INTRODUCCION AL LABORATORIO DE PRÁCTICAS

DE BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR

La Bioquímica clínica en la Medicina
Historia

Examen clínico

Servicios de diagnóstico

Imagen Test fisiológicos (ECG, función pulmonar, etc)

Servicios de laboratorio

hematologia histopatología Inmunología

Bioquímica Clínica

Servicios de Nucleo de Necesidades

urgencia Bioquímica especiales
 PROGRAMA DE PRACTICAS 2010/2011
1. Introducción al Laboratorio de Bioquímica: Normas de
seguridad. Preparación de reactivos y patrones.
2. Técnicas básicas: Espectrofotometría, Cromatografía y
Electroforesis.
Seminarios
3. Metodologías de estudio de ADN: Purificación y
amplificación. Aplicaciones médicas.
4. Análisis de la actividad funcional de proteínas. Cinética
enzimática
5. La inhibición de la funcionalidad de las proteínas.
Técnicas de estudio e implicaciones biomédicas.

1. Introducción al Laboratorio de Bioquímica

2. Estudio bioquímico del ADN: Purificación y
cuantificación
3. Estudio bioquímico del ADN (II) Análisis del ADN
por electroforesis
4. Estudio bioquímico de las proteínas:
Cuantificación de proteínas totales
Prácticas de Laboratorio
5. Estuido bioquímico de las proteínas (II):
Separación electroforética
6. Estudio bioquímico de proteínas (III): Análisis de
la actividad enzimática
 LAS PRACTICAS DE BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR
COMIENZAN EL PRÓXIMO LUNES, 26 DE SEPTIEMBRE

Consultar en el Tablón de Anuncios del Departamento:

- Las listas provisionales de los grupos de prácticas

- Las semanas en que se imparte cada práctica

En caso de no estar incluídos en las listas, comunicarlo en la Secretaría del

Departamento (Don Francisco Tévar)
 CUADERNOS DE PRACTICAS

• Para cada práctica se edita un cuaderno:

• Objetivo de la práctica
• Fundamento de la práctica
• Descripción del procedimiento preparativo
• Descripción del procedimiento de análisis
• Descripción del análisis de resultados
• Cuestiones sobre la práctica
• El cuaderno es obligatorio y puede ser revisado por los profesores
en cualquier momento
• Se deposita con antelación a las prácticas en el Servicio de
Reprografía de la Facultad
NORMAS DE COMPORTAMIENTO Y DE
SEGURIDAD EN EL LABORATORIO

Información = Seguridad
• MEDIDAS BÁSICAS DE SEGURIDAD:
• La estancia en el laboratorio, de cualquier tipo, exige conocer una
serie de medidas básicas de seguridad.
• El laboratorio de prácticas es un lugar seguro si se cumplen las
normas elementales de comportamiento y las medidas básicas de
seguridad.
• No está permitido realizar ninguna actividad en el laboratorio no
autorizada por los profesores

• MEDIDAS ESPECÍFICAS DE SEGURIDAD:

• Las operaciones que se realizan en algunas prácticas requieren
información específica de seguridad.
• Las instrucciones son dadas por el profesor y se recogen en el
cuaderno de la práctica.
• Se les debe prestar especial atención y cualquier duda se debe
consultar con los profesores
• DISPOSITIVOS DE SEGURIDAD MÁS PRÓXIMOS:
• Incluyen extintores, duchas de seguridad, lavaojos, mantas
antifuego, etc.
• Hay que localizar los más próximos e informarse sobre su
funcionamiento.

• ETIQUETAS DE SEGURIDAD:
• Las botellas de reactivos y algunos aparatos suelen mostrar
iconos y frases que informan sobre:
o Posible peligrosidad y uso correcto
o Medidas a tomar en caso de problema derivado
• Hay que conocer el significado de los iconos.
• Se debe leer detenidamente la información y tener en cuenta
las especificaciones que señalan.

