la

31 de 83
 caso 2 Cromatograma del diluyente

No se observan
retencin picos en los
del componente tiemposy de
principal las
impurezas.

32 de 83
 caso 2 Cromatograma de la solucin
estndar

entre s y del pico

Las impurezas principaldeben
conocidas (Resolucin 1,5)
estar separadas

33 de 83
 caso 2
Cromatograma de la muestra NO sometida a
condiciones forzadas de degradacin

34 de 83
 caso 2

Cromatograma de la muestra sometida a

estn separados
condiciones del pico
forzadas: losprincipal,
productos 1,5
R de degradacin

35 de 83
 LdeD, LdeC y RSR

Lmite de Cuantificacin
Lmite de
Deteccin
Relacin de Seal a Ruido

36 de 83
 LMITE DE

DETECCIN

USP 31 <1225>: la menor cantidad de analito que

puede detectarse en una muestra, aunque no
necesariamente cuantificarse, bajo las condiciones
del experimento indicadas. As, las pruebas de lmite
confirman simplemente que la cantidad de analito se
encuentra por encima o por debajo de un cierto
El LD es una caracterstica de las pruebas lmite
nivel.

La ICH cuando hay ruido de fondo recomienda que el clculo

del LD puede realizarse con un valor con el cual la relacin 37 de 83
entre seal y ruido (S/R) es 2:1 3:1.
 Determinacin del LD:
No instrumental

Mtodos no instrumentales:

anlisis de muestras con

concentraciones conocidas de el
analitos para establecer la
concentracin mnima a la cual
analito puede
Ejemplos: TLC,detectarse de
valoraciones
manera confiable.
volumtricas, comparaciones de
colores

38 de 83
 Determinacin del LD:
instrumental

Mtodos instrumentales:
anlisis de muestras con concentraciones conocidas de
analitos para establecer la concentracin mnima a la cual el
analito puede detectarse en forma confiable.
igual que para los mtodos no instrumentales
Cuando hay ruido de fondo la ICH sugiere una relacin seal ruido aceptable
de 2:1 3:1

39 de 83
 Estimacin del LD (ICH)
Otro enfoque sugiere la determinacin de la pendiente de la curva de
calibracin y la desviacin estndar de las respuestas.

LD = 3,3 /m

donde: = desviacin estndar (ruido) de la

respuesta
m = pendiente de lapara linealidad
curva de calibracin
El LD puede basarse en cualquiera de los
siguientes:
- del blanco
- del punto de linealidad de nivel ms bajo
- el grfico de calibracin (regresin)

40 de 83
 Ejemplos de pruebas de
lmites (validacin del
LD) del color
Pruebas de comparacin
(metales pesados <231>)
TLC (impurezas comunes
Mtodos
<466>)
Mtodos de precipitacin (prueba de

plomo en la monografa sobre xido

de zinc)

41 de 83
 Relacin entre seal y ruido

Pico B
LdC

Pico A
LdD

Lnea basal ruido

Cromatograma que muestra el ruido de lnea base

42 de 83
 Desviacin estndar del blanco

Ejemplo: Integracin de un pico cromatogrfico

Inyeccin
estndar

Inyeccin
blanco

43 de 83
 LMITE DE CUANTIFICACIN

La menor cantidad de analito en una

muestra que puede determinarse con
precisin y exactitud aceptables bajo las
condiciones del experimento
establecidas. USP 31 <1225>

En esencia, idntico a ICH Q2A

Lmite de cuantificacin (LC) = lmite de
cuantificacin (LOQ)

44 de 83
 Determinacin/Validacin
del LC
No instrumental:
a partir del anlisis de muestras con un
nivel adecuado mnimo de analito
cuantificado con exactitud y precisin
aceptables.
Instrumental:

igual que para los mtodos no

instrumentales, ms el hecho de que el
clculo del LC puede realizarse con un y
valor
ruido con el cual
es 10:1. USPla31relacin
(1225) entre seal
45 de 83
 Ejemplos de valoraciones
cuantitativas (validacin del LC)

Mtodos de valoracin volumtrica

(agua <921>)

