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OBJETIVO

o Conocer las caractersticas de los hongos

mediante tincin.
o Comprender y conocer la importancia de los
hongos que pueden crecer en los alimentos.
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En promedio, se han descrito unas

80,000 especies de ellos, pero poseen
importancia mdica menos de 400, y
menos de 50 especies ocasionan ms
de 90% de las micosis de humanos y
otros animales. Los hongos son
eucariotas, y por esa razn comparten
innumerables genes homlogos,
productos gnicos y vas, con sus
hospedadores humanos. Como
consecuencia, son pocos los puntos
de ataque particulares en que acten
quimioteraputicos y antibiticos
eficaces.
4 Como las plantas, animales y protistas, los hongos son eucariotas,
organismos cuyos ncleos celulares estn contenidos en
membranas. No obstante, los hongos presentan una combinaci6n
de caractersticas que justifica su ubicaci6n en un reino
eucaritico separado.

Los hongos son reconocidos en el

laboratorio por su morfologa
macroscpica y microscpica, y de
acuerdo con ello se dividen en tres
grupos:
Hongos filamentosos
Hongos levaduriformes
Dimorfos

Medios de crecimiento
Agar Saboraud Dextrosa
Agar rosa de bengala
Agar Papa dextrosa

Tcnicas utilizadas para la

siembra.
Microcultivo
Vaciado en placa
Extensin en varilla
Estra cruzada
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HONGOS FILAMENTOSOS
La hifa o filamento es el elemento
primario de estos hongos; son
estructuras cilndricas parecidas a
tubos; pueden tener tabiques o septos
en nmero variable o no tenerlos y ser
aseptadas o cenocticas; poseen
poros pequeos. Segn la forma que
adopten pueden ser: vesiculosas,
nodulares, pectinadas, en raqueta, en
candelabro fvico y otras.
 SAFRANINA Tincin de Gram

til para el estudio de Tincin diferencial: Se emplea para teir: Productos

cultivos y productos biolgicos lquidos Exudados de lesiones Macerados de
biolgicos lquidos. Los biopsias. Todos los hongos son positivos a la coloracin de
elementos fngicos se Gram, excepto Cryptococcusneoformans.
tien de color rojo El de colorante alcohol acetona disuelve a los lpidos de
intenso, y el resto del la pared impidiendo la retencin del cristal violeta en
campo toma un tono los organismos Gram negativos. Se forma un complejo:
incoloro oro saplido. lugol-cristal-violeta-ribonucleato de magnesio Esta tcnica
se basa en las diferencias en el punto isoelctrico
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TINCIN DE AZUL DE ALGODN LACTOFENOL

La tincin de Azul de lactofenol se emplea para observar

hongos.
Es una tincin simple (un slo colorante) y como tal est basada en
la afinidad del colorante por componentes de las clulas, en este
caso por las estructuras fngicas.
El azul de lactofenol tiene tres caractersticas que lo hacen
especial para observar dichas estructuras en los hongos del tipo
moho obtenidos en los cultivos por aislamiento.
El fenol destruye la flora acompaante (algunas veces en los
cultivos, juntos a los hongos pueden crecer colonias de bacterias)El
cido lctico conserva las estructuras fngicas al crear, por decirlo
de algn modo, una pelcula que las protege provocado por un
cambio de gradiente osmtico entre el interior y el exterior de
dicha estructura.
El azul de algodn tiene la capacidad de adherirse a las hifas y
conidios de los hongos microscpicos.
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Preparacin de la impronta
1. Colocar el material necesario en la campana
de seguridad tipo .
2. Seleccionar las colonias para realizar las
improntas. 3. Cortar segmentos de cinta
adhesiva transparente aproximadamente de 1
cm2 .
4. Pegar los segmentos de cinta en un asa
micolgica. 5. Poner una gota de azul de
algodn en el portaobjetos.
6. Con el lado adhesivo de la cinta, tocar la
parte superior de hongo.
7. Colocar la cinta sobre la gota de azul de
algodn y poner otra gota de azul de algodn.
8. Poner un cubreobjetos sobre la preparacin.
9. Observar en 40x.
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BLANCO DE CARCOFLOUR

Fundamento: El calcoflor es un flourocromo que se une a polisacridos

con los en la cesbeta1-3 y beta1-4 presentes en polmeros tales como
celulosa y la quitina. El colorante fluorece cuando se expone a una fuente
de luz ultravioleta de onda cortao capaz de producir la luz azul (longitud
de onda 410-450 nm). Es un mtodo de alta sensibilidad para definir
claramente los elementos micticos con microscopio de fluorescencia.
11 ANARANJADO DE ACRIDINA

Se utiliza para la deteccin de bacterias y hongos en

muestras clnicas Puede utilizarse un microscopio con
accesorios fluorescentes como el de Reichert Zetopan.
El microscopio ordinario puede equiparse con filtros para
filtracin fluorescente (BG12, de 4 mm de espesor). Se
colocan filtros amarillos de modo de barreras filtrantes.
Fundamento: El pigmento se intercala en el cido
nucleico (nativo y desnaturalizado). Con pH neutro,
las bacterias, los hongos y el material celular se tien de
naranja rojizo. Con pH cido, las bacterias y los hongos se
mantienen de color naranja rojizo, pero el material de fondo se
tie de amarillo verdoso.
Composicin:
Alcohol absoluto
cido actico
Anaranjado de acridina
Buffer de fosfatos
Cloruro de calcio.
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TINCIN ZIEHL NEELSEN (CIDO-ALCOHOL-RESISTENTES)

Es el procedimiento utilizado para colorear aquellos organismos que son

difciles de colorear con colorantes bsicos, porque se muestran impermeables
a la coloracin. El contenido lipdico de estos organismos est
compuesto principalmente por ceras y fosfolpidos que alcanzan hasta
un 40% de su peso seco total.

La cido-alcohol-resistencia es la capacidad de ciertos materiales biolgicos

para formar complejos con algunos colorantes y que luego de la exposicin al
alcohol-cido no ocurre de coloracin Se cree que el cido miclico es
responsable de cido- alcohol-resistencia. til en algunos microorganismos
cido resistentes como N.Asteroides, N.Brasiliensis y otros actinomicetes.
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El fenol desactiva las enzimas lticas en la clula e impide que esta se

rompa. Adems acta como mordiente cuando se usa en combinacin
con colorantes.

El cido lctico preserva las estructuras fngicas.

El azul de algodn en un colorante acido, que tie el citoplasma y la

quitina recent en las clulas fngicas.

La fucsina acida tie el citoplasma de las clulas

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TINCIN DE SCHAEFFER-FULTON

Las esporas son formas de resistencia bacteriana. Tienen forma

esfrica u oval. Al microscopio las esporas sin teir se observan
como grnulos brillantes. Segn su localizacin se distinguen tres
tipos de esporas: Centrales, Subterminales, Terminales
Realizar el frotis
Cubrir el frotis con verde de malaquita
Calentar 5 minutos a emisin de vapores
Enjuagar con agua de la llave
Cubrir con la Safranina dejar actuar 1 minuto
Lavar con agua de la llave y dejar secar al aire.
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16

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