Centro Médico Nacional de Occidente

Hospital de Especialidades
Servicio de Hematología
Sesión monográfica: Citometría hemática
Ponente: Dr. Jaime David Macedo Reynada
Residente de Tercer Año
 Biometría hemática completa, citología hemática, citometría hemática

 Estudio que analiza las variaciones cuantitativas y

morfológicas de los elementos constituyentes de la
Introducción sangre, y aporta datos clínicos para auxiliar al médico
en la formulación de un diagnóstico.

Borbolla E. José Rafael. Principios de Hematología Bases y Clínica, Ed. Masson Doyma 2010
 Historia

1934 Conteo
1794 Observación de electrónico mediante
glóbulos rojos detección
mediante lentes fotoeléctrica de la luz
rudimentarios dispersada.

S XIX Observación de 1956 Contador

plaquetas y automático de células
subpoblaciones de sanguíneas Coulter A.
leucocitos –tinción
con anilinas-

Borbolla E. José Rafael. Principios de Hematología Bases y Clínica, Ed. Masson Doyma 2010
 Orden médica

Recolección de la muestra

Trasporte de la muestra al
Etapas del laboratorio
procesamiento
Recepción de la muestra

Preparación de la muestra
para el análisis

Henry, El laboratorio en el Diagnóstico Clínico, Todd Sanford. Ed. Marban 2014

 Trasporte a la sección de
laboratorio correspondiente

Procesamiento de la muestra

Etapas del
procesamiento Reporte de resultados

Interpretación de resultados

Henry, El laboratorio en el Diagnóstico Clínico, Todd Sanford. Ed. Marban 2014

Etapa Preanalítica
 Factores a considerar etapa pre analítica

• Estado de • ¿Catéter central o • A menor

Paciente

Toma de muestra

Conservación
hidratación vena periférica? temperatura mayor
• Ejercicio físico • Estasis por duración
• Ingestión de torniquete • Conteo inmediato
alimentos grasos (2 mantenido óptimo
hrs) • No traumática • Nunca mayor a 48
• Tabaquismo, • Secuencia de tubos hrs
ansiedad. • Anticoagulante • Cambios
• Vacutainer morfológicos

Henry, El laboratorio en el Diagnóstico Clínico, Todd Sanford. Ed. Marban, 2014

Etapa Analítica
  Parámetro esencial
 Manual o automatizado
 Su confiabilidad depende de la adecuada dilución de la
Conteos muestra, distribución adecuada de las células y
celulares medición precisa.
 Serie roja: soluciones isotónicas. Mayor dilución.
 Plaquetas y serie blanca: diluyente que lise hematíes

Borbolla E. José Rafael. Principios de Hematología Bases y Clínica, Ed. Masson Doyma 2010
Wintrobe’s Clinical Hematology, 13th Edition, Lippincott Williams 2014
Cuantificación
manual

Hemocitómetros Wintrobe’s Clinical Hematology, 13th Ed Lippincott Williams, 2014

Wintrobe’s Clinical Hematology, 13th,Edition Lippincott Williams, 2014
 Impedancia Dispersión
eléctrica luminosa

Antígenos
Propiedades
Cuantificación de
ópticas
superficie
automatizada
Tinciones
citoquímicas

Borbolla E. José Rafael. Principios de Hematología Bases y Clínica, Ed. Masson Doyma 2010
 Sistema de medición no óptico, mide >6,000 células por segundo
en un intervalo de 15 segundos.

Se pasa una suspensión de células a través de un pequeño orificio,

simultáneamente con corriente eléctrica.

Las células a su paso por el orificio producen un cambio de

resistencia, determinado por el tamaño de la células.
Contador El sistema cuenta las células individuales y proporciona una
Automático de distribución de tamaños.

células sanguíneas:
Impedancia
(Coulter)

Wintrobe’s Clinical Hematology, 13th,Edition Lippincott

Williams, 2014
Borbolla E. José Rafael. Principios de Hematología Bases y Clínica, Ed. Masson Doyma 2010
 Contador automático de
células sanguíneas: Laser

Sistema de medición óptico

2 cámaras: Eritrocitos y Leucocitos

Eritrocitos: Partículas de >36 fl, también se realiza

recuento de plaquetas (2-20 fl)

Leucocitos: Agente lisante –destrucción de

membranas- lectura de núcleos (lectura en partículas
de >35 fl).