EN CASO DE DUDA, CONSULTA AL PROFESOR

Medidas de Protección
 PROTECCION OCULAR
• Los ojos son particularmente susceptibles de daño permanente por productos
corrosivos así como por salpicaduras de partículas.
• Es obligatorio usar gafas de seguridad en un laboratorio donde los ojos
puedan ser dañados.
• Se recomienda no llevar lentes de contacto en el laboratorio, ya que en caso
de accidente, las salpicaduras de productos químicos o sus vapores pueden
pasar detrás de las lentes y provocar lesiones en los ojos.
 PROTECCION CORPORAL
• El uso de bata es obligatorio, ya que las salpicaduras de productos químicos son
frecuentes.
• La bata será preferentemente de algodón, ya que, en caso de accidente, otros
tejidos pueden adherirse a la piel, aumentando el daño.
• Se recomienda llevar zapatos cerrados y no sandalias.
• Los cabellos largos suponen un riesgo que puede evitarse recogiéndolos en una
cola o trenza.

• Es recomendable usar guantes, sobre todo cuando se utilizan sustancias

corrosivas o tóxicas.
• Suelen ser recomendables los guantes de un solo uso.
Normas de Comportamiento
 NORMAS HIGIÉNICAS
• No comer, beber ni fumar en el laboratorio, ya que los alimentos, bebidas y
tabaco pueden contaminarse y contaminar.

• Lavarse siempre las manos después de hacer un experimento y antes de salir del
laboratorio.

• No inhalar, probar u oler productos químicos si no se está debidamente

informado.

• Nunca acercar la nariz para inhalar directamente de un tubo de ensayo o

recipiente con líquido.

• Mantener el área de trabajo sin libros, abrigos, bolsas y objetos innecesarios.

• Mantener las mesas siempre limpias. Se tienen que limpiar inmediatamente todos
los productos químicos derramados.

• Limpiar siempre perfectamente el material y aparatos después de su uso.

 ACTUACIÓN RESPONSABLE
• Cada alumno es responsable de su sitio de trabajo durante su estancia en el
laboratorio.

• Cada grupo debe encargarse de recoger el material, eliminar los resíduos y

dejar perfectamente ordenada la mesa de laboratorio.

• Trabajar sin precipitación, pensando en cada momento lo que se está

haciendo, y con el material y reactivos ordenados.

• No se debe gastar bromas, correr, jugar, empujar, etc. en el laboratorio.

• Un comportamiento irresponsable puede ser motivo de expulsión inmediata

del laboratorio y sanción académica.

• Comprobar el nombre de productos y diluciones antes de utilizarlos.

• No sustituir nunca, sin autorización previa del profesor, un producto químico

por otro en un experimento.

• No utilizar nunca un equipo o aparato sin conocer su funcionamiento. En

caso de duda, preguntar siempre a los profesores
 Precauciones específicas
en el Laboratorio de Prácticas
 MANEJO DE MATERIAL DE VIDRIO

• Muchos accidentes de laboratorio se producen por cortes y quemaduras con

vidrio.
• No forzar los tubos de vidrio, ya que, en caso de rotura, los cortes pueden ser
graves.
• El vidrio caliente debe de dejarse apartado encima de una plancha o similar
hasta que se enfríe. En caso de duda, usar unas pinzas o tenazas.
• No usar nunca matrial de vidrio que esté agrietado o roto.
• Depositar el material de vidrio roto en un contenedor para vidrio, no en una
papelera.
 MANEJO DE PRODUCTOS QUIMICOS

• Los productos químicos pueden ser peligrosos por sus propiedades tóxicas,
corrosivas, inflamables o explosivas.
• Muchos reactivos, particularmente los disolventes orgánicos (etanol,metanol,
acetona, cloroformo,etc.) arden en presencia de una llama. Otros pueden
descomponerse explosivamente con el calor.
• Si se usa una fuente intensa de calor, alejar de ella los frascos de reactivos
químicos.
• No calentar nunca líquidos inflamables con un mechero.
• No transportar innecesariamente los reactivos de un sitio a otro del laboratorio.
• Las botellas se transportan siempre cogiéndolas por el fondo, nunca del tapón.
 MANEJO DE PRODUCTOS QUIMICOS