Mtodos HPLC/GC (pureza

cromatogrfica)
Mtodos gravimtricos (prdida por
secado <731>)

46 de 83
 INTERVALO
El intervalo de un mtodo analtico es la
amplitud entre los niveles superior e inferior
del analito (incluidos estos niveles) que se
demostr que se determin con un nivel
adecuado de precisin, exactitud y
linealidad, utilizando el mtodo segn se
describe en el protocolo.
USP 31

47 de 83
 LINEALIDAD
La linealidad de un mtodo analtico es su
capacidad para obtener resultados de
prueba que sean proporcionales ya sea
directamente, o por medio de una
transformacin matemtica bien definida, a
la concentracin de analito en muestras en
un intervalo dado.
USP 31

48 de 83
 Evaluacin de linealidad
Debe utilizarse un mnimo de 5
puntos de datos para una
evaluacin adecuada

Inspeccin visual del grfico y

mtodo estadstico (lnea de
regresin, mnimos cuadrados)

49 de 83
 Consideraciones de linealidad e
intervalo para el protocolo de
validacin

Los criterios de aceptacin deben equilibrar el

rigor cientfico
Valor con las
mnimo: limitaciones
0,99 prcticas
hasta 0,9999
r 2
Linealidad:
Interseccin-y: estadsticamente no
significativa, dentro del n % de la respuesta de
la solucin estndar
Apto para la valoracin mediante un estndar
de un solo punto

Intervalo: necesario para resultados exactos y

precisos
50 de 83
 Linealidad e intervalo
Linealida
d Tabla de valores
de un analito en un
material
(x,y)
Material de
Material de
referencia
referencia
mg/ml
0.040 mg/ml
Analito calculado en

0.035 # x y
0.030
1 0.0100 0.0101
0.0150
0.025 2 0,0155
3 0.0200 0,0207
0.020 0.0250 0.0256
mg/ml

0.015 4
0.0300 0.0298
0.010
5
0.015 0.02 0.025 0.03 0.035 0.04
0.0400 0.0401
Material de referencia 6
mg/ml

51 de 83
 Estadstica de linealidad
Taller 1
Una vez realizada la curva hacer el tratamiento estadstico
aplicando el principio de la linealidad:

Ecuacin de la lnea recta:

y = a +bx
a= y -bx

(xi-x)(yi-y)
b=
(xi-x)
52 de 83
 Estadstica de linealidad
Intercepto (a)

Lmite de Linealidad e Interval

mg/ml -0.00056
Pendiente (b) 0,988857

Coeficiente de correlacin o 0.005
Pearson 0.99952( r )0.040
Coeficiente de determinacin (r2) =99,90%

Desviacin estndar relativa (CV%) del
procedimiento 1,37%
El test del coeficiente de los factores de respuesta
menor del 5% indica linealidad . AEFI 2001

53 de 83
 Comentarios con relacin a los
datos ANOVA
El grfico muestra que el modelo ajustado corresponde a un
modelo lineal que describe la relacin entre lo esperado y lo
obtenido y que responde a una lnea recta y que permite hacer
predicciones sobre otros valores corregidos
y = 0,00056+ 0,988857*x
Como el P-value en la tabla ANOVA es menor que 0.01, existe una
relacin estadsticamente significativa entre la concentracin del
material de referencia y el resultado obtenido sobre las
soluciones, a un nivel de confianza del 99% .
The R-Squared estadstico indica que el modelo ajustado explica
el 99,90% de la variabilidad en los resultados obtenidos. El
coeficiente de correlacin igual a 0,99952, indica una relacin muy
fuerte entre las variables. El error estndar estimado, de los
residuales, muestra una desviacin estndar de 0,00038099. Este
valor puede ser usado para construir lmites de prediccin para
nuevas observaciones.