Lectura posterior de Hb libre en la mezcla. Borbolla E. José Rafael. Principios de Hematología Bases y Clínica, Ed. Masson Doyma 2010
 35 a 150 μL

Expresión de
antígenos

CD34

Diferencial de 5
partes

Células no
identificadas

Hasta 106
muestras/hora Wintrobe’s Clinical Hematology, 13th,Edition Lippincott Williams, 2014
 Histogramas

Wintrobe’s Clinical Hematology, 13th,Edition Lippincott Williams, 2014

Wintrobe’s Clinical Hematology, 13th,Edition Lippincott Williams, 2014
 • Eritrocitos
Parámetros • Hemoglobina
medidos: • Plaquetas
• Leucocitos

Parámetros Parámetros • Volumen corpuscular medio

• Ancho de distribucación eritrocitaria
obtenidos derivados: • Volumen plaquetario medio

• Hematocrito
Parámetros • Hemoglobina corpuscular media
calculados • Concentración de hemoglobina corpuscular
media.

Borbolla E. José Rafael. Principios de Hematología Bases y Clínica, Ed. Masson Doyma 2010
Etapa post analítica:
interpretación
Serie roja
 Índices eritrocitarios
primarios
• Hemoglobina
• Hematocrito
• Eritrocitos
Serie Roja
Índices eritrocitarios
Secundarios (Wintrobe)
• VCM
• HCM
• CMHC
Henry, El laboratorio en el Diagnóstico Clínico, Todd Sanford. Ed. Marban, 2014
  Es el volumen de eritrocitos en una
muestra, expresado como
porcentaje del volumen de sangre
total.
 Hombres: 47 ± 7%
 Mujeres 42 ± 6%

Serie roja:
Hematocrito Se relaciona con hiperviscosidad
Alterado en:
- Shock y hemorragia
- Exceso de anticoagulante
- Alteraciones eritrocitarias.

Henry, El laboratorio en el Diagnóstico Clínico, Todd Sanford. Ed. Marban, 2014

Wintrobe’s Clinical Hematology, 13th,Edition Lippincott Williams, 2014

  Volumen ocupado por los
eritrocitos en relación al
volumen total de sangre.
 Se expresa como un
porcentaje del total
Serie roja:  Conteo manual
Hematocrito  En desuso
 Centrifugación en tubos de
Wintrobe
 Microhematocrito
 Coeficiente de variación alto

CV: 1-3% Campuzano Maya, Del hemograma manual al hemograma de cuarta generación. Medicina & laboratorio, 2016
  Conteo electrónico
 Utiliza una fórmula:

Serie roja:
Hematocrito  Coeficiente de variación bajo
 Mayor precisión

CV: <1%
Campuzano Maya, Del hemograma manual al hemograma de cuarta generación. Medicina & laboratorio, 2016
  Utilidad clínica:
 Definición de poliglobulia
 Diagnóstico de anemia como prueba
adicional

 Variaciones:
Serie roja:  Volumen plasmático, hemoconcentración
Hematocrito y hemodilución
 Afecta a los índices eritrocitarios: VCM y
HCM

Campuzano Maya, Del hemograma manual al hemograma de cuarta generación. Medicina &
laboratorio, 2016
  Medición de proteína por espectofotometría:
propiedades ópticas
Serie roja:  Factores que afectan: errores en la dilución o
Hemoglobina incremento de la turbidez (lipemia,
proteinemia, leucocitosis, hemólisis).

Henry, El laboratorio en el Diagnóstico Clínico, Todd Sanford. Ed. Marban, 2014

Wintrobe’s Clinical Hematology, 13th,Edition Lippincott Williams, 2014

  Suma de todas las formas de
hemoglobina por unidad de
volumen.

Serie roja:  Lisis de eritrocitos:

 Cianometahemoglobina
Hemoglobina  Medición por espectrometría
a 540nm
 Método manual
 Hemoglobinómetro

Campuzano Maya, Del hemograma manual al hemograma de cuarta generación. Medicina & laboratorio, 2016
  Método manual
 Agente lisante: Solución de Drakbin (cianuro de
potasio y ferricianida de potasio)
 Pipeta de Sahli
 Espectrómetro

Serie roja:
Hemoglobina

Campuzano Maya, Del hemograma manual al hemograma de cuarta generación. Medicina & laboratorio, 2016
  Método automatizado
 Utiliza el mismo fundamento que
el proceso manual
 Hemoglobinómetro
Serie roja:  Lauril sulfato sódico:
Hemoglobina Metahemoglobina sódica de
lauril sulfato.
 Pico máximo de absorción de
555nm
Campuzano Maya, Del hemograma manual al hemograma de cuarta generación. Medicina & laboratorio, 2016
  Métodos manuales inadecuados
 Dilución de células en solución isotónica
 Relación eritrocitos:leucocitos >500:1
Conteo de  Corrección en caso de leucocitosis

eritrocitos  CV: <1%, manual: 11%

Borbolla E. José Rafael. Principios de Hematología Bases y Clínica, Ed. Masson Doyma 2010
 VCM