• No inhalar los vapores de productos químicos. Si se produjera una

concentración excesiva de vapores en el laboratorio, abrir inmediatamente las
ventanas.
• En pipetas de vidrio o plástico, pipetear con el índice nunca con el pulgar.
• No pipetear directamente del frasco con agua destilada o de las disoluciones
(se debe de trasvasar a un vaso de precipitados o a un tubo de ensayo, y de
aquí utilizarla).
• En caso ácidos, alcalis, disolventes orgánicos y tóxicos, nunca con la boca,
utilizar la ayuda de propipetas.
• Un posible peligro de intoxicación es a través de la piel:
Evitar el contacto de productos químicos con la piel, especialmente los
tóxicos o corrosivos (ácidos y bases), usando guantes.
Lavarse las manos a menudo.
 Riesgos comunes
en el Laboratorio de Prácticas
 RIESGO DE QUEMADURAS
• Surge del uso de fuentes de calor en reacciones químicas o preparación de
materiales (por ejemplo, fusión de agar).
• Cuidado al manipular superficies calientes de los equipos, al contacto o manejo
de tubos y recipientes calentados o a las salpicaduras.
• Comprobar la temperatura siempre y utilizar pinzas, paños, guantes
protectores.
• No calentar nunca un recipiente totalmente cerrado.
• Dirigir siempre la boca del recipiente en dirección contraria a sí mismo y a las
demás personas cercanas.

• Las pequeñas quemaduras producidas por material caliente, baños

termostatizados, hornillos o placas etc., se tratan lavando la zona afectada con
agua fría durante 10-15 minutos.
• Las quemaduras más graves requieren atención médica inmediata.
 RIESGO DE ELECTROCUCION
• Surge por el uso de campos eléctricos intensos (fuentes alimentación para
electroforesis) o por contacto de un aparato eléctrico con el agua (incluso con
voltaje bajo).
• Hay que seguir las instrucciones de funcionamiento y manipulación de los
equipos.
• Evitar manipular líquidos en la proximidad de instrumentos eléctricos y tener
precaución con los baños termostatizados.
• No enchufar nunca un equipo con los cables o conexiones en mal estado.
• Nunca manipular en el interior de un aparato, ni siquiera desconectado de su
fuente de alimentación.
 RIESGO DE CONTAMINACION BIOLOGICA

• Surge de la utilización de: material clínico humano (virus o bacterias) o lineas

celulares tumorales de origen humano (peligro de desarrollarse).
• El riesgo acentúa con el pipeteo con la boca, presencia de heridas en la piel y
mucosas y contaminación de las manos.
• Si es necesario, utilizar pipetas automáticas, mascarilla y guantes.
¿Qué hacer en caso de accidente?
EN CASO DE ACCIDENTE, AVISAR
INMEDIATAMENTE AL PROFESOR.
En caso de producirse corrosiones en los ojos
• En este caso el tiempo es esencial (menos de 10 segundos). Cuanto antes se
lave el ojo, menos grave será el daño producido.
• Lavar los dos ojos con agua corriente abundante durante 15 minutos como
mínimo en una ducha de ojos o con un frasco para lavar los ojos.
• Es necesario mantener los ojos abiertos con la ayuda de los dedos para
facilitar el lavado debajo de los párpados.
• Es necesario recibir asistencia médica, por pequeña que parezca la lesión.
 Fuego en el laboratorio

• Evacuar el laboratorio, por pequeño que sea el fuego, por la salida principal o
por la salida de emergencia si no es posible por la principal.
• Avisar a todos los compañeros de trabajo sin que se extienda el pánico y
conservando siempre la calma.
• Si el fuego es pequeño y localizado, apagarlo utilizando un extintor adecuado,
arena, o cubriendo el fuego con un recipiente de tamaño adecuado que lo
ahogue.
• Retirar los productos químicos inflamables que estén cerca del fuego.
• No utilizar nunca agua para extinguir un fuego provocado por la inflamación de
un disolvente.
 Fuego en el cuerpo

