Clube de Revista

Mestranda: Tamara Silva

Orientadores: Prof. Pedro H. Cabello
Prof. Jerson Laks
Otubro 2016, Vol 53, Issue 8, pp 57725781
DOI 10.1007/s12035-015-9484-8
 Doena considerada progressiva, neurodegenerativa
e irreversvel

Pode se apresentar nas

formas
Precoce
Tardia (+ 65 anos)

Fatores genticos e
ambientais
Neurology.com
 Caracterizao da DA

Formao de placas senis (SPs) e emaranhados

neurofibrilares (NFTs)
Acmulo da protena -amilide

Acmulo da protena Tau

Leso e perda progressiva

de neurnios
Declnio da funo cognitiva
Neurologytime.com
Protena -amilide

Adaptado de Schu et al., 2012

 Liberao de -amilide

Perturbao na
plasticidade neural

Espcies reativas de O2
promovendo a disfuno
mitocondrial do neurnio

Danos das sinapses e Morte dos

o favorecimento da neurnios
neuroinflamao e da
neurotoxicidade

Apoptose e deteriorao dos

sistemas de neurotransmissores
Nassif et al., 2005
Protena Tau

Nassif et al., 2005

 Hiperfosforilao da
protena Tau

Formao de
filamentos helicoidais

Formao de emaranhados
neurofibrilares nos neurnios
Morte dos
neurnios
Danos das sinapses e o
favorecimento da neuroinflamao
e da neurotoxicidade
Nassif et al., 2005
 Perturbao na
plasticidade neural

Danos das sinapses e o

favorecimento da
neuroinflamao e da
neurotoxicidade
Morte dos
neurnios
Apoptose e deteriorao
dos sistemas de
neurotransmissores

Nassif et al., 2005

Adaptado de Meraz-Ros et al., 2013
 Atualmente muitos grupos de pesquisa tem se
concentrado em estudos de expresso gnica e
dosagem de protenas

miRNAs

Reguladores de expresso gnica

 miRNAs
Classe de pequenas molculas de RNA (20 a 24
nucleotdeos) no codificantes
Controlam a expresso dos genes

Atuam por mecanismo de pareamento com RNAm

Impedem a formao de protenas

Genet, 2014
 Atualmente, uma srie de publicaes de pesquisas
tanto em animais quanto em humanos indicam que
os miRNAs so significativamente hiperexpressos na
Doena de Alzheimer.
 A avaliao de miRNAs especficos a partir de
bipsias do tecido cerebral de pacientes (post-
mortem) limitada quanto a funo de
biomarcadores para o diagnstico, prognstico e
confirmao da DA.
 Entretanto, pesquisas incluindo sangue perifrico,
plasma, soro e saliva tem revelado um melhor
potencial (mais homogneas e menos invasivas).
Clulas mononucleares de sangue perifrico (PBMC)

linfcitos (clulas T , clulas B

e clulas NK), moncitos, e
clulas dendrticas.
 Objetivo

Analisar o perfil de miRNAs em clulas

mononucleares de sangue perifrico (PBMC) em
pacientes com Doena de Alzheimer e em controles
para identificar quais miRNAs podem ser potenciais
biomarcadores da doena.
 Materiais e Mtodos
Sujeitos da pesquisa

Department of Neurology of Ruijin Hospital afiliado with Shanghai Jiao Tong

University School of Medicine

Shanghai community population

 Materiais e Mtodos

Genotipagem do APOE 4 e avaliao de A40 pelo soro

Extrao de RNA e Array para miRNA

PCR em tempo real

Anlise de bioinformtica

Cultura e Transfeco de clulas

Ensaio de Luciferase

Anlise de Western Blotting de BACE1

 Materiais e Mtodos

Anlise estatstica
SPSS

Significncia P <0,05
 Resultados / Discusso

Identificao dos miRNAs diferenciados das PBMC

Validao por PCR dos miRNAs significantes das PBMC
Correlao entre os miRNAs diferenciados, o fentipo clnico e
as anlises da curva de ROC
Correlao entre os miRNAs diferenciados, o fentipo clnico e
as anlises da curva COR
Cultura de clulas

50% de DMEM
50% de Opti-MEM
Suplementado com 150 g/ml de G418 + 10% de FBS a 37 e 5% de CO2
incubadora humidificada
Transfeco com APP695 humano (APPswe)

cultivocelularua.com/N2a
Previses alvo e validao biolgica de miRNAs diferenciados:
inibio da expresso de BACE1
Previses alvo e validao biolgica de miRNAs diferenciados:
inibio da expresso de BACE1
Previses alvo e validao biolgica de miRNAs diferenciados:
inibio da expresso de BACE1
Previses alvo e validao biolgica de miRNAs diferenciados:
inibio da expresso de BACE1
Discusso
 Concluso

O estudo analisou o perfil de miRNA de PBMC em pacientes

com DA para identificar 2 miRNAs especficos como
biomarcadores potenciais para o diagnstico de DA em
combinao com fentipo clnico.

Investigou ainda os mecanismos celulares possveis de 2 DE

miRNAs aqui implicados que podem estar envolvidos na DA
atravs da inibio da expresso da protena BACE1.
 Concluso

Entretanto, so necessrias maiores investigao sobre as

redes de alvo funcionais desses miRNAs diferenciados.

Estas anlises sero vitais para lanar nova luz sobre a

patognese da DA e identificar possveis biomarcadores
perifricos para o diagnstico e prognstico desta doena
devastadora.
 Agradecimentos

Aos meus orientadores, Prof. Pedro H. Cabello e Prof. Jerson Laks

Ao PPG BIOTRANS
A Universidade do Grande Rio
A equipe do Laboratrio de Gentica Humana (Labgen) - Unigranrio
As agncias de fomento CAPES e FAPERJ