Descritos por Wintrobe en 1932

Índices Determinan el tamaño y el contenido de

eritrocitarios HCM hemoglobina de los eritrocitos

Clasificación de las anemias por Wintrobe

CMHC

Campuzano Maya, Del hemograma manual al hemograma de cuarta generación. Medicina & laboratorio, 2016
 Define los conceptos de
macrocitosis, normocitosis
y microcitosis

 Define el tamaño promedio de los eritrocitos

expresado en femtolitros (10 -15 L).
 Método manual
Índices
eritrocitarios: VCM=
Hematocrito (L/L) x 1000

Recuento de eritrocitos
VCM (1012/L)

 Método automatizado:
 A partir de los pulsos generados durante el
recuento

Seudomacrocitosis:
Campuzano Maya, Del hemograma manual al hemograma de cuarta
Hiperglucemia y
generación. Medicina & laboratorio, 2016 crioaglutininas
 Pseudohipercromía: Paraproteinemia e
hiperlipidemia (turbidez)

 Cantidad promedio de hemoglobina

en cada eritrocito, expresada en
picogramos (10 -12 g)

Índices  Fórmula
eritrocitarios: HCM=
Hemoglobina
Recuento de eritrocitos
10
HCM
Wintrobe’s Clinical Hematology, 13thEdition Lippincott Williams, 2014

Define los conceptos de hipercromía,

normocromía e hipocromía
  Concentración de Hb en un volumen de
eritrocitos, se expresa en g/dl.
 No mayor a 37 g/dL* (anemia falciforme,
hemoglobina C)
Índices
 Fórmula:
eritrocitarios: Hemoglobina
CMHC CMHC=
Hematocrito
10

Define los conceptos de hipercromía, Wintrobe’s Clinical Hematology, 13th Edition Lippincott Williams, 2014

normocromía e hipocromía
  Ancho de distribución eritrocitaria
 Representa el coeficiente de variación en el tamaño de
los eritrocitos y se expresa en porcentaje

 Útil en la caracterización de anemia microcíticas

 RDW alto en deficiencia de hierro (primer parámetro
Serie roja: RDW anormal)
 RDW normal en talasemia heterocigota
 Útil para identificar la fragmentación, aglutinación y
poblaciones dimórficas.

 11.5-14.5%

Wintrobe’s Clinical Hematology, 13th Edition Lippincott Williams, 2014

 Amplio: Anemias carenciales
Conservado: Talasemia, anemia de enfermedad
crónica
12.8%
 También conocido
como índice de
anisocitosis.
 RDW-CV: %
 RDW-SD: fL

DS del VCM
RDW= 10
VCM

Campuzano Maya, Del hemograma manual al hemograma de cuarta generación. Medicina & laboratorio, 2016
HCM y CMHC dependen en gran medida del RDW, si este es amplio, pierden su
valor.
VCM índice más importante para el diagnóstico de las anemias.
  Indica la tasa de producción
de eritrocitos por la MO
 Establece la proporción que
existe entre los eritrocitos
maduros y los reticulocitos y
se expresa como porcentaje.
Serie Roja:
 Método manual:
Reticulocitos  Tinción supravital
 Frotis de sangre periférica
 Microscopio
 Conteo de 1000 células

Wintrobe’s Clinical Hematology, 13th Edition Lippincott Williams, 2014

 Mide actividad eritropoyética de la
MO Patrón: regenerativo o
Recuento de reticulocitos arregenerativo

Método automatizado
• Naranja tiazol: RNA
• Patrón de fluorescencia:
• Alto
• Medio
• Bajo
Rango: 1-2.5%

Campuzano Maya, Del hemograma manual al hemograma de cuarta generación.

