HONADOMANI

SAN BARTOLOME

FUNDAMENTO EN COLORACIÓN
PAPANICOLAU-USOS
BÉJAR VILELA, ROSARIO
 COLORACIÓN DE PAPANICOLAOU

 Creada por George Papanicolaou.

 En 1941 publica una técnica de
tinciones: Permite correlacionar
cambios citológicos vaginales
con el ciclo menstrual de las
mujeres y con el diagnóstico de
casos asintomáticos de
neoplasia intrauterina.
 COLORACIÓN DE PAPANICOLAOU

 Se denomina “CITOLOGIA
CERVICO VAGINAL”:Estudian
las Células Epiteliales de la
Pared Vaginal, Exocervix y
Endocervix.
 Mx obtenida con el
instrumental adecuado:
Espéculo y Pipeta de Ayre, la
cual garantiza un muestra de las
3 zonas involucradas.
 COLORACIÓN DE PAPANICOLAOU
INFORME CITOLÓGICO CERVICO VAGINAL
Coloración de Papanicolaou

 “SISTEMA BETHESDA” Ciudad SISTEMA BETHESDA

1.- CALIDAD DE LA MUESTRA

de Bethesda – Maryland (USA)

Inadecuada para Evaluación:
Adecuada para Evaluación:
Con Células Endocervicales

donde desde 1988 hasta el 2001,

Sin Células Endocervicales Con
Células MetaplásicasSin Células Metaplásicas
2.- CAMBIOS BENIGNOS CAUSADOS POR INFECCIÓN:

se reunieron un grupo de Ninguno

Cocobacilos
Cándida
Herpes

profesionales de la salud con:

Simple Gardnerella Actinomises
Trichomona vaginalis Otros

Objetivo establecer un sistema

3.- CAMBIOS ASOCIADOS A:
Ninguno
Reparativos Atrofia

de nomenclaturas y terminologías DIU

Radiación
Reactivos

uniformes para informar Inflamación: Leve

4.-ANORMALIDADES CELULARES EPITELIALES:
Moderada Severa

resultados Citológicos Cérvico Ninguno: Negativo para Lesión Intraepitelial y/o Neoplasia Maligna
Células Escamosas Atípicas (

Vaginales.
ASCUS )
Lesión Escamosa Intraepitelial de Bajo Grado: Infección por PVH
Lesión Escamosa Intraepitelial
de Bajo Grado: Displasia Leve ( NIC I ) Lesión
Escamosa Intraepitelial de Alto Grado: Displasia Moderada( NIC II )
Lesión Escamosa Intraepitelial de Alto Grado: Displasia Severa ( NIC III
) Lesión Escamosa Intraepitelial
de Alto Grado: Carcinoma In Situ Carcinoma
Epidermoide
Células Glandulares Atípicas ( AGUS )
Adenocarcinoma
5.-OTROS:
 COLORACIÓN DE PAPANICOLAOU

 Núcleo: Nítido, con buena

definición del detalle,
pudiendo evidenciarse el
patrón de cromatina.
 Citoplasma: De aspecto
transparente, que permite
apreciar los grados de
diferenciación celular y
actividad metabólica.
 COLORACIÓN DE PAPANICOLAOU
 Comprende 17 pasos agrupados en 5 etapas (hidratación, tinción
nuclear, tinción citoplasmática, deshidratación, aclaramiento).
 Uso de 3 colorantes (Hematoxilina de Harris, Orange G y EA-50).
1.-Agua Corriente 5’ => Hidratación
2.-Hematoxilina de Harris 7’ => Tinción Nuclear => Colorante
3.-Agua Corriente 2’ => Tinción Nuclear
4.-Agua Acida 1% 2” => Tinción Nuclear
5.-Agua Corriente 2’ => Tinción Nuclear
6.-Agua Amoniacal 10” => Tinción Nuclear
7.-Agua Corriente 2’ => Tinción Nuclear
8.-Alcohol Etílico de 96% 1’ => Tinción Citoplasmática
9.-Orange G 3’ => Tinción Citoplasmática => Colorante
10.-Alcohol Etílico de 96% 30” => Tinción Citoplasmática
11.-EA50 2’ => Tinción Citoplasmática => Colorante
12.-Alcohol Etílico de 96% 30” => Deshidratación
13.-Alcohol Etílico de 96% 30” => Deshidratación
14.-Alcohol Absoluto 30” => Deshidratación
15.-Alcohol Absoluto 30” => Deshidratación
16.-Xilol 2’ => Aclaramiento
17.-Xilol 1’ => Aclaramiento
 FIJACIÓN EN ALCOHOL ETER

o Fijador Químico por Deshidratación .

o Elimina el agua intracelular, desnaturalizando las proteínas e inactivando las
enzimas autodigestivas evitando la Autólisis,.
o Es un bactericida:Eliminando las bacterias e impidiendo la Putrefacción.