• Si se incendia la ropa, gritar inmediatamente para pedir ayuda. Estirarse en el

suelo y rodar sobre si mismo para apagar las llamas.
• Es responsabilidad de todos ayudar a alguien que se esté quemando.
• Cubrirle con una manta antifuego y hacerle rodar por el suelo.
• No utilizar nunca un extintor sobre una persona.
• Una vez apagado el fuego, mantener a la persona tendida, procurando que no
se enfríe y proporcionarle asistencia médica.
 Cortes
• Los cortes producidos por la rotura de material de cristal son un riesgo común
en el laboratorio.
• Estos cortes se tienen que lavar bien, con abundante agua corriente, durante
10 minutos como mínimo.
• Si son pequeños y dejan de sangrar en poco tiempo, lavarlos con agua y jabón
y taparlos con una venda o apósito adecuados.
• Si son grandes y no paran de sangrar, requieren asistencia médica inmediata.
Derrame de productos químicos sobre la piel

• Los productos químicos que se hayan vertido sobre la piel han de ser lavados
inmediatamente con agua corriente abundante, como mínimo durante 15
minutos.
• La rapidez en el lavado es muy importante para reducir la gravedad y la
extensión de la herida.
• Proporcionar asistencia médica a la persona afectada.
 Derrame de ácidos sobre la piel

• Cortar lo más rápidamente posible la ropa.

• Lavar con agua corriente abundante la zona afectada.
• Neutralizar la acidez con bicarbonato sódico durante 15-20 minutos.
• Retirar el exceso de pasta formada, seca y cubrir la parte afectada con
linimento óleo-calcareo o producto similar.
 Derrame de álcalis sobre la piel

• Lavar la zona afectada con agua corriente abundante

• Aclararla con una disolución saturada de ácido bórico o con una disolución de
ácido acético al 1%.
• Secar y cubrir la zona afectada con una pomada de ácido tánico.
 Salpicaduras en los ojos

• En este caso el tiempo es esencial (menos de 10 segundos). Cuanto antes se

lave el ojo, menos grave será el daño producido.
• Lavar los dos ojos con agua corriente abundante durante 15 minutos como
mínimo en una ducha de ojos o con un frasco para lavar los ojos.
• Es necesario mantener los ojos abiertos con la ayuda de los dedos para
facilitar el lavado debajo de los párpados.
• Es necesario recibir asistencia médica, por pequeña que parezca la lesión.
 En caso de ingestión de productos químicos

• Antes de cualquier actuación concreta pedir asistencia médica.

• Si el sujeto está inconsciente, ponerlo en posición inclinada, con la cabeza de
lado, y colocar su lengua hacia fuera.
• Si está consciente, mantenerlo levantado y procurar que no tenga frío. No
dejarlo sólo en ningún momento.
• No provocar el vómito si el producto ingerido es corrosivo.
En caso de inhalación de productos químicos
• Llevar inmediatamente la persona afectada a un sitio con aire fresco.
• Requerir asistencia médica lo antes posible.
• Al primer síntoma de dificultad respiratoria, iniciar la respiración artificial boca
a boca.
• Tratar de identificar el vapor tóxico. Si se trata de un gas, utilizar el tipo
adecuado de máscara para gases durante el tiempo que dure el rescate del
accidentado.
• Si la máscara disponible no es la adecuada, será necesario aguantar la
respiración el máximo posible mientras se esté en contacto con los vapores
tóxicos.
En caso de accidente eléctrico

• Apartarse inmediatamente del equipo eléctrico sobre todo si se ha producido

vertido de liquido en su proximidad.
• En caso de descarga eléctrica, evitar tocar a quien la está sufriendo e intentar
desconectar el equipo (sin riesgo).
• Si no se puede, desconectar la corriente general.
• En último caso apartarlo con un palo de madera.
• Requerir asistencia médica lo antes posible.
Eliminación de residuos
 Eliminación de residuos

