Espectrometra de Masas

EQUIPO 4
Castro Robles Surisaday
Prez Moreno Melisa
Rodrguez Vsquez Karen Lizette
Romero Flores Esau
Rosas Aquino Pablo
Snchez Huerta Hugo
HISTORIA
En 1886, Eugen Goldstein observ rayos de descarga
en gases a baja presin que viajaban lejos del nodo y
a travs de canales en un ctodo perforado, opuestos
a la direccin de los rayos catdicos cargados
negativamente (que viajan desde el ctodo al nodo).
Goldstein llam a estos rayos de nodo con carga
positiva Kanalstrahlen (rayos canales).
Wilhelm Wien encontr que fuertes campos elctricos o
magnticos desviaban esos rayos canales y, en 1899,
construy un dispositivo con campos elctricos y
magnticos paralelos que separaba los rayos positivos en
funcin de su relacin carga-masa.
El cientfico ingls Thomson, que estaba interesado en
medir la relacin masa-carga del electrn, mejor ms
tarde en el trabajo de Wien reduciendo la presin para
crear el primer instrumento similar a un
espectrmetro de masas.
 INTRODUCCIN
La Espectrometra de Masas es una poderosa tcnica microanaltica usada
para identificar compuestos desconocidos, para cuantificar compuestos
conocidos, y para elucidar la estructura y propiedades qumicas de molculas.
La deteccin de compuestos puede ser llevada a cabo con cantidades
realmente pequeas (algunos pmoles) de muestra y obtener informacin
caracterstica como el peso y algunas veces la estructura del analito.

El proceso de anlisis por espectrometra de masas comienza en llevar el

compuesto a analizar a fase gaseosa, la muestra debe tener una presin de
vapor de que 10-2 mmHg, debido a que las molculas deben migrar por
difusin desde el sistema de entrada hacia la cmara de ionizacin
 Espectrometra de masa

Espectrometra Espectroscopa
(Medicin de un rango) (implica absorcin o
emisin de energa radiante)

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 DEFINICIN
La espectrometra de masas es quizs la de mayor
aplicacin, en el sentido de que esta tcnica es capaz
de proporcionar informacin acerca de:

Composicin elemental de las muestras

Estructura de las molculas inorgnicas, orgnicas y
biolgicas
Composicin cualitativa y cuantitativa de mezclas
complejas
Relaciones isotpicas de tomos en las muestras
Es un artefacto que permite analizar con gran
precisin la composicin de diferentes elementos
Mediante el anlisis es posible obtener
informacin de la masa molecular del compuesto
analizado as como obtener informacin
estructural del mismo, o simplemente detectar su
presencia y/o cuantificar su concentracin.
 INSTRUMENTACIN
Esencialmente, el espectrmetro de masas debe ser capaz de
desempear cuatro funciones:
1) El espectrmetro de masas debe ser capaz de vaporizar
substancias de volatilidades muy diferentes.
2) Una vez volatilizada la muestra, el espectrmetro debe ser
capaz de originar iones a partir de las molculas neutras en
fase gaseosa.
3) Una vez generados los iones, el espectrmetro debe ser
capaz de separarlos en funcin de su relacin masa/carga.
4) Una vez separados los iones, el espectrmetro debe ser
capaz de detectar los iones formados y registrar la
informacin adecuadamente.
 Es un instrumento que mide las masas de molculas individuales
que han sido convertidas en iones, no mide la masa molecular
directamente, pero mide la relacin masa/carga de los iones
formados de las molculas

Los espectrmetros de masas tienen siete componentes mayores:

Sistema de entrada
Fuente de iones
Analizador de masas
Detector
Sistema de vaco
Sistema de control
Sistema de datos
El espectrmetro de masas mide razones carga/masa
deiones, calentando un haz de material del
compuesto a analizar hasta vaporizarlo e ionizar los
diferentestomos.

