Tema 14

Citogentica
Estudio del cariotipo humano.
Descripcin y metodologa.
Criterios de clasificacin.
Tcnicas de bandeo.
Hibridacin in situ (FISH)
-Tipos de sondas
- Multifish (SKY), (CGH).
 Citogentica humana
Estudia el conjunto de cromosomas de un individuo
Cromosomas metafsicos

1956 Tjio y Levan Demuestran que el

ncleo de las clulas humanas hay 46
cromosomas

1959 Lejeune & cols Asocian una

alteracin cromosmica con un Sndrome
clnico: Trisoma 21- Sndrome de Down

Desde entonces se han descrito muchas

alteraciones cromosmicas como
responsables de la etiologa de muchos
sndromes polimalformativos
 Cromosomas metafsicos
Son cromosomas formados por dos cromtidas
hermanas = dos molculas de ADN idnticas

Pedculos
Cromosoma metafsico

Cromtida

Centrmero

Microscopia
electrnica de
barrido
Cariotipo: conjunto de cromosomas que caracteriza a una especie.

Cariotipo humano
46 cromosomas
23 pares de homlogos

22 pares de autosomas
1 par de gonosomas
24 tipos cromosmicos
24 tipos cromosmicos
Se clasifican de mayor a
menor tamao y segn su
morfologa en 8 grupos
 Cada cromosomas metafsico esta formado
por dos cromtidas hermanas y equivale a dos
molculas de ADN idnticas asociadas a
protenas

Cada cromosoma interfsico equivale a

una molcula de ADN asociada a
protenas

Las molculas de ADN de los

cromosomas tienen entre 50 y 250 Mb

Un gen tiene entre 15 Kb y 2000 Kb

la media es 28 Kb
 Metodologa citogentica

Linfocitos de sangre
perifrica
Material
Mdula sea
Lquido amnitico
Vellosidades coriales
Piel

Mtodo Directo:
Indirecto: cultivo antes
del procesamiento

Procesamiento
 Fotografa
Cariotipo

Tincin
Sembrar en 125
ml de RPMI +
fitohemaglutinina
Dispersin celular

S
sobre un portaobjetos
por goteo
Incubar a 37 C
durante 3 das

Solucin
Aadir colchicina hipotnica Fijacin de
salina las clulas
ClK 0,075M Carnoy
 Criterios de clasificacin

Denver 1960 -Tamao

-Posicin del centrmero
-Presencia o ausencia de satlites

Pars 1971

-Patrn especfico
de bandas
Bandas Q: Tratamiento con Quinacrina
(Casperson y cols., 1970) Regiones ricas en AT, cromosoma Y
 Tratamiento con tripsina + Giemsa
Bandas G:
Regiones ricas en AT (bandas oscuras)
(Seabright, 1971)
 Patrn de
Bandas Q y G
(1971)
Idiograma con bandas G

Frmula cromosmica: 46, XY

Bandas R: Patrn reverso al de bandas Q y G
Regiones ricas en CG (bandas oscuras)
(Dutrillaux y Lejeune, 1971)
 Par 3

Par 16

Bandas: G R (Reverso)
Bandas C: Heterocromatina constitutiva
(Arrighi y Hsu, 1971)
Bandas C
Patrn de
Bandas C
(1971)
 Idiograma con bandas C

Frmula cromosmica: 47, XY, +13

Limitaciones de la Citogentica Convencional :

Requiere metafases
No siempre la calidad de las metafases es optima
Resolucin limitada (en el mejor de los casos 2-5 Mb )

Alternativa : Citogentica Molecular

1. FISH (Hibridacin in situ con fluorescencia)

Requiere saber lo que se busca
Tener la sonda adecuada
2. Otras tcnicas:
Requieren equipos muy sofisticados y apoyo
informtico
SKY (Cariotipo espectral multicolor, multifish)
CGH (Hibridacin Genmica Comparada)
FISH (Hibridacin in situ con fluorescencia)
Se puede realizar en
ncleos interfsicos o
en divisin

Se suelen utilizar
simultneamente
distintas sondas,
marcadas con
flurorocromos de
diferentes colores :
Rojo: rodamina
Verde: fluorescena
Azul: dapi
 Tipos de sondas

Especificas de regiones: Sondas telomricas

Sondas centromricas

Especificas de cromosomas: Pintados cromosmicos

Especificas de secuencia: Sondas nicas, Sondas gnicas

Sondas telomricas
Especificas de regiones
Sondas centromricas

Repeticiones Alfoides:
(secuencias repetidas del
centrmero que son
especficas de cromosomas)

tiles para localizar

cromosomas concretos

Centrmero del
cromosoma 21
Pintados
cromosmicos

Especificas de cromosomas

Pintan completamente el
cromosoma elegido

tiles en la deteccin
de reorganizaciones
cromosmicas

t (2;8)
cromosoma 8 rosa
cromosoma 2 verde
Pintados cromosmicos

Especificas de cromosomas

pintado del cromosoma Y

en rosa, el resto con dapi
Pintados cromosmicos

Especificas de cromosomas

Pintado del
cromosoma X
Pintados cromosmicos

Especificas de cromosomas

cromosoma X rosa
cromosoma Y verde
Pintados cromosmicos

Especificas de cromosomas

Pintado del
cromosoma 22
Sondas especficas
de secuencia

Dirigidas a una regin

concreta

tiles para detectar

sndromes por
microdeleccin

7q11.23 rojo, centrmero

cromosoma 7 verde

Sndrome de Williams
(del 7q11.23)
 Cariotipo Espectral Multicolor (SKY)

Hibridacin in situ con sondas especficas de

cada cromosoma (El aparato es capaz de
diferenciar 24 colores).

Identificacin unvoca del material cromosmico

reordenado en translocaciones y marcadores
complejos
Hibridacin Genmica Comparada (CGH)

Deteccin de prdidas y ganancias genmicas por

hibridacin competitiva de ADN tumoral y normal de
referencia
Utilidad clnica de la citogentica

Uno de cada 150 o 160 recin nacidos

tiene una anomala cromosmica

Al menos el 50% de los abortos

espontneos durante el primer trimestre
tiene una anomala cromosmica

Aproximadamente el 2% de los
embarazos en mujeres de ms de 35
aos tiene una anomala cromosmica