• Las medidas de seguridad no terminan al finalizar el experimento. La

eliminación inadecuada o la ausencia de identificación son causa frecuente de
contaminación ambiental y de accidentes.
• El depósito de residuos peligrosos, cristal roto, etc. en la papelera provoca
accidentes entre el personal de limpieza.
• El material de cristal roto se tirará en recipientes destinados especialmente a
este fin.
• Los papeles y otros desperdicios se tirarán en la papelera.
 Eliminación de residuos químicos

• Los productos químicos tóxicos se tirarán en contenedores especiales para

este fin.
• No tirar directamente al fregadero productos que reaccionen con el agua, que
sean inflamables (disolventes), que huelan mal, que sean lacrimógenos, o
productos que sean difícilmente biodegradables.
• Las sustancias líquidas o las disoluciones que puedan verterse al fregadero,
se diluirán previamente abriendo el grifo y dejando correr el agua.
• No tirar al fregadero productos o residuos sólidos que puedan atascarlas.
Depositarlos en recipientes adecuados.
 Eliminación de residuos biológicos
• Los residuos biológicos (sangre, tejidos animales o humanos y todo el material
que haya estado en contacto con ellos) se recogen en contenedores especiales
para su posterior eliminación por servicios especializados.
• Quedan exceptuados los sólidos punzantes o cortantes, que se recogen en
contenedores especiales.
MATERIAL BÁSICO
DE LABORATORIO
 Probetas
• Se utilizan para la determinación de volúmenes con exactitud relativa

• Pueden ser de vidrio y de plástico

• Volúmenes usuales ente 10 ml y hasta 2 Litros

 Matraces aforados
• Se utilizan para calcular volúmenes con gran exactitud, ya que estan
calibrados

• El volumen está indicado por una línea de enrase

• Cubren un rango de volúmenes entre 5 mL y 1 Litro

 Matraces de Erlenmeyer
• Se utilizan para la preparación de soluciones que se hayan de agitar

• NO SIRVEN PARA DETERMINAR VOLÚMENES

• Pueden ser de vidrio o plástico

• Volúmenes usuales ente 25 ml y hasta 2 Litros

 Matraces de Kitasato
• Se utilizan para crear vacío conectado a un sistema de succión

• Sirven para recoger en ellos líquidos de filtrado

• Para lavar sustancias sólidas o no solubles o para desgasear

soluciones
 Vasos de precipitados
• Se utilizan para disolver sustancias y como contenedores de líquidos

• NO SIRVEN PARA DETERMINAR VOLÚMENES

• Pueden ser de vidrio o plástico

• Volúmenes usuales ente 5 ml y hasta 3 Litros

 Botellas y frascos
• Se utilizan como contenedores de líquidos

• Los hay de color topacio, especiales para proteger de la luz el

contenido

• Su utilización depende de las características fisico-químicas de la

solucion a almacenar

• Pueden ser de vidrio o plástico

• El rango de volúmenes es muy amplio

 Frascos lavadores
• Se utilizan para enjuagar, añadir agua, lavar, etc

• Funcionan por presion manual

• Suelen contener agua destilada

• Para preparaciones de pureza más elevada, es imprescindible destilar

varias veces el agua o someterla a otros tratamientos de purificación
 Embudos
• Se utilizan para filtrar soluciones, lavar solutos, etc

• A presión atmosférica

• Por medio de un filtro de papel o lana de vidrio

 Pinzas para sujetar tubos
• Se utilizan para introducir y sacar tubos de ensayo de baños de
elevada temperatura
 Pipetas manuales
• Se utilizan para medir y transferir volúmenes de soluciones con buena
exactitud

• El volumen se determina por diversas graduaciones de enrase

• Existen desde 0,1 mL a 10 mL

• Pueden ser de vidrio, plástico o de un solo uso

• La pipeta se llena por aspiración bucal o mediante un sistema

mecánico (propipeta) siempre que sea tóxico o patógeno
 Propipeta
• Dispositivo mecánico de aspiración que se conecta a la parte superior
de la pipeta para evitar la ingestión accidental de sustancias toxicas

• Pueden ser manuales o automáticas

 Pipetas automáticas
• Son dispositivos mecánicos de alta precisión que permiten medir y
transferir muy pequeños volúmenes de soluciones con elevada
exactitud.