CITOPLASMA Alcohol Eter

Membrana Celular– Membrana Celular – Membrana Celular

H2O
H2O
H2O
H2O
H2O
NUCLEO

H2O
H2O
H2O
H2O
H2O
H2O
H2O
 AGUA CORRIENTE

 Elimina el Fijador y por arrastre físico los elementos que no son

parte de la estructura celular y tisular. Finalmente se obtendrá
una célula fijada y llena de moléculas de agua para que a través de
esta puedan desplazarse diversos colorantes.

CITOPLASMA Agua
Alcohol
Corriente
Eter

Membrana Celular– Membrana Celular – Membrana Celular

OH OH OH OH OH

OH OH OH OH OH OH OH

OH OH OH OH OH
NUCLEO

OH OH OH OH OH OH OH

OH OH OH OH OH

OH OH OH OH OH OH OH

OH OH OH OH OH

OH OH OH OH OH OH OH
 HEMATOXILINA DE HARRIS
 Las moléculas colorantes de Hematoxilina de Harris penetrarán en
la célula y se dirigirán al núcleo de la misma por un proceso Físico
Químico del Tipo Atracción Electrostática.
Esta unión se debe gracias a los grupos Fosforitos Ácidos (-) del
núcleo que le dan carga global Negativa a la estructura celular
tiñéndolo de un color violeta.

CITOPLASMA Hematoxilina de Harris

Membrana Celular– Membrana Celular – Membrana Celular

NUCLEO
 AGUA CORRIENTE

 Eliminará por arrastre físico el exceso de colorante intra y

extracelular que no este ligado al núcleo.
 Solo permanecerán unidos al núcleo las moléculas colorantes
unidas por diferencia de cargas eléctricas con este.

CITOPLASMA Hematoxilina
Agua Corriente
de Harris

Membrana Celular– Membrana Celular – Membrana Celular

NUCLEO
 AGUA ACIDA 1%
 Es una dilución del Ácido Clorhídrico al 1%, por lo que
presenta una carga fuertemente ácida (-).
 Las Cargas Negativas ingresarán a la célula y se unirán por
diferencia de carga con las Cargas Positivas, en este caso, con
los Grupos Auxocromos (+) de las moléculas de Hematoxilina.

CITOPLASMA Agua
AguaCorriente
Acida

Membrana Celular– Membrana Celular – Membrana Celular

NUCLEO
 AGUA ACIDA 1%
 Esta unión le darán carga global negativa a algunas moléculas
de Hematoxilina separándolas del núcleo, logrando la
decoloración parcial evitando la sobresaturación de colorante
en el núcleo que podrían impedir la observación de finos
detalles nucleares.

CITOPLASMA Agua Acida

Membrana Celular– Membrana Celular – Membrana Celular

NUCLEO
 AGUA CORRIENTE
Eliminará el exceso de Agua Ácida (-) logrando que las moléculas
de Hematoxilina intracelulares separadas sean eliminadas por
arrastre físico del interior de la célulla.
Solo permanecerán al interior de la célula las moléculas de
Hematoxilina que se encuentren unidas electrostáticamente al
núcleo celular.

CITOPLASMA Agua
Agua
Corriente
Acida

Membrana Celular– Membrana Celular – Membrana Celular

NUCLEO
 AGUA AMONIACAL
 Es una solución alcalina (pH: 8) y los Grupos Auxocromos de las moléculas de
Hematoxilina son “Indicadores de pH”.
 Adopta tonalidad rojiza con pH<3
 Tonalidad azulada con pH >3,
 Al encontrarse en un pH de 8 el núcleo adopta un color fuertemente azulado,
por este motivo a este paso se le conoce también como “Azulamiento”.
CITOPLASMA Agua
Agua Amoniacal
Corriente

Membrana Celular– Membrana Celular – Membrana Celular

NUCLEO
 AGUA CORRIENTE
 Eliminará el exceso de Agua Amoniacal evitando que las
moléculas de Hematoxilina unidas al núcleo sigan virando su
color.
 La tinción nuclear de la célula habrá terminado con moléculas
de Hematoxilina unidas fuertemente al núcleo y citoplasma
con abundantes moléculas de agua.

