Bacteriologia aplicada

Prof. Éverton do Nascimento Alencar

Farmacêutico - UFRN
Mestrando - Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas (UFRN)
 Microbiologia

Virologia

Microbiologia Micologia

Bacteriologia
 Biossegurança em Laboratório
de Bacteriologia

Não fumar

Acesso restrito Risco biológico

Avisos

Descontamine os materiais ao Não fale enquanto

finalizar o experimento Não comer manipula
 Biossegurança em Laboratório
de Bacteriologia

Bico de Bunsen
Capela de fluxo laminar
Cuidados

EPIs
 Resumos dos níveis de Biossegurança Recomendados para Agentes Infecciosos
NB Agentes
Que não são conhecidos por
1 causarem doenças em adultos
sadios
Associados com doenças
humanas, risco= lesão
2 percutânea, ingestão,
exposição da membrana
cutânea
Agentes exóticos com
potencial para transmissão via
3 aerossol; a doença pode ter
consequências sérias ou até
mortais
Agentes exóticos ou perigosos
que impõem um alto risco de
doenças que ameaçam a vida,
infecções laboratoriais
4 de Classe III ou Classe I ou II
transmitidas via aerossol; ou
relacionadas a agentes com
risco desconhecido de
transmissão.
Práticas Equipamento de segurança Instalações
Práticas Padrões em Bancadas abertas com pias
Não são necessários
microbiologia próximas
Prática NB-1 mais: Acesso
Barreiras primárias= Cabines de Classe I
limitado, Aviso de risco
ou II ou outros dispositivos de
biológico, Precauções com
contenção física usados para todas as
objetos perfurocortantes,
manipulações de agentes que
Manual de biossegurança que NB-1 mais: Autoclave
provoquem aerossóis ou vazamento de
defina qualquer
materiais infecciosos; Procedimentos
descontaminação de dejetos
Especiais como o uso de aventais, luvas,
ou normas de vigilância
proteção para o rosto quando necessário
médica
NB-2 mais: Separação
Barreiras primárias= Cabines de classe I física dos corredores de
Prática NB-2 mais: Acesso
ou II ou outros dispositivos de acesso; Portas de acesso
controlado, Descontaminação
contenção usados para todas as duplas com fechamento
de todo o lixo,
manipulações abertas de agentes; Uso automático; Ar de
Descontaminação da roupa
de aventais, luvas, proteção respiratória exaustão não circulante;
usada, Amostra sorológica
quando necessária Fluxo de ar negativo
dentro do laboratório
NB-3 mais: Edifício
Prática NB-3 mais: Mudança
Barreiras primárias= Todos os separado ou área isolada;
de roupa antes de entrar,
procedimentos conduzidos em cabines Sistemas de abastecimento
Banho de ducha na saída,
e escape, a vácuo, e de
Todo o material
juntamente com macacão de pressão descontaminação; Outros
descontaminado na saída das
positiva com suprimento de ar requisitos sublinhados no
instalações
texto
Fonte: CDC, CENTRO DE PREVENÇÃO E CONTROLE DE DOENÇAS, Washington, EUA, 1999.
 Bacteriologia

Estrutura das bactérias

 Bacteriologia

Coloração de gram
Coloração com cristal violeta
Coloração com fuscina básica
Bacteriologia
 Meios de cultura

Aminoácidos e Fatores de
vitaminas crescimento: Sangue,
soro, etc
Indicadores químicos

“Ambiente artificial composto por diferentes

substâncias capazes de promover o crescimento
microbiano”

Nitrogênio e carbono Sais minerais

Agente geleificante:
Ágar
 Meios de cultura

Pesagem Hidratação Fusão

Autoclavação
Verificação de Distribuição em
121ºC, 15min,
pH garrafas
1atm

Teste de
Distribuição
esterilidade: Estocagem 4ºC
nas placas
24h a 37ºC
 Meios de cultura

Consistência Conteúdo químico

Classificação dos meios de cultura

Utilização no laboratório
 Meios de cultura

Classificação
Consistência
Meio sólido
 Obtenção de colônias isoladas
 Concentração de ágar: 1 a 1,5%
Meio semi-sólido
 Motilidade
 Concentração de ágar: 0,05 a 0,5%
Meio líquido
 Observar crescimento (Turvação)
 Meios de cultura

Classificação
Conteúdo químico
Definido
 Quantidades conhecidas de substâncias químicas
 Ex.: Ágar Mueller-Hinton, Ágar BHI etc.
Indefinido ou Complexos
 Quantidade não definida dos constituintes
 Ágar sangue, Ágar Chocolate
 Meios de cultura