54 de 83
 Anlisis de regresin
pendiente y residuales
Interseccin-y,

y
x
Respuest

y/x = pendiente

y = residual
a

Interseccin
-
0 0,05 0,1 0,15 0,2

Concentraci
n

55 de 83
 Caractersticas de los
procedimientos analticos

Exactitud
Precisin

Repetibilidad

Reproducibilidad

56 de 83
 Relacin entre
exactitud y precisin

inexacto e
impreciso

Exacto y preciso
precisopero Exacto pero
impreciso
inexacto
57 de 83
 Exactitud

Calculado como el porcentaje

de analito recuperado o

por la diferencia entre el valor

obtenido y el valor real
58 de 83
evaluado estadsticamente
 Exactitud

Prueba de un Estndar de Referencia

una
Mezcla con excipientes (placebo con
cantidadde
5maneras agregada conocida)
determinar la
exactitud
Agregado de estndar (muestra con

cantidad agregada conocida)

Comparacin con un
Se deduce a partir de mtodo
los datosreconocido
de
como exacto (mtodo
especificidad de referencia)
y linealidad.
59 de 83
 PRECISIN

Elgrado de coincidencia entre los

resultados de las muestras
individuales de una muestra
homognea

Laprecisin debe evaluarse a travs

del intervalo de cuantificacin
especificado en el mtodo
60 de 83
 Precisin comparada
con exactitud
La exactitud se expresa como %
de recuperacin

La precisinEstndar
Desviacin se expresa como(RSD)
Relativa

61 de 83
 Precisin

Valoracin de las muestras individuales de

una preparacin homognea

Calcular la desviacin estndar o la
Determinacin:
desviacin estndar relativa
La precisin del mtodo debe incluir todas las
fuentes de variacin desde la preparacin de la
muestra hasta el redondeo del resultado final de
la prueba

62 de 83
 Niveles de precisin ICH-

USP

resultados del mismo laboratorio, pero en das

distintos con analistas
Repetibilidad: y equipo
coincidencia diferentes
dentro de un
(segn
periodocorresponda)
corto para el mismo analista con la
misma instrumentacin
Reproducibilidad:
Precisin coincidencia
resultadosintermedia:
entre laboratorios en los
(como
coincidencia enlos
en un
estudio colaborativo).

63 de 83
 Precisin

Lmite de valoracin (%) % RSD mxima

Repetibilidad
99,0 101,0 (5 inyecciones repetidas)
0,37 1
98,5 101,5 0,55 1
98,0 102,0 0,73 1
95,0 105,0 1,9 2
90,0 110,0 3,9 2
Impurezas 5 a 25 2
- dependiendo del nivel
1 Pharmaeuropa, 11(4), 571-577
DER = Desviacin estndar Relativa (RSD) 2
Pharm. Technol., 6(9), 120-137

64 de 83
 Precisin
Precisin intermedia:
La FDA recomienda un mnimo de 2 das distintos con
analistas diferentes.
FDA (CDER), Gua del revisor: Validacin de
mtodos cromatogrficos, nov. 1994
Criterios de aceptacin:
Realizar la prueba-F, los resultados intra
laboratorios no deben ser estadsticamente
distintos.
Tpicamente, alrededor de 2 veces la s o el CV% de
la repetibilidad
Sin embargo, una diferencia estadstica puede no
ser significativa (consideracin prctica).
Necesidad de evaluar la aptitud para la indicacin
de los mtodos
65 de 83
 TOLERANCIA, FORTALEZA

Ladel
tolerancia es el grado
mtodo analtico, ende REPRODUCIBILIDAD
diversas condiciones:
Variabilidad causada por :
Variaciones de da a da
De analista a analista

De laboratorio a laboratorio
De instrumento a instrumento

De columna cromatogrfica a
columna
cromatogrfica

De estuche de reactivos a estuche de reactivos
Inestabilidad de los reactivos analticos

ICH PRECISIN INTERMEDIA
66 de 83
 ROBUSTEZ
La USP 31 la define como una medida de la
capacidad del mtodo analtico, y demuestra
que no resulta afectado por pequeas pero
deliberadas variaciones en los parmetros
del mtodo y proporciona una indicacin de
su confiabilidad durante su uso normal.