Medicina & laboratorio, 2016
  El % de reticulocitos corresponde a una cifra normal de
hematíes, si existe anemia con disminución del número
de hematíes, este valor debe ser corregido utilizando el
hematocrito.
Índice reticulocitario= Reticulocitos observados x Hto del
Serie Roja: paciente / 45)

Corrección de • La vida media del reticulocito varía de 1 día con Htc

normal a 2.5 días con Htc de 15, por lo que para calcular
reticulocitos el índice de producción reticulocitaria (IPR) se utiliza un
factor de corrección:
IPR= IR / Factor de corrección
• Se consideran arregenerativas las anemias con IPR < 2.
Henry, El laboratorio en el Diagnóstico Clínico, Todd Sanford. Ed. Marban, 2016
 Hombres Ambos Mujer

Eritrocitos 5.21 (4.5-5.9) 4.6 (4.1-5.1)

(106/mcL)

Serie roja: Valores Hb (g/dL) 15.7 (14-17.5) 13.8 (12.3-15.3)

eritrocitarios Hto (%) 46 (42-50) 40 (36-45)

normales en el VCM (fL) 88 (80-96)
adulto HCM (pg/erit) 30.4 (27.5-33.3)

CMHC (g/dL) 34.4 (33.4-35.5)

RDW (%) 13.1 (11.5-14.5)

Borbolla E. José Rafael. Principios de Hematología Bases y Clínica, Ed. Masson Doyma 2016
Serie blanca
  Su valoración inicial consiste en la interpretación
cuantitativa total y subtipos celulares.
 Conteo automatizado en cámara aparte de serie
roja, solución para lisis de membranas.
 Variación del 1-3%
Serie blanca Ejercicio físico, esteroides,
adrenalina, carbonato de litio.
Crioglobulinas
Plaquetas agregadas, GR
nucleados
Lisis incompleta de eritrocitos

Superficies extrañas (filtros,

Campuzano Maya, Del hemograma manual al hemograma de cuarta líneas de hemodiálisis)
generación. Medicina & laboratorio, 2016 Aglutinación secundaria a
contacto con superficie de Ig.
  Determina la cantidad de leucocitos en
sangre periférica por unidad de volumen
(μL, mm3 o L)
 Método manual
Recuento total  Pipeta de dilución de leucocitos
 Cámara de Neubauer
de leucocitos
 Microscopio
 Operador dependiente
 En desuso

Campuzano Maya, Del hemograma manual al hemograma de cuarta generación. Medicina & laboratorio, 2016
En México de 3 800 a 11 000

 Método electrónico
 El mismo método que para
eritrocitos.
Recuento total
 Coeficiente de variación bajo
de leucocitos  Precisión alta
 Define leucocitosis y leucopenia

Hurtado R. Semiología de la citometría hemática. Revista médica UNAM, 2010

  Determina las subpoblaciones de
leucocitos en sangre periférica.
Recuento  Método manual:
diferencial de  Frotis de sangre periférica
leucocitos  Cuantificación de leucocitos
 Expresado en porcentaje

Campuzano Maya, Del hemograma manual al hemograma de

cuarta generación. Medicina & laboratorio, 2016
Rodak, Atlas of Hematology 4th Ed.
  Método electrónico automatizado de segunda
generación
 Recuento de 3 partes:
 Linfocitos, monocitos y granulocitos
 Adición de compuestos químicos
 Reducción del citoplasma, complejidad nuclear
Recuento  Método de impedancia eléctrica
 Gráfica en histograma
diferencial de
leucocitos

Campuzano Maya, Del hemograma manual al hemograma de cuarta generación. Medicina & laboratorio, 2016
  Método electrónico automatizado de tercera
generación
 Recuento de 5 partes:
 Linfocitos, monocitos, neutrófilos, eosinófilos y
Recuento basófilos
diferencial de  Método de impedancia eléctrica
 Morfología nuclear, propiedades químicas y
leucocitos complejidad
 Peroxidasa, azul alcián y esterasas

Campuzano Maya, Del hemograma manual al hemograma de cuarta generación. Medicina & laboratorio, 2016
 Método electrónico automatizado 4ta
generación
 Recuento de 5 partes extendido:
 Linfocitos, monocitos, neutrófilos,
eosinófilos y basófilos
 Células CD34+, linfocitos T CD4 y T CD8
 Rayos láser + Anticuerpos monoclonales

Campuzano Maya, Del hemograma manual al hemograma de cuarta generación. Medicina & laboratorio, 2016
  Vida media en SP 7-10 hrs, en tejidos 24 hrs
Serie blanca:
 Almacenamiento en MO 15-20 veces el valor de SP
Neutrófilos
Neutrofilia 7,700/mcL.
• Inflamación
• Infección Neutropenia profunda
Neutropenia 1800/mcL
• Síndromes <500/mcL
Mieloproliferativos.

Campuzano Maya, Del hemograma manual al hemograma de cuarta generación. Medicina & laboratorio, 2016
Hurtado M et al Rev Fac Med UNAM 53(4) 2010
Serie blanca:
Linfocitos
Linfocitosis
>5,000/mcL

Linfopenia
<1,000/mcL
Wintrobe’s Clinical Hematology, 13th Edition Lippincott Williams, 2014
Hurtado M et al Rev Fac Med UNAM 53(4) 2010
Serie Blanca:  Trastornos clonales crónicos
 Trastornos clonales agudos
Monocitos Monocitosis
>1000/mcL
 Síndrome mielodisplásicos
 Neoplasias linfoides
 Enfermedad de tejido conectivo Monocitopenia
<400/mcL
 Infecciones por micobacterias.