Classificação
Utilização em laboratório
Meio de transporte

Meio Stuart Meio Carry blair

 Meios de cultura

Classificação
Utilização em laboratório
Meio de manutenção

Ágar Nutriente
 Meios de cultura

Classificação
Utilização em laboratório
Meio diferencial

Ágar Manitol Salgado Ágar EMB

 Meios de cultura

Classificação
Utilização em laboratório
Meio seletivo

Ágar EMB Ágar XLD

 Meios de cultura

Classificação
Utilização em laboratório
Meio enriquecido

Ágar sangue Ágar chocolate

 Meios de cultura

Classificação
Utilização em laboratório
Meio de enriquecimento

Caldo BHI Caldo Selenito

 Meios de cultura

Classificação
Utilização em laboratório
Meio para teste de sensibilidade

Ágar Mueller-Hinton
 Meios de cultura

Classificação
Utilização em laboratório
Meios para testes bioquímicos

TSI SIM
 Meios de cultura

Classificação
Utilização em laboratório
Meios para testes bioquímicos

Citrato de Simmons Fenilalanina

 Semeadura
Meios sólidos

Estrias sinuosas

Disseminação Picada
Estria reta (ágar fundido)
 Semeadura
Meios sólidos

Estrias múltiplas (isolamento) Distensão

Profundidade (Pour-plate)
Semeadura

Meios líquidos

Difusão
 Semeadura

Meios semi-sólidos

Disseminação Picada
 Bacteriologia aplicada a
diagnóstico
Bacterioscopia
Gram
Meios seletivos
Material biológico
Provas bioquímicas
Sorotipos
Antibiograma
Bacteriologia aplicada a
diagnóstico
Antibiograma

Identificação
Auxílio no tratamento
Prática
 Bacteriologia aplicada a Bio e
Nanotecnologia

Biotecnologia Bacteriologia Nanotecnologia

 Bacteriologia aplicada a Bio e
Nanotecnologia

Nanossistemas terapêuticos

Nanochips Nanorrobôs
Bacteriologia aplicada a Bio e
Nanotecnologia

• Nanotecnologia

• Bacteriologia

• Saúde
• Medicamentos
 Bacteriologia aplicada a Bio e
Nanotecnologia
Desenvolvimento de um antimicrobiano
Inovador
Old molecules

Delinear técnica
 Bacteriologia aplicada a Bio e
Nanotecnologia
Desenvolvimento de um antimicrobiano
Inovador
Produtos naturais
Buscar saber mais
Triagem
Difusão em ágar
Figura - Imagem de placa de Petri da triagem antibacteriana da cepa de
S. epidermidis ATCC 12228. EOEC (Emulsão de óleo essencial de
copaíba); EOC (Emulsão de óleo de copaíba); EOR (Emulsão de óleo de
rã-touro); CLOR (Cloranfenicol); OR (Óleo de rã-touro); DMSO
(Dimetilsulfóxido); OEC (Óleo essencial de copaíba); RC (Fração
resina de copaíba); OC (Óleo de copaíba. (Fonte: autoria própria).
 Bacteriologia aplicada a Bio e
Nanotecnologia
Desenvolvimento de um antimicrobiano
Inovador
Old molecules
Diluição (CIM)
 Bacteriologia aplicada a Bio e
Nanotecnologia
Desenvolvimento de um antimicrobiano

Microdiluição x Macrodiluição
 Bacteriologia aplicada a Bio e
Nanotecnologia
Desenvolvimento de um antimicrobiano
Resultado prático
CIM produto puro X CIM nanossistema
Provar atividade
Tabela 6– Concentração Inibitória Mínima dos óleos de copaíba e das emulsões
contendo estes óleos (mg/mL)
Micro-organismos OC EOC OEC EOEC

S. aureus ATCC 29213 > 234,00 ± 0,00 >248,75 ± 0,00 110,90 ± 96,02 >249,25 ± 0,00

S. epidermidis ATCC 12228 > 234,00 ± 0,00 >248,75 ± 0,00 221,75 ± 0,00 >249,25 ± 0,00

S. epidermidis AC1 0,001 ± 0,000 0,045 ± 0,026 152,50 ± 120,00 >249,25 ± 0,00

S. epidermidis AC2 > 234,00 ± 0,00 >248,75 ± 0,00 221,75 ± 0,00 >249,25 ± 0,00
 Bacteriologia aplicada a Bio e
Nanotecnologia
Observação das modificações na bactéria

MEV MET
 Bacteriologia aplicada a Bio e
Nanotecnologia
Observação das modificações na bactéria

MEV – S. aureus

MET
 Bacteriologia aplicada a Bio e
Nanotecnologia
Observação das modificações na bactéria

Microscopia Confocal
 Bacteriologia aplicada a Bio e
Nanotecnologia
Fatores de virulência
Biologia Molecular
Genômica
Modificações em sequências a fim de avaliar
virulência

Biofilmes
 Bacteriologia aplicada a Bio e
Nanotecnologia
Biofilmes
Dispositivos médicos
Reatores – Indústria de alimentos

Figura 4- Formação de Biofilmes. A: Biofilme em catéter; B: Mecanismo de formação dos

biofilmes; C: Dispositivos Médicos.
 Bacteriologia aplicada a Bio e
Nanotecnologia
Ação de nanossistemas frente a biofilmes
Inóculo - 100µL/poço
Caldo Mueller-
Hinton + Micro-
Incubação 35ºC/ Remoção do
organismo
24h sobrenante
(McFarland 0.5)

Caldo Mueller-Hinton
/amostras (15:1) - 100µL/poço

Lavagem Cristal Lavagem

Etanol PA com água violeta com água
200µL deionizada 20min deionizada
Elisa (Biotek) 570nm
 Considerações Finais
Bacteriologia
Diagnóstico médico
Biologia molecular
Desenvolvimento de nanossistemas
Controle microbiológico
Medicamentos
Alimentos
Água
Bacteriologia aplicada

everton_alencar@hotmail.com