UNIVERSIDADE FEDERAL DO RIO GRANDE DO NORTE

FACULDADE DE FARMCIA

ANLISE E EXTRAO DE PROTENAS TOTAIS DO LEITE

O DE BIURETO | MTODO DE BRA

TODO DE BIURETO
O mtodo se baseia na reao do reativo do biureto,
que constitudo de uma mistura de cobre e hidrxido
de sdio com um complexante, o tartarato de sdio
que estabiliza o cobre em soluo

O cobre, em meio alcalino, reage com as

protenas presente na amostra, formando um
complexo com a ligao peptdica
iais e Equipamentos

BALANA ANALTICA BANHO-MARIA PIPETAS ESPECTROFOTMET

RO UV-VIS

BALO TUBOS DE ENSAIO

PROVETA
VOLUMTRICO
AMOSTRA
o da Amostra
Realizar a diluio da
amostra 1:25

PIPETAR 0,4 ML DA AMOSTRA EM UM COMPLETAR O VOLUME COM GUA

BALO VOLUMTRICO DE 10 ML. DESTILADA E HOMOGENEIZAR
RESERVAR A AMOSTRA DILUDA
lise da Amostra
A PARTIR DA SOLUO PADRO DE ALBUMINA 10 MG/ML

PESAR 10mg de ALBUMINA

ADICIONAR 1 mL de GUA DESTILADA

SERO PREPARADAS SOLUES DILUDAS

DE CONCENTRAO DE 2,4,6 E 8 mg/mL

EM PARALELO, O BRANCO E A AMOSTRA

2 mg/mL 4 mg/mL 6 mg/mL 8 mg/mL

BRANCO AMOSTRA
lise da Amostra

TOMAR 7 TUBOS DE ENSAIO E MARC-LOS 1, 2, 3, 4, 5, BRANCO E

AMOSTRA
1 2 3 4 5

BRANCO AMOSTRA
lise da Amostra

ADICIONAR EM SEGUIDA, FORAM ADICIONADOS A GUA

A SOLUO DESTILADA E O REATIVO DE BIURETO NOS TUBOS
PADRO DE
ALBUMINA
lise da Amostra
CONFORME A TABELA DESCRITA ABAIXO, OS TUBOS FORAM
IDENTIFICADOS E FORAM ADICIONADAS SUAS RESPECTIVAS
QUANTIDADES DE SUBSTNCIAS NECESSRIAS PARA REALIZAR A
ANLISE
lise da Amostra
EM SEGUIDA, OS TUBOS FORAM INCUBADOS
POR 15 MINUTOS EM BANHO-MARIA A 37C.
lise da Amostra
TRANSFERIR UMA ALQUOTA DE CADA
TUBO PARA A CUBETA DO
ESPECTROFOTMETRO

AJUSTAR O COMPRIMENTO DE
ONDA PARA 540 nm

CALIBRANDO
COM O BRANCO
lise da Amostra
LER AS ABSORBNCIAS
DE TODOS OS TUBOS
1 2 3 4

AMOSTRA

EM SEGUIDA, CONSTRUIR UM
GRFICO
ABSORBNCIA X CONCENTRAO
DE ABULMINA
TODO DE BRADFORD
Este mtodo baseado na interao entre o
corante Coomassie brilliant blue e macromolculas
de protenas que contm aminocidos de cadeias
laterais bsicas ou aromticas.

No pH de reao, a interao entre a protena de

alto peso molecular e o corante provoca o
deslocamento do equilbrio do corante para a
forma aninica.
iais e equipamentos

PIPETADOR
BALANA ANALTICA BQUER
AUTOMTICO

AMOSTRA

ESPECTROFOTMET
RO
TUBOS DE ENSAIO
GUA DESTILADA
o da Amostra
A diluio deve ser realizada quando a
concentrao de protenas na amostra for
superior a 2 g/L

TRANSFIRA 0,25 mL DE AMOSTRA EM UM BALO VOLUMTRICO DE 10

mL E DILUIR A AMOSTRA NA PROPORO DE 1:40 COM GUA
DESTILADA E HOMOGENEIZAR
lise da Amostra

TRANSFERIR 100 L DA AMOSTRA E EM SEGUIDA ADICIONAR 3,0

DILUDA PARA UM TUBO DE ENSAIO mL DO REAGENTE DE
BRADFORD.
lise da Amostra
REALIZAR ESTE PROCEDIMENTO EM DUPLICATA

REALIZAR O TESTE EM BRANCO, SUBSTITUINDO

A AMOSTRA POR GUA. AGUARDAR 15 MINUTOS

CONFORME A TABLEA ABAIXO, ADICIONAR A

QUANTIDADE DE CADA SUBSTNCIA NOS TUBOS
lise da Amostra
LER A ABSORBNCIA NO COMPRIMENTO DE ONDA EM
595nm.

O CLCULO PARA DETERMINAO DE PROTENAS PELO

MTODO DE BRADFORD DEVER SER FEITO ATRAVS DA
CURVA PADRO DE ALBUMINA
 UNIVERSIDADE FEDERAL DO RIO GRANDE DO NORTE
FACULDADE DE FARMCIA

VDEO DESENVOLVIDO PELOS ALUNOS DA

DISCIPLINA DE BROMATOLOGIA

DISCENTES:
| MRJORE FERRAZ | MILENA SANTOS | SUNAMITA BARBOSA

NATAL- RN- 2016