CITOPLASMA Agua
Agua Amoniacal
Corriente

Membrana Celular– Membrana Celular – Membrana Celular

NUCLEO
 ALCOHOL ETÍLICO 96%

 El Alcohol Etílico al 96% reemplazará el agua extracelular e

intracelular debido a que los colorantes posteriores son más
solubles en alcohol que en agua.

CITOPLASMA Alcohol
Agua Etílico
Corriente
al 96%

OH Membrana Celular– Membrana Celular – Membrana Celular OH OH OH

OH OH OH
OH OH OH
NUCLEO

OH OH OH OH
OH OH OH
OH OH OH

OH OH OH OH
OH OH OH
OH OH OH

OH OH OH OH
OH OH OH
OH OH OH
 ORANGE G
 Es un colorante monocromático penetra rápidamente en el citoplasma
celular y tiñe específicamente la Queratina de un color naranja
brillante.
 La Queratina normalmente no se encuentra en el citoplasma de las
células normales pero aparece en las células epiteliales cérvico
vaginales en Carcinomas Queratinizados

CITOPLASMA Alcohol
Orange
Etílico
G al 96%

Membrana Celular– Membrana Celular – Membrana Celular

Orange G Queratina Orange G Orange G Orange G

OH OH OH OH
OH OH OH
OH OH OH
Orange G Queratina Orange G Orange G
Orange G
NUCLEO

OH OH OH OH
OH OH OH
Orange G Queratina OrangeOH
G Orange G OH Orange G OH

OH OH OH OH
OHOrange G OH OH
Queratina
OH Orange G OH Orange G
Orange G
OH

OH OH OH OH
Orange G Queratina
OH Orange G
OH
OH Orange G
OH
OH
Orange G
OH
 ALCOHOL ETÍLICO 96%
 El Alcohol Etílico de 96% al ser soluble en Orange G eliminará
el exceso de colorante extracelular e intracelular no ligado a
la Queratina.
 Solo permanecerán en el interior de la célula, las fibras de
Queratina (si las existiera) teñidas por el Orange G.

CITOPLASMA Alcohol
Orange
Etílico
G al 96%

Membrana Celular– Membrana Celular – Membrana Celular

Orange G Queratina Orange G Orange G Orange G

OH OH OH OH
OH OH OH
OH OH OH
Orange G Queratina Orange G Orange G
Orange G
NUCLEO

OH OH OH OH
OH OH OH
Orange G Queratina OrangeOH
G Orange G OH Orange G OH

OH OH OH OH
OHOrange G OH OH
Queratina
OH Orange G OH Orange G
Orange G
OH

OH OH OH OH
Orange G Queratina
OH Orange G
OH
OH Orange G
OH
OH
Orange G
OH
 EA-50
 La tinción citoplasmática.
 EA50 colorante Policromático soluble en alcohol
 Comprende 3 colorantes: Eosina + Light Green + Pardo de Bismark

CITOPLASMA Alcohol Etílico

EA-50 al 96%

OH Membrana Celular– Membrana Celular – Membrana Celular OH OH OH

OH OH OH
OH OH OH
NUCLEO

OH OH OH OH
OH OH OH
OH OH OH

OH OH OH OH
OH OH OH
OH OH OH

OH OH OH OH
OH OH OH
OH OH OH
 EA-50

 La Eosina teñirá de rosado el citoplasma de las Células Maduras:

Superficiales, al unirse electrostáticamente a las proteínas
citoplasmáticas exclusivas de células “Metabolicamente Inactivas”

CITOPLASMA EA-50

Membrana Celular– Membrana Celular – Membrana Celular

NUCLEO
 EA-50

 El Light Green teñirá de verde azulado el citoplasma de las Células

Intermedias y Parabasales, al unirse electrostáticamente a las proteínas
citoplasmáticas exclusivas de células “Metabolicamente Activas”

CITOPLASMA EA-50

Membrana Celular– Membrana Celular – Membrana Celular

NUCLEO
 EA-50

 El Pardo de Bismark teñirá de pardo amarillo las Mucinas (compuestos de

proteínas y azucares) ubicadas en el citoplasma de las Células Cancerosas
propias de Adenocarcinomas.