TRANSFRENCIA DE MTODOS

67 de 83
 APTITUD DEL

SISTEMA

Si las mediciones son susceptibles a variaciones

en condiciones analticas, stas deben controlarse
Las pruebas de aptitud
adecuadamente del sistema
o incluirse se basan
en el mtodo una en
eldeclaracin
concepto que el equipo, el sistema electrnico,
preventiva.
las operaciones analticas y las muestras a
analizar constituyen un sistema integral que
puede evaluarse como tal.
Las inyecciones repetidas de una preparacin
estndar empleada en la valoracin u otra
solucin estndar se comparan para determinar si
cumplen con los requisitos de precisin.
USP 31 (621)
 APTITUD DEL SISTEMA

R = (N
Resolucin ) ( se -tiene
R cuando 1 /masde)un( k
analito k + 1
/ )
E f i c i ec Ca a c i a
n ia p d d
Se l e c t i v
id a d

USP 31 (621)
69 de 83
 APTITUD DEL

SISTEMA

el
A menos que se especifique algo diferente en la
monografa individual,
Las inyecciones se emplean
repetidas los datos deestndar
de una preparacin cinco
inyecciones
empleada enrepetidas del analito
la valoracin para calcular
u otra solucin la se
estndar
desviacin estndar
comparan para relativasis,cumplen
determinar si el requisito
con losesrequisitos
2% o
menos.
de precisin.

Se emplean los datos de seis inyecciones repetidas si

requisito de s es ms de 2%. USP 31 (621)
70 de 83
 APTITUD DEL

SISTEMA
El factor de asimetra T, es una medida de la asimetra
del pico, es la unidad para los picos perfectamente
asimetra del
simtricos y supico aumenta,
valor aumentala aintegracin
medida quey la
por lo tanto
asimetra
la
esprecisin se tornanEn
ms pronunciada. menos confiables.
algunos casos, pueden
observarse valores menores a la unidad A medida que la
Estas pruebas se realizan
mediante la recoleccin de
datos de inyecciones
repetidas del estndar u
otras
soluciones, segn se
especifique en al monografa
individual
USP 31 (621)
71 de 83
 APTITUD DEL
SISTEMA

los parmetros de aptitud del sistema se determinan a partir

Aunque
del pico una monografa especifique los parmetros definitivos
del analito.
que se deben utilizar, esto no impide utilizar otras condiciones
operativas adecuadas y puede ser necesario realizar ajustes
en las condiciones operativas, para cumplir con los requisitos
de aptitud del sistema.
A menos que se especifique algo diferente en la monografa,

USP 31 (621)
72 de 83
 APTITUD DEL SISTEMA
Se permite ajustes slo cuando se encuentran disponibles
estndares adecuados, (incluyendo los de referencia), de
todos los componentes usados en la prueba de aptitud del
sistema y slo cuando estos estndares sean los usados para
demostrar que los ajustes han mejorado la calidad de la
cromatografa en cuanto a los requisitos de cumplimiento de
aptitud del sistema .

Mltiples ajustes pueden tener un efecto acumulativo en el

desempeo del sistema y deben considerarse antes de
implementarlos.

USP 31 (621)
73 de 83
 APTITUD DEL
SISTEMA

pH de la fase mvil 0,2 unidades

Concentracin de la solucin amortiguadoras : se permite 10%
siempre y cuando conserve la variacin de pH
Relacin de los componentes de la fase mvil: c10% absoluto y
Se puede considerar cada una de las siguientes variaciones
30% relativo
mximas, a menos que la monografa indique algo diferente.
Longitud de onda del UV-visible: Error permitido mximo
del detector 3 nm
Longitud de la columna puede ajustarse hasta el 70%
Dimetro interno CG, HPLC 25%
Longitud de la columna de HPLC 50%
USP 31 (621)
 APTITUD DEL SISTEMA
HPLC tamao de partcula puede reducirse hasta 50%
CG Tamao de la partcula conserva el cociente de intervalo
entre la ms grande y la ms pequea
Velocidad de flujo puede ajustarse hasta 50%
Volumen de inyeccin reducirse hasta los LD , LC y precisin
aceptados
Temperatura de la columna puede ajustarse hasta 10%
Temperatura de horno puede ajustarse hasta 10%
Programa de Temperatura horno CG hasta 20%

A MENOS QUE SE ESPECIFIQUE OTRA COSA los

parmetros de aptitud del sistema se determinan a partir
del pico del analito.