• Son un instrumento fundamental por lo que más adelante

describiremos con más detalle su funcionamiento.
 Puntas de pipetas automáticas
• Son los contenedores DESECHABLES del volumen que se mide con
dichas pipetas

• En general son de distintos volúmenes

• Codificadas pro colores: amarillo (2-20 y 20-200 μL) y azul (200-1000

μL)
 Tubos de ensayo
• Son contenedores de vidrio o plástico en los que se desarrollan las
reacciones bioquímicas

• Su capacidad se especifica indicando en mm el diámetro interno de la

abertura y la longitud del tubo (ejemplo 12 x 75 mL)
 Tubos eppendorf
• Son pequeños viales cónicos con tapa

• Se utilizan para centrifugar a gran velocidad pequeños volúmenes o

para alamcenar pequeñas cantidades de soluciones
 Gradillas
• Estructuras metálicas o de plástico que permiten la disposición vertical
de varios tubos de ensayo
 Cubetas de espectrofotómetro
• Pequeños contenedores con dos caras transparentes y paralelas en
las que se colocan las soluciones cuya absorción de luz o color se
desea determinar en el espectrofotómetro

• Existen de plástico, vidrio o cuarzo dependiendo de la longitud de onda

a la que se mida

• Los volúmenes varían entre 1 y 3 mL

• Se deben manipular siempre sujetando por las caras opacas

 Mechero de Bunsen
• Es un foco de calor, que utiliza gas de una instalación centralizada y se
utiliza para calentar soluciones

• Los tubos y recipientes de vidrio no se deben exponer directamente al

fuego, sino mediante un baño de líquido (agua o aceite) en un
recipiente adecuado
 Baño termostático
• Es un recipiente de agua de volumen relativamente grande (hasta 50 L)

• Su temperatura se puede regular y mantener constante

• Se utiliza para llevar a cabo reacciones que precisan control de

temperatura
 Imanes
• Son pequeñas barras magnéticas de teflón

• Se colocan en el fondo de los recipientes en los que se disuelve el

soluto

• Estas barras giran impulsadas por un rotor magnético situado debajo

del recipiente
 Agitador magnético
• Instrumento para agitar soluciones

• El agitador tiene un potente imán que gira y hace girar a un pequeño

imán en un recipiente
 Estufa de incubación
• Armario cerrado con control de la temperatura del aire para
incubaciones
 Centrífugas
• Aparatos que sirven para sedimentar partículas en suspensión
sometiéndolas a elevadas fuerzas centrífugas por giro a rápida
velocidad de un soporte
 Balanzas de precisión
• Se utilizan para pesar con exactitud los diversos reactivos y sustancias
 Practicas de Bioquímica y Biología Molecular-Práctica 1

PRECISIÓN DE LAS MEDIDAS

¡Ninguna medida efectuada en el laboratorio es EXACTA!

El error de una medida es la variación que existe entre el valor medido y

el valor correcto o exacto. Estos errores, aunque inevitables, pueden
minimizarse si se trabaja adecuadamente.
 PRECISION Y EXACTITUD

• Precisión: es la reproducibilidad del método analítico

• Exactitud: como de cerca se encuentra el valor de la medida y el valor real

• El objetivo para cada método bioquímico es tener buena exactitud y precisión

 SENSIBILIDAD Y ESPECIFIDAD

• Sensibilidad: es la medida de cuan pequeña puede ser el analito para que sea
detectado por el método de detección.

• Especifidad: se relaciona con cuan bueno es el ensayo para discriminar entre

el analito y las sustancias potencialmente contaminantes

• Control de calidad: cada laboratorio monitoriza los ensayos con controles

internos de muestras para reasegurar que el método funciona con las
muestras problema de pacientes

• Rangos de referencia: Los resultados bioquímicos son usualmente

comparados con un rango de referencia considerándose que éste representa
el estado sano normal.
 MEDIA Y DESVIACIÓN ESTÁNDAR

• Valor medio. La media es la suma de una serie de medidas, dividida por el nº

de medidas realizadas. (x= x1+x2+…+xn) / n

• Desviación estándar: Mide el grado de dispersión de los datos que forman la

media. En otras palabras, la desviación estándar es la variación de los datos
respecto a la media aritmética.
• A mayor desviación std. mayor es la dispersión en una población.