CITOPLASMA EA-50

Membrana Celular– Membrana Celular – Membrana Celular

NUCLEO
 ALCOHOL ETÍLICO 96%

 Los componentes del EA-50 (Eosina – Light Green – Pardo

Bismark) al ser solubles en Alcohol Etílico, y si no están
ligados a ningún componente proteico citoplasmático serán
desplazados de la célula.

CITOPLASMA Alcohol Etílico

EA-50 al 96%

OH Membrana Celular– Membrana Celular – Membrana Celular OH OH OH

OH OH OH
OH OH OH
NUCLEO

OH OH OH OH
OH OH OH
OH OH OH

OH OH OH OH
OH OH OH
OH OH OH

OH OH OH OH
OH OH OH
OH OH OH
 ALCOHOL ETÍLICO 96%

 En caso de tratarse de una Célula Superficial:

“Metabolicamente Inactiva” en el citoplasma solo se
encontrarán proteínas inactivas que serán teñidas por la
Eosina adoptando el citoplasma una tonalidad rosada,
culminando en este paso la coloración nuclear y citoplasmática

CITOPLASMA EA-50

Membrana Celular– Membrana Celular – Membrana Celular

NUCLEO
 ALCOHOL ETÍLICO 96%

 Un segundo baño de alcohol etílico asegura la eliminación

completa del colorante

CITOPLASMA Alcohol Etílico al 96%

Membrana Celular– Membrana Celular – Membrana Celular OH OH OH

OH OH
OH OH
NUCLEO

OH OH OH
OH OH
OH OH

OH OH OH
OH OH
OH OH

OH OH
OH
OH OH
OH OH
 ALCOHOL ABSOLUTO

 Un primer baño de Alcohol Absoluto busca eliminar el agua

intra y extracelular, ya que los posteriores procesos de
Aclaramiento y Montaje emplean insumos que nos son
miscibles en Agua.

CITOPLASMA Alcohol
Alcohol
Etílico
Absoluto
al 96%

Membrana Celular– Membrana Celular – Membrana Celular OH OH OH

OH OH
OH OH
NUCLEO

OH OH OH
OH OH
OH OH

OH OH OH
OH OH
OH OH

OH OH
OH
OH OH
OH OH
 ALCOHOL ABSOLUTO

 Un segundo baño de Alcohol Absoluto asegura la eliminación

completa del Agua.

CITOPLASMA Alcohol Absoluto

Membrana Celular– Membrana Celular – Membrana Celular OH OH OH

OH OH
OH OH
NUCLEO

OH OH OH
OH OH
OH OH

OH OH OH
OH OH
OH OH

OH OH
OH
OH OH
OH OH
 XILOL
 Un primer baño de Xilol al ser misicble con el alcohol, busca su eliminación
de los espacios intra y extracelulares, ya que el posterior proceso de
Montaje emplean sustancias que nos son miscibles en Alcohol.
 El Xilol cambia el Índice de Refracción de la Célula transparentándola y
permitiendo una mejor observación de detalles celulares.

CITOPLASMA AlcoholXilol
Absoluto

Membrana Celular– Membrana Celular – Membrana Celular OH OH OH

OH OH
OH OH
NUCLEO

OH OH OH
OH OH
OH OH

OH OH OH
OH OH
OH OH

OH OH
OH
OH OH
OH OH
 XILOL

 Un segundo baño de Xilol asegura la completa eliminación del

alcohol y culmina con el proceso de transparentar las
estructuras celulares.

CITOPLASMA Xilol

Membrana Celular– Membrana Celular – Membrana Celular

NUCLEO
 MONTAJE

 Impide la resequedad y
desintegración de las células,
preservando la lamina citológica para
su archivamiento posterior a la
lectura microscópica.
 Consiste en la unión de la lamina
portaobjeto con la laminilla
cubreobjeto mediante una resina lo
más transparente posible y cuyo
Índice de Refracción sea semejante
a la del vidrio.
GRACIAS