El haz de iones produce un patrn especfico en el

detector, que permite analizar el compuesto.
En la industria es altamente utilizada en el
anlisis elemental de semiconductores,
biosensores, frmacos, productos de sntesis
qumica, anlisis forense, contaminacin
medioambiental, perfumes y todo tipo de
analitos que sean susceptibles de pasar a fase
vapor e ionizarse sin descomponerse.
 Espectrometra de masa

Espectrmetros de masa
(configuraciones para grandes biomolculas)

MALDI-TOF: Matriz Assisted Laser Desorption/Ionization-

Time of Flight

ESI-Q: ElectroSpray Ionization-Quadrupole

ESI-IT: ElectroSpray Ionization-Ion Trap

FT-MS: Fourier-Transform Ion Cyclotron Resonance

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Analizadores de masas

Efecto de campos magnticos sobre los iones

Principios de los analizadores de masas
Espectrmetro de masas de sector magntico (Magnetic Sector Mass
Spectrometer)
Espectrmetros de masas de cuadrupolo (quadrupole)
Analizador de Tiempo de Vuelo (Time-of-flight TOF)
Analizadores de trampa de iones (Ion-Trap)
Analizador FT-ICR (Fourier Transform Ion Cyclotron Resonance)
 Espectrometra de masa

Espectrmetro de masa
Muestra

Entrada:
Analizador
Volatilizacin/ Detector
de masas
Ionizacin

MALDI TOF
ESI Cuadrupolo Alto
Tampa de Iones Vaco
FTICR
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Sector Magntico
Metodos de ionizacin

Impacto Electrnico (Electron Impact EI)

Ionizacin Qumica (Chemical Ionization CI)
Ionizacin de Campo (Field Ionization FI)
Desorcin de Campo (Field Desorption FD)
Bombardeo con tomos Rpidos (Fast Atom Bombardment FAB)
Ionizacin por Electrospray (Electrospray Ionization ESI)
Matrix-Assited Laser Desorption/Ionization (MALDI)


Impacto Electrnico (Electron Impact EI) El Impacto Electrnico

(Electron Impact EI) o comnmente llamado Ionizacin
Electrnica (Electron Ionization EI) es un mtodo clsico de
generacin de iones en espectrometra de masas utilizado an
en muchas aplicaciones.

Ionizacin Qumica (Chemical Ionization CI) La Ionizacin

Qumica (Chemical Ionization CI) es un mtodo de ionizacin
relativamente suave, y es el primer mtodo de ionizacin suave
introducido a la espectrometra de masas. La ionizacin es
afectada por reacciones sobre la molcula con iones de un
reactivo gaseoso generados por medio de ionizacin de impacto
electrnico (EI) con molculas del analito neutras.
 Ionizacin de Campo (Field Ionization FI) La Ionizacin de Campo
(Field Ionization FI) es un mtodo de ionizacin suave. La muestra
es introducida por las mismas tcnicas que en EI y CI. La ionizacin
de campo lleva el riesgo de descomposicin trmica de la muestra.

Desorcin de Campo (Field Desorption FD) La Desorcin de

Campo (Field Desorption FD) es un mtodo de ionizacin muy
suave utilizado en espectrometra de masas. Este mtodo esta
basado en el de Ionizacin de Campo (Field Ionization FI), FD ha
sido desarrollado al combinar la desorcin y la ionizacin del
analito, pero no hay necesidad de evaporacin antes de la
ionizacin, generando iones con muy baja energa interna y casi
nula fragmentacin.

 Bombardeo con tomos Rpidos (Fast-Atom

Bombardment FAB) Los mtodos de desorcin de partculas
fueron desarrollados en los 70s y 80s, y a diferencia del
mtodo de desorcin de campo (field desorption), evito
complicaciones en diseo de equipo y preparacin de la
muestra. FAB es un mtodo de ionizacin suave, resulta de
la combinacin de desorcin del analito desde una fase
condensada (mezcla de analito slido+matriz) con su
subsecuente ionizacin. La matriz esta formada de
molculas orgnicas (glicerol o 3-nitrobencil alcohol) que
mantienen una superficie homognea para el bombardeo.
 Ionizacin por Electrospray (Electrospray Ionization ESI).
La Ionizacin por Electrospray (ESI) es uno de los mtodos
de ionizacin mas recientemente desarrollados en
espectrometra de masas. El diseo y operacin de fuentes
de ionizacin por electrospray usadas comnmente en los
espectrmetros de masas estn basados en diseos
descritos por Fenn y colaboradores en 1985. Este mtodo
es llevado a cabo a presin atmosfrica a diferencia de
otros mtodos, por lo que se le conoce tambin como un
mtodo de ionizacin a temperatura ambiente
(atmospheric pressure ionization API).
 Espectrometra de masa