USP 31 (621)
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 APTITUD DEL SISTEMA
Los tiempos de retencin relativos son slo informativos,
facilitan la identificacin de los picos.
Para determinar la eficacia del sistema operativo final, se lo
debe someter a una prueba de aptitud.
Las inyecciones repetidas de la preparacin estndar
requeridas para demostrar que la precisin del sistema es
adecuada , pueden realizarse antes de inyectar las
muestras o intercalarse entre las inyecciones de las
muestras.
Se debe demostrar la aptitud del sistema durante toda
la corrida mediante inyecciones de una preparacin
control adecuada a intervalos apropiados, incluso al final
del anlisis.

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 APTITUD DEL SISTEMA
La preparacin control puede ser una preparacin estndar o
una solucin que contenga una cantidad conocida, y
cualquier otro material adicional til para el control del
sistema analtico. Como por ejemplo impurezas o
excipientes.
Siempre que haya un cambio significativo en el equipo
o en
un reactivo crtico, la prueba de aptitud debe realizarse antes
de inyectar las muestras,
Ningn anlisis de muestras es aceptable a menos que
cumpla los requisitos de aptitud del sistema. Los anlisis de
muestras obtenidos cuando el sistema no cumple con la
condicin de aptitud es inaceptable.

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 Verificacin de procedimientos
farmacopicos
Los usuarios de los procedimientos analticos
farmacopicos no necesitan validar estos
procedimientos cuando los usan por primera
vez, aun cuando debe establecer evidencias
documentadas de aptitud en las condiciones
reales, FDA estableci este requisito en el
punto 21 CFR 211.194 a 2 . Se verificar la
aptitud de todos los mtodos de prueba
usados bajo las condiciones reales de uso .

No incluye los microbiolgicos

78 de 83
 Verificacin de procedimientos
farmacopicos

que los procedimientos se llevan a cabo con la

aptitud
EL requerida
PROCESO DE VERIFICACION, da confianza en

Si la verificacin no es exitosa y la consulta y

asistencia del personal USP, no logra solucionar el
problema, se puede concluir que el procedimiento
posiblemente, no es apto para usar en el artculo que
se est evaluando en el laboratorio y entonces se
hace necesario validar el mtodo analtico.

USP 31 (1226)

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 Verificacin de procedimientos
farmacopicos
REQUISITOS DE LA VERIFICACION
Evaluar la complejidad del procedimiento y del
material sometido a anlisis. Se usan algunas de las
caractersticas del desempeo analtico, las que se
consideren adecuadas, la extensin depende de la
formacin y competencia del analista, el tipo de
procedimiento, el equipo e instrumentos asociados,
los pasos especficos del procedimiento y el artculo,
por ejemplo exactitud por las diferentes matrices. LD
y LC

USP 31 (1226)
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 Reporte de Validacin
OObjetivo y alcance del mtodo,
aplicabilidad

0 Tipo de analito y la matriz sobre

la que se hizo la validacin,
Detalles del analito, reactivos,
estndares de referencia y control
y estabilidad de las muestras
preparadas.
P r o c e d i m i e n t o para la
verificacin de la calidad de los
estndares y reactivos qumicos usados

6 Condiciones de 81 de 83
 Reporte de Validacin
Parmetros del mtodo

0 Parmetros crticos establecidos a

travs del test de robustez

Listado de equipos,
funcionamiento, condiciones de
desempeo. IQ,OQ,PQ Detalle de las condiciones y
fuecmo
realizado el proceso, incluyendo la
preparacin de la muestra

Tratatamiento estadstico y clculos

realizados
11 Procedimientos de control rutinario

82 de 83
 Reporte de Validacin

Registros como cromatogramas,

12

espectros y curvas de calibracin

13 test de aceptacin de las variables

14
Resultados de la incertidumbre de
la medicin
16 Persona que desarroll y valid el
15
Criterios para revalidacin
mtodo inicialmente

17
Resumen y conclusiones

83 de 83