• Coeficiente de variación: es una medida de dispersión que sirve para

comparar variables a distintas escalas. Numéricamente se expresa como:
Cv = Desv. Std / media
 CURVAS DE CALIBRACIÓN

• Se utilizan para conocer la concentración de una sustancia en una disolución

problema.

• Se debe construir una curva patrón que muestre como varía una propiedad
física medible en función de la concentración de dicha sustancia.

• Se utilizan concentraciones control de concentraciones conocidas tratadas de

forma idéntica a la disolución a valorar.

• El valor obtenido en la cuantificación debe estar comprendido entre los valores

límites de las disoluciones conocidas.

• Se debe efectuar un control (blanco) en el que la sustancia problema es

sustituida por agua destilada
 CURVAS DE CALIBRACIÓN

• Ejemplo de una curva patrón para conocer la concentración de colesterol en

una muestra problema.
Practicas de Bioquímica y Biología Molecular-Práctica 1

PREPARACION DE SOLUCIONES
UNIDADES DE CONCENTRACION
 Definición de Solución o Disolución

Se denomina solución o disolución al resultado de

interponer totalmente las moléculas de un sólido en
un líquido o de un líquido en otro líquido.
 Componentes de una solución o disolución

El componente más abundante se llama solvente o disolvente y el

minoritario se conoce como soluto.
 Las disoluciones en Bioquímica

En el laboratorio tienen una gran importancia la correcta preparación y el

conocimiento de las propiedades fisico-químicas de soluciones:
- Todas las reacciones bioquímicas se producen en medio acuoso.
- Los líquidos biológicos son soluciones acuosas de metabolitos y sales
minerales.
- La inmensa mayoría de los reactivos que se emplean en el laboratorio
de análisis son soluciones.
- La preparación de soluciones requiere cálculos matemáticos para
conocer la concentración del soluto o la proporción soluto/solvente
- La expresión de resultados analíticos en Bioquímica Clínica casi
siempre requiere el cálculo de la concentración de moléculas
biológicas (metabolitos o analitos)
- En muchos casos, la determinación de la concentración de un analito
requiere la preparación previa de una solución de referencia de
concentración exactamente definida.
 Las disoluciones en Bioquímica

Disoluciones a partir de sólidos:

- Calcular la cantidad necesaria de soluto
- Pesar en un vaso de precipitados con una espátula
- Añadir una cantidad de disolvente inferior al volumen que se quiere
preparar
- Disolver el soluto con la ayuda de una varilla de vidrio o agitación
magnética
- Verter la disolución a un matraz aforado
- Añadir disolvente hasta que la parte inferior del menisco coincida
(enrasar) con la medida del volumen final de la disolución
 Las disoluciones en Bioquímica

Disoluciones a partir de líquidos:

- Calcular la cantidad necesaria de líquido

- Medir el volumen con una pipeta o probeta

- Verter el líquido en una probeta o matraz aforado

- Añadir disolvente hasta completar el volumen final de la disolución

 Expresión de la concentración de disoluciones

La concentración de una solución, es decir, la cantidad de soluto que hay en ella

por unidad de volumen, puede expresarse de diversas formas, siendo las más
usuales en el laboratorio:

- Molaridad
- Normalidad
- Relación Peso / Volumen
- Relación Volumen / Volumen
 MOLARIDAD

Molaridad (M): es igual al número de moles de soluto por litro de solución final.
Un mol es el peso molecular (PM) del soluto expresado en gramos.
Así una solución 1 M de cloruro sódico (ClNa, PM=58.5) es la que tiene 58.5 g/l
de solución.