Ionizacin por MALDI:

(Matrix assisted Laser desorption/ionization)

Las Biomolculas se mezclan con una matriz que absorbe

energa de un laser y al disiparla produce la coevaporacin
de la muestra:

La energa agregada hace que la matriz explote, llevando

la protena cargada hacia la entrada del analizador.

El proceso de desorcin est asociado con una transferencia de H+.

Las protenas cargadas son dirigidas al analizador mediante

un campo elctrico
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 Espectrometra de masa

MALDI-TOF
Se determina la masa de las molculas cargadas de acuerdo
a su tiempo de vuelo(t).

t (m/z)1/2
las partculas con menor m/z llegan antes al detector

No tienen muy buena resolucin, pero son robustos, simples y

tienen un virtualmente ilimitado rango de masas (300 kDa)

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 Espectrometra de masa

MALDI
Desorcin/Ionizacin por Laser
Asistida por Matriz

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 Espectrometra de masa

MALDI-TOF

Sin E, iones a la deriva

E
+ -
Fig. Separacin por TOF
+
+ + +

s D
Fuente Detector
mv2 = zeEs v = (2zeEs/m)
t = D/v = (m/2zeEs)D m/z = 2eEs(t/D)2 26
 Espectrometra de masa

Tubo de
vuelo
4-25 kV
Detector

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Carlos Cerveansky
 Espectrometra de masa

Tubo de
vuelo
4-25 kV
Detector

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Carlos Cerveansky
 Espectrometra de masa

MALDI-TOF

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 Espectrometra de masa

ESI-Q
ElectroSpray Ionization - Quadrupole

Las Protenas se introducen al analizador por un capilar

sometido a un fuerte voltaje, rodeado por un flujo de N2
(gas secante).

El fuerte voltaje hace que se formen gotas muy pequeas

cargadas (spray), donde el solvente termina de evaporarse
y las protenas cargadas viajan hacia el analizador

El Analizador es un filtro de masa cuadrupolo

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 Espectrometra de masa

ESI

N2

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 Espectrometra de masa

ESI

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 Espectrometra de masa

ESI-Q
Al analizador de masas de Cuadrupolo se le llama
Filtro de Masas porque normalmente transmite iones de
un pequeo rango de m/z, todos los otros iones son
neutralizados y eliminados.

Variando las seales elctricas de un cuadrupolo es posible

variar la m/z y realizar un barrido espectral

Consiste en cuatro barras cilndricas metlicas que sirven de

electrodos del filtro de masas

Robustos, baratos y tienen tiempos de barrido breves, no tienen

muy buena resolucin y el rango de m/z llega hasta 3000
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 Espectrometra de masa

ESI-Q

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 Espectrometra de masa

ESI-Q

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 Espectrometra de masa

ESI-Q

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VENTAJAS
Anlisis cualitativo y cuantitativo.
Identificacin de una substancia en presencia de otras
similares
Alta sensibilidad
Tcnica universal y especfica
Informacin isotpica.
Informacin estructural, energas de enlaces, cintica,
Informacin estructural, energas de enlaces, cintica,
fisicoqumica, etc. fisicoqumica, etc.
Tcnica rpida (anlisis en lnea en tiempos reales, control de
Tcnica rpida (anlisis en lnea en tiempos reales, control de
procesos enzimticos, metablicos, etc)
APLICACIONES
Detectar e identificar el uso de frmacos de
abuso en atletas (antidoping)
Monitorear los gases de la respiracin en
pacientes durante ciruga
Determinar la composicin de materiales
provenientes del espacio exterior
Determinar adulteracin en la miel de abeja
Localizar depsitos petroleros (midiendo
precursores del petrleo en rocas).