George TI Hematology Am Soc Hematol Educ Program. 2012;2012:475-84.

 Eosinofilia
leve 500-
1500/mcL

Serie blanca: Eosinofilia

moderada
Eosinófilos 1500-500/mcL

Eosinofilia
grave
>5000/mcL

George TI Hematology Am Soc Hematol Educ Program. 2012;2012:475-84.

Serie Blanca: Basofilia >300/mcL
Basófilos • Inflamación
• Infección
• Endocrinopatía
• Neoplasia

George TI Hematology Am Soc Hematol Educ Program. 2012;2012:475-84.

 DIFERENCIA PORCENTAJE VALOR
L ABSOLUTO
Recuento Neutrófilos 50-70% 1 800- 7 500
diferencial de Linfocitos 20-40% 1 500 – 4 000
leucocitos: rangos Monocitos 2-8% 200 - 1000
de referencia Eosinófilos 1-4% 40 - 400
Basófilos 0.5-1% 10 - 200

Hurtado R. Semiología de la citometría hemática. Revista médica UNAM, 2010

Diagnostic algorithm for the workup of leukocytosis.

Tracy I. George Hematology 2012;2012:475-484

Plaquetas
  Fragmento celular de aprox. 2-4 micras de diámetro formada a
partir de los megacariocitos.
Plaquetas  VN: 150-450 mil plaquetas/mcL
 Variación diaria 10 – 20%
Coagulo
>2 hr en EDTA
Eritrocitos fragmentados
Wintrobe’s Clinical Hematology, 13th Edition Lippincott Williams, 2014 Contaminación bacteriana
  Determina la cantidad de
plaquetas en sangre periférica
por unidad de volumen (μL, mm3
o L)
 Método manual
Recuento total  Pipeta de dilución de eritrocitos
 Cámara de Neubauer
de plaquetas
 Microscopio
 Operador dependiente
 En desuso

Campuzano Maya, Del hemograma manual al hemograma de cuarta generación. Medicina & laboratorio, 2016
 Trombocitopenia espuria: Satelitismo
por EDTA, tromboaglutininas,
microcoagulación

 Método electrónico
 El mismo método que para
eritrocitos.
Recuento total  Coeficiente de variación bajo
de plaquetas  Precisión alta
 Define los términos de
trombocitosis y trombocitopenia

150 000 a 450 000/microl

Campuzano Maya, Del hemograma manual al hemograma de cuarta generación. Medicina & laboratorio, 2016
 Elevado: Destrucción  Define el tamaño promedio de las plaquetas,
periférica, aumento de
plaquetas reticuladas. expresado en femtolitros.
 Se obtiene por impedancia eléctrica
 Oscila entre 6.5-13.5fL
 Define microtrombocitos, normotrombocitos y
Volumen mactrotrombocitos
plaquetario
Hipertiroidismo,
medio Desordenes
mieloproliferativos,
EDTA (2 primeras hrs)

Hipoplasia de
megacariocitos,
Campuzano Maya, Del hemograma manual al Fármacos citotoxicos.
hemograma de cuarta generación. Medicina &
laboratorio, 2016
  Define el grado de variabilidad en el tamaño
de las plaquetas
 Se obtiene por fórmulas matemáticas
Amplitud de incorporadas a computadora.
distribución  Oscila entre 15.4% y 16.8%
plaquetaria
 Se encuentra elevado en síndromes
mieloproliferativos y en anemia perniciosa.

Campuzano Maya, Del hemograma manual al hemograma de cuarta generación. Medicina & laboratorio, 2016
 • Plaquetas recientemente liberadas a circulación
con ARN residual.
• Estimación de trombopoyesis (similar a
reticulocitos con eritropoyesis).
• Citometría de flujo:
Plaquetas: • Tinción con Naranja de tiazol
• Anticuerpos contra GP1b marcados con ficoentrina
Plaquetas
• VN: 3-20%
reticuladas • TIP 4.2x
TIP 4.2x
Hipertiroidismo
Recuperación de
mielotoxicidad por QT

Aplasia medular
Cirrosis hepática
¿Donadores frecuentes
Wintrobe’s Clinical Hematology, 13th Edition Lippincott Williams, 2014 de plaquetas?