Moles = gramos / Peso Molecular

g/ PM
Molaridad = n° moles/litro =
Volumen (L)
 MOLARIDAD

Cuando se consideran concentraciones pequeñas, como las que suelen presentar

los metabolitos en los seres vivos, se emplean submúltiplos de esta unidad:

UNIDAD CONCENTRACION EQUIVALENCIA

mmol mM 0.001 Molar (10-3 M)
µmol µM 0.001 mMolar (10-6 M)
nmol nM 0.001 µMolar (10-9 M)
pmol pM 0.001 nMolar (10-12 M)
 EJEMPLOS SIMPLES DE PREPARACION DE SOLUCIONES

- Calcular el peso p de soluto para preparar un volumen v de solución n M de un

soluto de peso molecular PM
- p = n x v (L) x PM (g)
- Añadir disolvente hasta llegar al volumen v

- Calcular la molaridad m de solución que contiene un peso p de un soluto de peso

molecular PM en un volumen v de disolución
- Moles de soluto: p (g) / PM
- m = [p/PM] / v
 NORMALIDAD

Normalidad (N): es igual al número de equivalentes (Eq) de soluto por litro de

solución final.
PM/ val
N=
Vol (L)
El peso equivalente de una sustancia es igual al peso molecular dividido por su
valencia.
 NORMALIDAD

Por ejemplo, 1 Eq de ácido sulfúrico (SO4 H2; PM = 98) es 98/2 (dos H+ cedidos
por el ácido) = 49. Sin embargo 1 Eq de ácido clorhídrico (C1H, PM=36) es 36/1 =
36.
No se suelen utilizar submúltiplos de N, indicándose con decimales (0.1 N, 10-5 N,
etc). Por el contrario, se emplea mucho el término mEq (= 0.001 Eq).
 EJEMPLOS SIMPLES DE PREPARACION DE SOLUCIONES

- Calcular el peso p de soluto para preparar un volumen v de solución n N de un

soluto de peso molecular w y valencia a
- p = [n x w /a (en gramos)] x v (en litros)
- Añadir disolvente hasta llegar al volumen v

- Calcular la normalidad n de solución que contiene un peso p de un soluto de

peso molecular w y valencia a en un volumen v de disolución
- Equivalentes de soluto: [p (en gramos) x a ] / w
- n = [p x a / w] / v
 RELACION PESO / VOLUMEN

Peso/volumen (p/v): se expresa el peso del soluto (en gramos o submúltiplos) por
unidad de volumen (litro o submúltiplos).

Las unidades más frecuentemente empleadas son:

- g/L
- mg/mL
- mg/cm3
- g/dL
- % p/v (= gramos / 100 mL de solución)

Este tipo de unidades se utiliza con mucha frecuencia en la Bioquímica Clínica.

Sin embargo, la tendencia actual es la de expresar los resultados analíticos en
unidades de Molaridad.
 RELACION VOLUMEN / VOLUMEN

Volumen / volumen (v/v): se emplea cuando son dos líquidos los que se mezclan.
Las unidades que se emplean más frecuentemente son:
- mililitros/litro (mL/L)
- % v/v (Porcentaje de líquido minoritario en el total de la disolución)
- P/P (Partes de líquido minoritario en partes totales de disolución)
- P : P (Partes de líquido A + partes de líquido B)
 EJEMPLOS SIMPLES DE PREPARACION DE SOLUCIONES

- Preparar un volumen v de una solución de concentración c a partir de una

solución de concentración c’

- Si se lleva un volumen v de una solución de concentración c hasta un volumen v’

con agua, cuál será la concentración c’ resultante?

¡¡Nº moles es el mismo!!

v x c = v’ x c’
1 2

v’ = v x c /c’ c’ = v x c / v’
 EJEMPLOS SIMPLES DE RELACION VOLUMEN / VOLUMEN

- mililitros/litro: 25 mL líquido A / L de disolución

- Mezclar 25 mL de líquido A y 975 mL de agua

- % v/v: Solución de A al 3 % v/v

- Mezclar 30 mL de A y 970 mL de agua

- P/P: Solución 3/5 de líquido A en agua

- Mezclar 600 mL de líquido A y 400 mL de agua

- P:P : Solución 3:5 de líquido A en agua

- Mezclar 300 mL de líquido A y 500 mL de agua